ขั้นตอนของการแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของจุลชีววิทยาแอโรบิก สรีรวิทยาของจุลินทรีย์: คุณสมบัติทางวัฒนธรรมของแบคทีเรีย การแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์

นอกเหนือจากองค์ประกอบของสารอาหารแล้ว การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ยังขึ้นอยู่กับปัจจัยทางกายภาพและเคมี (อุณหภูมิ ความเป็นกรด การเติมอากาศ แสง ฯลฯ) นอกจากนี้ตัวบ่งชี้เชิงปริมาณของแต่ละตัวไม่เหมือนกันและถูกกำหนดโดยลักษณะการเผาผลาญของแบคทีเรียแต่ละกลุ่ม มีวิธีเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในอาหารที่เป็นของแข็งและของเหลวภายใต้สภาวะแบบแอโรบิก แบบไม่ใช้ออกซิเจน และสภาวะอื่นๆ

วิธีการแยกเชื้อบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์แอโรบิก เพื่อให้ได้โคโลนีที่แยกได้ ในระหว่างการใช้งาน วัสดุจะถูกกระจายเพื่อให้เซลล์แบคทีเรียอยู่ห่างจากกัน เพื่อให้ได้วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ จะมีการใช้วิธีการหลักสองกลุ่ม:

ก) วิธีการที่ใช้หลักการแยกเชิงกลของจุลินทรีย์

b) วิธีการขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางชีวภาพของจุลินทรีย์

วิธีการที่ใช้หลักการแยกทางกลของจุลินทรีย์

ร่อนด้วยไม้พายตามแนวทางของ Drigalski- รับประทานอาหารเลี้ยงเชื้อ 3 จานที่มีสารอาหารปานกลาง หยดวัสดุทดสอบลงบนถ้วยแรกด้วยห่วงหรือปิเปต แล้วใช้ไม้พายถูให้ทั่วพื้นผิวของวุ้นสารอาหาร จากนั้นไม้พายจะถูกย้ายไปยังถ้วยที่ 2 และวัฒนธรรมที่เหลืออยู่บนไม้พายจะถูกถูลงบนพื้นผิวของสารอาหาร จากนั้นไม้พายจะถูกถ่ายโอนไปยังถ้วยที่ 3 และการฉีดวัคซีนจะดำเนินการในลักษณะเดียวกัน บนแผ่นที่ 1 จำนวนอาณานิคมสูงสุดจะเพิ่มขึ้น บนแผ่นที่ 3 จำนวนขั้นต่ำจะเพิ่มขึ้น ขึ้นอยู่กับปริมาณของเซลล์จุลินทรีย์ในวัสดุทดสอบ แต่ละโคโลนีจะเติบโตบนจานใดจานหนึ่ง ซึ่งเหมาะสำหรับการแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์ออกจากกัน

วิธีของปาสเตอร์ (วิธีเจือจาง)ชุดของการเจือจางต่อเนื่องโดยปกติสิบเท่าจะถูกเตรียมจากวัสดุที่กำลังศึกษาในตัวกลางที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่เป็นของเหลวหรือสารละลายทางสรีรวิทยาในหลอดทดลอง ถัดไปหว่านวัสดุด้วยสนามหญ้า 0.5 มล. จากแต่ละหลอด สันนิษฐานว่าในหลอดทดลองบางหลอดจะยังมีจุลินทรีย์อยู่จำนวนหนึ่งซึ่งสามารถนับได้เมื่อหว่านบนอาหารเลี้ยงเชื้อแบบจาน วิธีนี้ทำให้สามารถคำนวณจำนวนจุลินทรีย์ในวัสดุที่กำลังศึกษาได้ (จำนวนจุลินทรีย์คือจำนวนโคโลนีบนแผ่นการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์สุดท้ายคูณด้วยอัตราการเจือจางของวัสดุ)

การหว่านแบบวนซ้ำ (การหว่านแบบจังหวะ)นำจานเพาะเชื้อหนึ่งจานที่มีวุ้นสารอาหารแล้วแบ่งออกเป็น 4 ส่วน โดยวาดเส้นแบ่งเขตที่ด้านนอกของด้านล่างของจาน วัสดุที่อยู่ระหว่างการศึกษาถูกนำเข้าสู่ภาคแรกโดยมีวงวนและเส้นคู่ขนานจะถูกลากไปทั่วทั้งภาคที่ระยะห่างประมาณ 5 มม. จากกัน ใช้วงเดียวกันโดยไม่เปลี่ยนตำแหน่งที่สัมพันธ์กับวุ้น ให้วาดเส้นเดียวกันบนส่วนอื่นๆ ของจาน ในบริเวณที่มีเซลล์จุลินทรีย์จำนวนมากตกอยู่บนวุ้น การเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จะอยู่ในรูปของแนวต่อเนื่อง ในส่วนที่มีเซลล์จำนวนน้อย แต่ละโคโลนีจะเติบโต นอกจากนี้สารละลายเจือจางของวัฒนธรรมผสมสามารถเทลงบนพื้นผิวของสื่อที่เป็นของแข็งในจานได้

วิธีการกรองขึ้นอยู่กับการส่งวัสดุภายใต้การศึกษาผ่านตัวกรองพิเศษที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางรูพรุนที่แน่นอนและแยกจุลินทรีย์ที่มีอยู่ตามขนาด วิธีการนี้ใช้เป็นหลักในการทำให้ไวรัสบริสุทธิ์จากแบคทีเรียรวมถึงการผลิตฟาจและสารพิษ (ในการกรอง - ฟาจบริสุทธิ์, สารพิษบริสุทธิ์)

วิธีการขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางชีวภาพของจุลินทรีย์

การสร้างสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการสืบพันธุ์

การสร้างระบบการควบคุมอุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการยับยั้งการคัดเลือกการสืบพันธุ์ของจุลินทรีย์ที่มาพร้อมกันที่อุณหภูมิต่ำและการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียไซโครฟิลิกหรือเทอร์โมฟิลิก จุลินทรีย์ส่วนใหญ่พัฒนาได้ดีที่อุณหภูมิ 35-37°C, Yersinia เติบโตได้ดีที่อุณหภูมิ 22°C, เลปโตสไปราปลูกที่อุณหภูมิ 30°C แบคทีเรียที่ชอบความร้อนเติบโตที่อุณหภูมินอกช่วงอุณหภูมิของแบคทีเรียสายพันธุ์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง (เช่น แบคทีเรีย Campylobacter ได้รับการเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 42°C)
การสร้างสภาวะสำหรับแอโรไบโอซิสหรือแอนแอโรไบโอซิส จุลินทรีย์ส่วนใหญ่เจริญเติบโตได้ดีเมื่อมีออกซิเจนในบรรยากาศ แบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนต้องเติบโตในสภาวะที่ไม่รวมถึงออกซิเจนในบรรยากาศ (สาเหตุของโรคบาดทะยัก, โรคพิษสุราเรื้อรัง, ไบฟิดัมแบคทีเรีย, แบคทีเรีย ฯลฯ ) จุลินทรีย์ Microaerophilic เติบโตได้เฉพาะในระดับออกซิเจนต่ำและระดับ CO2 สูงเท่านั้น (Campylobacter, Helicobacter)
วิธีการเพิ่มคุณค่า วัสดุที่อยู่ระหว่างการศึกษาได้รับการฉีดวัคซีนบนสารอาหารคัดเลือกที่ส่งเสริมการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางประเภท

วิธีการแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์

เนื่องจากจุลินทรีย์เจริญเติบโตอย่างแพร่กระจายในตัวกลางที่เป็นของเหลว เช่น กระจายไปทั่วสิ่งแวดล้อมได้ง่าย เป็นการยากที่จะแยกเซลล์จุลินทรีย์หนึ่งเซลล์ออกจากอีกเซลล์หนึ่ง ดังนั้น วิธีการของปาสเตอร์จึงไม่ได้ก่อให้เกิดวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์เสมอไป ดังนั้นปัจจุบันวิธีนี้จึงใช้เพื่อลดความเข้มข้นของจุลินทรีย์ในวัสดุเบื้องต้นก่อนนำไปเพาะเลี้ยงในตัวกลางที่เป็นของแข็งเพื่อให้ได้โคโลนีที่แยกได้

วิธีการแยกจุลินทรีย์ทางกลโดยใช้ตัวกลางธาตุอาหารแข็งวิธีการดังกล่าวรวมถึงวิธี Koch และวิธี Drigalski

วิธี Koch (วิธีการหว่านแบบลึก)

วัสดุทดสอบจะถูกใส่โดยใช้ลูปทางแบคทีเรียหรือปิเปตของปาสเตอร์ลงในหลอดทดลองที่มีสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงหลอมเหลว คนส่วนผสมในหลอดทดลองให้เท่าๆ กันโดยหมุนระหว่างฝ่ามือ หยดวัสดุเจือจางจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองที่สอง จากหลอดที่สองไปหลอดที่สาม ฯลฯ เนื้อหาของหลอดทดลองแต่ละหลอดเริ่มจากหลอดแรกเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ หลังจากที่อาหารเลี้ยงแข็งตัวในจานแล้ว ก็นำไปใส่ในเทอร์โมสตัทเพื่อการเพาะปลูก

ในการแยกจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจนโดยใช้วิธี Koch จำเป็นต้องจำกัดการเข้าถึงออกซิเจนในการเพาะเลี้ยง

เพื่อจุดประสงค์นี้ พื้นผิวของการเพาะเมล็ดลึกในจานเพาะเชื้อจะเต็มไปด้วยส่วนผสมปลอดเชื้อของพาราฟินและปิโตรเลียมเจลลี่ (1:1) คุณยังสามารถทิ้งหัวเชื้อที่ผสมอย่างทั่วถึงกับอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ในหลอดทดลองโดยตรงก็ได้

ในกรณีนี้ปลั๊กสำลีจะถูกแทนที่ด้วยยางหรือพื้นผิวของวุ้นจะเต็มไปด้วยส่วนผสมของพาราฟินและปิโตรเลียมเจลลี่ ในการสกัดโคโลนีที่เติบโตของจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจน ท่อจะได้รับความร้อนเล็กน้อยโดยการหมุนอย่างรวดเร็วเหนือเปลวไฟของหัวเผา วุ้นที่อยู่ติดกับผนังจะละลาย และคอลัมน์ก็เลื่อนเข้าไปในจานเพาะเชื้อที่เตรียมไว้ได้อย่างง่ายดาย ถัดไป คอลัมน์วุ้นจะถูกตัดด้วยมีดผ่าตัดที่ผ่านการฆ่าเชื้อ อาณานิคมจะถูกลบออกด้วยห่วงปลอดเชื้อหรือเครื่องตัดเส้นเลือดฝอยที่ปลอดเชื้อ และถ่ายโอนไปยังตัวกลางที่เป็นของเหลว

วิธีดริกัลสกี้ขึ้นอยู่กับการแยกทางกลของเซลล์จุลินทรีย์บนพื้นผิวของสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงในจานเพาะเชื้อ

เซลล์จุลินทรีย์แต่ละเซลล์ซึ่งจับตัวอยู่ในสถานที่แห่งหนึ่งเริ่มเพิ่มจำนวนขึ้นและก่อตัวเป็นอาณานิคม

สำหรับการหว่านโดยใช้วิธี Drygalsky จะใช้จานเพาะเชื้อหลายจานที่เต็มไปด้วยสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูง

หยดวัสดุทดสอบลงบนพื้นผิวของตัวกลาง

จากนั้นใช้ไม้พายที่ปลอดเชื้อ หยดนี้กระจายไปทั่วสารอาหาร (การหยอดหญ้า)

การหว่านสามารถทำได้โดยใช้การวนซ้ำของแบคทีเรีย ใช้ไม้พายหรือห่วงเดียวกันเพื่อหว่านครั้งที่สองที่สาม ฯลฯ ถ้วย ตามกฎแล้วในถ้วยแรกหลังจากเพาะเมล็ด การเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จะปรากฏในรูปแบบของการเคลือบอย่างต่อเนื่อง ในถ้วยถัดไป เนื้อหาของจุลินทรีย์จะลดลงและเกิดอาณานิคมที่แยกได้ ซึ่งสามารถแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ได้อย่างง่ายดายโดยการคัดกรอง .

ดังนั้นในภาคส่วนแรกจะได้รับการเติบโตอย่างต่อเนื่อง และตามจังหวะต่อมา อาณานิคมที่แยกออกมาจะเติบโตซึ่งเป็นตัวแทนของลูกหลานของเซลล์เดียว

เพื่อประหยัดสื่อและอุปกรณ์ คุณสามารถใช้หนึ่งถ้วยโดยแบ่งออกเป็นส่วนต่างๆ และหว่านตามลำดับด้วยริ้ว (วิธีทำลายริ้ว)

ในการดำเนินการนี้ ให้นำวัสดุมาเป็นวงแล้ววาดเส้นขนานเป็นชุดโดยใช้วัสดุนั้น อันดับแรกไปตามพื้นผิวของเซกเตอร์แรก จากนั้นจึงทำการเพาะเซกเตอร์อื่นๆ ทั้งหมดตามลำดับโดยมีเซลล์ที่เหลืออยู่ในลูป

ในแต่ละจังหวะที่ตามมา จำนวนเซลล์ที่เพาะจะลดลง

วิธีการแยกเชื้อบริสุทธิ์โดยใช้สารเคมีใช้ในการแยกเชื้อจุลินทรีย์ที่ทนต่อสารเคมีบางชนิด

ตัวอย่างเช่น การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถแยกเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคบริสุทธิ์ที่ทนต่อกรด ด่าง และแอลกอฮอล์ได้ ในกรณีนี้ วัสดุที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะเต็มไปด้วยสารละลายกรดหรือแอนติฟอร์มิน 15% ก่อนหยอดเมล็ด และเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 3...4 ชั่วโมง

หลังจากสัมผัสกับกรดหรือด่าง เซลล์ของวัณโรคบาซิลลัสจะยังคงมีชีวิตอยู่ และจุลินทรีย์อื่นๆ ทั้งหมดที่มีอยู่ในวัสดุทดสอบจะตาย หลังจากทำให้กรดหรือด่างเป็นกลางแล้ว วัสดุที่ผ่านการบำบัดจะถูกหว่านบนตัวกลางที่เป็นของแข็งและได้รับโคโลนีที่แยกได้ของเชื้อโรควัณโรค

วิธีการทางชีวภาพเพื่อแยกเชื้อจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคบริสุทธิ์ขึ้นอยู่กับการติดเชื้อของสัตว์ทดลองที่ไวต่อเชื้อโรคประเภทนี้ด้วยวัสดุทดสอบ

หากมีจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคอยู่ในวัตถุที่กำลังศึกษา สัตว์ทดลองจะป่วยและเสียชีวิต หลังจากการชันสูตรพลิกศพสัตว์ที่ตายแล้ว อวัยวะภายในจะถูกฉีดวัคซีนลงบนสื่อพิเศษ ซึ่งเป็นที่เพาะเลี้ยงจุลินทรีย์บริสุทธิ์ที่แยกออกมาได้เจริญเติบโต

ก่อนหน้า567891011121314151617181920ถัดไป

ดูเพิ่มเติม:

การแยกเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์

วัฒนธรรมบริสุทธิ์คือวัฒนธรรมที่ประกอบด้วยจุลินทรีย์ชนิดเดียวกันและได้มาจากลูกหลานของเซลล์เดียว การเพาะเลี้ยงที่บริสุทธิ์สามารถได้รับจากเซลล์จุลินทรีย์ดั้งเดิม ซึ่งแยกได้โดยใช้ไมโครมานิปูเลเตอร์ หรือจากโคโลนีที่แยกได้โดยการเพาะใหม่ลงในหลอดที่แยกจากกันโดยมีสารอาหาร

หากต้องการแยกวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ออก ให้ใช้วิธีการต่อไปนี้

1. วิธีดริกัลสกี้ในวิธีนี้ สารอาหารที่หลอมละลายจะถูกเทลงในจานเพาะเชื้อ 3 จาน หยดวัสดุทดสอบหนึ่งหยดลงในถ้วยแรกและกระจายไปทั่วพื้นผิวของสารอาหารด้วยไม้พายที่ปราศจากเชื้อ จากนั้นไม้พายจะถูกย้ายไปยังถ้วยที่สองและถ้วยที่สาม โดยถูวัสดุที่เหลือบนมันลงบนพื้นผิวของสื่อสารอาหาร

เมื่อหว่านโดยใช้วิธีนี้ อาณานิคมที่แยกได้จะเติบโตบนแผ่นที่สองและสาม โคโลนีที่เกิดขึ้นแต่ละโคโลนีจะถูกเพาะเลี้ยงย่อยในหลอดทดลองที่มีสารอาหารเพื่อให้ได้เชื้อจุลินทรีย์ที่บริสุทธิ์

2. วิธีจังหวะขนานด้วยวิธีนี้ วัสดุจะถูกกระจายไปทั่วพื้นผิววุ้นในจังหวะขนานกันในทิศทางเดียวโดยใช้วงจรแบคทีเรียวิทยา

จากนั้นหมุนถ้วย 90° ตีในทิศทางตั้งฉากกับจังหวะแรก ด้วยวิธีหว่านแบบนี้ วัสดุในลูปจะถูกใช้ไปทีละน้อย และอาณานิคมของจุลินทรีย์ที่แยกได้จะเติบโตตามแนวจังหวะที่ใช้เมื่อสิ้นสุดการหว่าน

3. วิธี Koch (วิธีการกรองในระดับความลึกของตัวกลาง)ด้วยวิธีนี้ วัสดุทดสอบหนึ่งวงวนทางแบคทีเรียวิทยาจะถูกใส่เข้าไปในหลอดทดลองที่มีวุ้น ละลายและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 43-45°C และผสมให้เข้ากัน

หลังจากนั้น วัสดุหนึ่งวงจะถูกถ่ายโอนจากหลอดทดลองนี้ไปยังหลอดทดลองที่สอง และจากนั้นไปยังหลอดทดลองที่สาม แบคทีเรียเจือจางที่เตรียมไว้จะถูกเทจากหลอดทดลองลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ หลังจากที่ตัวกลางแข็งตัวแล้ว ถ้วยจะถูกวางในเทอร์โมสตัท จำนวนโคโลนีในจานเลี้ยงเชื้อจะลดลงเมื่อวัสดุถูกเจือจาง

คำถามทดสอบในหัวข้อบทเรียน:

1. ธรรมชาติของการเจริญเติบโตของแบคทีเรียในตัวกลางสารอาหารที่เป็นของเหลว กึ่งของเหลว และของแข็ง

ลักษณะของโคโลนีของจุลินทรีย์

3. เม็ดสีจากแบคทีเรียและบทบาทของจุลินทรีย์

4.วิธีการแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์

วรรณกรรมที่ต้องเตรียมสำหรับบทเรียน:

วรรณกรรมพื้นฐาน:

1. จุลชีววิทยาทางการแพทย์ ไวรัสวิทยา และวิทยาภูมิคุ้มกัน เอ็ด เอเอ

โวโรบีอฟ. ม., 2547.

อ่านเพิ่มเติม:

1. แอล.บี. โบริซอฟ จุลชีววิทยาทางการแพทย์ ไวรัสวิทยา ภูมิคุ้มกันวิทยา ม., 2545.

2. โอเค พอซเดฟ. จุลชีววิทยาทางการแพทย์

ม., GEOTAR-สื่อ, 2548.

3. จุลชีววิทยาทางการแพทย์. ไดเรกทอรี เอ็ด วี.ไอ. Pokrovsky และ O.K. พอซเดวา ม. GEOTAR-MED, 1998.

บทที่ 5

หัวข้อบทเรียน: เอนไซม์จากแบคทีเรีย ศึกษาการทำงานของเอนไซม์ของจุลินทรีย์ การหายใจของแบคทีเรีย วิธีการปลูกฝังและแยกวัฒนธรรมไร้อากาศบริสุทธิ์ออกจากกัน

วัตถุประสงค์การเรียนรู้ของบทเรียน: ทำความคุ้นเคยกับเอนไซม์จากแบคทีเรีย

วิธีการศึกษาเพื่อตรวจสอบฤทธิ์ของเอนไซม์ของจุลินทรีย์ ทำความคุ้นเคยกับกระบวนการหายใจของแบคทีเรีย ศึกษาวิธีการปลูกและแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของสิ่งมีชีวิตไร้อากาศ

วัตถุประสงค์ของบทเรียน:

1. ทำความคุ้นเคยกับเอนไซม์จากแบคทีเรีย

วิธีการศึกษาเพื่อตรวจสอบฤทธิ์ของเอนไซม์ของจุลินทรีย์

3. ทำความคุ้นเคยกับกระบวนการหายใจของแบคทีเรีย

4. ศึกษาวิธีการปลูกและแยกวัฒนธรรมไร้อากาศบริสุทธิ์

เอนไซม์จากแบคทีเรีย

กระบวนการทางชีวเคมีทั้งหมดในเซลล์ของจุลินทรีย์ที่เกี่ยวข้องกับเมแทบอลิซึมการเจริญเติบโตและการสืบพันธุ์นั้นดำเนินการโดยการมีส่วนร่วมของเอนไซม์

เอนไซม์ถูกสังเคราะห์โดยเซลล์จุลินทรีย์และมีโครงสร้างที่ซับซ้อน พวกมันเป็นเพียงโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง (ทริปซิน เปปซิน ฯลฯ) หรือประกอบด้วยโปรตีน (อะโปเอ็นไซม์) ที่เกี่ยวข้องกับโคแฟกเตอร์ (โคเอ็นไซม์) โคเอ็นไซม์อาจเป็นสารอนินทรีย์ (โลหะ) หรือสารอินทรีย์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ

การจำแนกประเภทของเอนไซม์ขึ้นอยู่กับประเภทของปฏิกิริยาที่พวกมันเร่งปฏิกิริยา

เอนไซม์ทั้งหมดแบ่งออกเป็นหกประเภท:

1). ออกซิโดรีดักเตส- เอนไซม์ถ่ายโอนอิเล็กตรอน เอนไซม์เหล่านี้กระตุ้นปฏิกิริยารีดอกซ์ ซึ่งรวมถึงดีไฮโดรจีเนส (NAD, NADP, FAD), คาตาเลส และไซโตโครม

การโอนย้าย- เอนไซม์ที่ถ่ายโอนกลุ่มระหว่างโมเลกุลจากสารประกอบหนึ่งไปยังอีกสารประกอบหนึ่ง ซึ่งรวมถึงอะซิติลทรานสเฟอเรส, ฟอสโฟทรานสเฟอเรส, อะมิโนทรานสเฟอเรส

3). ไฮโดรเลส— เอนไซม์ที่ถ่ายโอนหมู่ฟังก์ชันโดยมีส่วนร่วมของน้ำ เอนไซม์ประเภทนี้รวมถึงเปปไทด์ไฮโดรเลส กลูโคซิเดส อะไมเลส เอสเทอเรส ไลเปส และฟอสฟาเตส

4). ไลเอส- เอนไซม์ที่กำจัดหรือเติมสารประกอบต่าง ๆ ที่มีพันธะคู่โดยไม่ต้องใช้น้ำ

เอนไซม์เหล่านี้ประกอบด้วยไพรูเวต ดีคาร์บอกซิเลสและอัลโดเลส

5). ไอโซเมอร์- เอนไซม์ที่ถ่ายโอนกลุ่มภายในโมเลกุลเพื่อสร้างรูปแบบไอโซเมอร์ เอนไซม์เหล่านี้ประกอบด้วยไอโซเมอเรสไตรไอโซฟอสเฟตและไอโซเมอเรสกลูโคสฟอสเฟต

ไลกาเซส (สังเคราะห์)- เอนไซม์ที่รวมสองโมเลกุลเข้ากับการทำลายพันธะฟอสเฟตพร้อมกันโดยใช้พลังงานของ ATP Ligases รวมถึงเอนไซม์ที่กระตุ้นการสังเคราะห์สารอินทรีย์ที่ซับซ้อนจากสารประกอบอย่างง่าย (asparagine synthetase, cocarboxylase)

กิจกรรมของเอนไซม์วัดเป็นหน่วยสากล (IU) 1 ME สอดคล้องกับปริมาณของเอนไซม์ที่แปลงซับสเตรตหนึ่งไมโครโมลต่อนาทีภายใต้สภาวะมาตรฐาน

ในแบคทีเรียมีเอ็นโดเอ็นไซม์และเอ็กโซไซม์

เอ็นโดเอ็นไซม์ตั้งอยู่ภายในเซลล์แบคทีเรียและกระตุ้นกระบวนการเผาผลาญภายในเซลล์ เอ็กโซไซม์ถูกปล่อยออกสู่สิ่งแวดล้อมภายนอกและทำหน้าที่สลายสารอาหารที่ซับซ้อน

เอนไซม์ก้าวร้าวแบคทีเรียก่อโรคมีกลุ่มเอนไซม์พิเศษที่เรียกว่า เอนไซม์ก้าวร้าว- พวกเขาทำหน้าที่อำนวยความสะดวกในการแทรกซึมและการแพร่กระจายของแบคทีเรียในเนื้อเยื่อของร่างกายโฮสต์และลดคุณสมบัติการป้องกันของมัน

เอนไซม์การรุกราน ได้แก่ ไฮยาลูโรนิเดส, นิวรามินิเดส, คอลลาเจนเนส, โปรตีเอส, ไฟบริโนไลซิน, เฮโมไลซิน, ลิวโคซิดิน

เอนไซม์ที่เป็นส่วนประกอบและเหนี่ยวนำได้เอ็นไซม์ที่ถูกสังเคราะห์โดยเซลล์ในอัตราคงที่ไม่ว่าจะมีซับสเตรตอยู่ในตัวกลางก็ตาม เรียกว่า รัฐธรรมนูญ. เหนี่ยวนำได้เอนไซม์ (ปรับตัว) จะเกิดขึ้นเมื่อมีสารตั้งต้นที่เหมาะสมในสิ่งแวดล้อมเท่านั้น

ตัวอย่างเช่น เอนไซม์ เบต้ากาแลคโตซิเดสเริ่มสังเคราะห์ได้ก็ต่อเมื่อมีการเติมคาร์โบไฮเดรตแลคโตสลงในสารอาหารซึ่งเอนไซม์นี้จะแตกตัวเป็นกลูโคสและกาแลคโตส

วิธีการตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ของจุลินทรีย์

ข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับการระบุวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแบคทีเรียที่แยกได้คือการกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับคาร์โบไฮเดรตและโปรตีน ( "หนังสือเดินทาง" ทางชีวเคมีของสายพันธุ์)

เพื่อระบุเอนไซม์ที่สลายคาร์โบไฮเดรต (เอนไซม์ saccharolytic)ใช้สื่อการวินิจฉัยที่แตกต่างกันของ Hiss

สื่อ Hiss ประกอบด้วยน้ำเปปโตน, ตัวบ่งชี้ pH, สารลอยสำหรับรวบรวมก๊าซ และหนึ่งในคาร์โบไฮเดรต (กลูโคส, แลคโตส, มอลโตส, แมนนิทอล, ซูโครส, แป้ง ฯลฯ ) หากแบคทีเรียสลายคาร์โบไฮเดรต จะเกิดกรดขึ้นและสีของตัวกลางจะเปลี่ยนไปตามค่า pH ที่อยู่ในนั้น แบคทีเรียก่อโรคส่วนใหญ่จะสลายคาร์โบไฮเดรตให้กลายเป็นกรดเท่านั้น บางชนิดหมักคาร์โบไฮเดรตเพื่อผลิตกรดและก๊าซ (CO2)

ในขณะเดียวกัน สีของตัวกลางจะเปลี่ยนไปและฟองก๊าซจะปรากฏขึ้นในตัวลอย

กิจกรรมโปรตีโอไลติกของแบคทีเรียตัวชี้วัดการสลายโปรตีนเชิงลึกคือ การก่อตัวของอินโดล แอมโมเนีย ไฮโดรเจนซัลไฟด์เพื่อระบุสารที่เป็นก๊าซเหล่านี้ จะมีการเพาะเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ลงบนน้ำซุปเปปโตนเนื้อหรือน้ำเปปโตนในหลอดทดลองที่มีตัวบ่งชี้กระดาษพิเศษ

หากมีผลิตภัณฑ์ที่สลายตัว สีของตัวบ่งชี้ที่เกี่ยวข้องจะเปลี่ยนไป

กิจกรรมโปรตีโอไลติกของแบคทีเรียยังถูกกำหนดโดยการปลูกฝังวัฒนธรรมบริสุทธิ์ลงในคอลัมน์เจลาตินโดยพิจารณาจากการมีอยู่และธรรมชาติของการทำให้กลายเป็นของเหลวของตัวกลางเช่นในรูปแบบของต้นคริสต์มาสคว่ำ, ตะปู, ช่องทาง ฯลฯ .

การเผาผลาญพลังงาน

นี่คือชุดของปฏิกิริยาทางชีวเคมีซึ่งเป็นผลมาจากการก่อตัว (การสะสมพลังงาน) และการแยก (การใช้พลังงาน) ของพันธะพลังงานสูงในโมเลกุล ATP

ในแบคทีเรีย ATP สามารถสังเคราะห์ได้อันเป็นผลมาจากกระบวนการหมักและการหายใจ

การหมักวิธีการรับพลังงานที่เก่ากว่าและมีประสิทธิภาพน้อยกว่าซึ่งเป็นผลมาจากการสลายโมเลกุลกลูโคสทำให้เกิดโมเลกุล ATP 2 โมเลกุล ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายของการหมัก ได้แก่ คาร์บอนไดออกไซด์ น้ำ แอลกอฮอล์ และกรดอินทรีย์

กระบวนการนี้เกิดขึ้นโดยไม่ต้องมีส่วนร่วมของออกซิเจน

การหายใจเรียกว่ากระบวนการออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นของคาร์โบไฮเดรตด้วยการก่อตัวของ ATP, CO2 และโมเลกุลของน้ำ การสลายโมเลกุลกลูโคสหนึ่งโมเลกุลจะปล่อยอิเล็กตรอน 12 ตัวออกมา ซึ่งไหลผ่านสายโซ่ของเอนไซม์ทางเดินหายใจ ให้พลังงานสำหรับการสังเคราะห์โมเลกุล ATP 36 โมเลกุล การปล่อยอิเล็กตรอนออกจากห่วงโซ่ทางเดินหายใจนั้นกระทำโดยสารที่เรียกว่า ตัวรับอิเล็กตรอน.

สารเหล่านี้ได้แก่ ออกซิเจน ซัลเฟต ไนเตรต คาร์บอเนต ถ้าตัวรับอิเล็กตรอนตัวสุดท้ายคือออกซิเจนโมเลกุล จะเรียกว่าการหายใจ แอโรบิก- ในกรณีที่สารประกอบอื่นยอมรับอิเล็กตรอนอย่างจำกัด เรียกว่า การหายใจ แบบไม่ใช้ออกซิเจน.

ขึ้นอยู่กับประเภทของการหายใจ แบคทีเรียแบ่งออกเป็นสี่กลุ่มหลัก:

1. แอโรบิกบังคับ (เข้มงวด)เติบโตพร้อมกับการเข้าถึงออกซิเจนฟรี (สาเหตุของวัณโรค)

ไมโครแอโรไฟล์เติบโตที่ความเข้มข้นของออกซิเจนต่ำ (มากถึง 1%) และเพิ่มความเข้มข้นของคาร์บอนไดออกไซด์ (Haemophilus influenzae)

แอนนาโรบีเชิงปัญญาสามารถเจริญเติบโตได้ทั้งในที่ที่มีออกซิเจนและในสภาวะไร้ออกซิเจน (E. coli)

4. บังคับ (เข้มงวด) แบบไม่ใช้ออกซิเจนสามารถเติบโตได้เฉพาะในกรณีที่ไม่มีออกซิเจนในสิ่งแวดล้อมอย่างสมบูรณ์ (เชื้อโรคบาดทะยัก, โรคพิษสุราเรื้อรัง, โรคเนื้อตายเน่าก๊าซ)

อ่านเพิ่มเติม:

การแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์

วัฒนธรรมบริสุทธิ์คือวัฒนธรรมที่มีจุลินทรีย์ชนิดเดียวกัน การแยกแบคทีเรียบริสุทธิ์ออกเป็นขั้นตอนบังคับของการวิจัยทางแบคทีเรียในการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการของโรคติดเชื้อ ในการศึกษาการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในวัตถุด้านสิ่งแวดล้อมต่างๆ และโดยทั่วไปในการทำงานกับจุลินทรีย์

วัสดุที่กำลังตรวจสอบ (หนอง เสมหะ อุจจาระ เลือดและวัสดุอื่นๆ จากผู้ป่วย น้ำ ดิน อากาศ ผลิตภัณฑ์อาหาร ศพของสัตว์และมนุษย์ พาหะ) มักจะมีความสัมพันธ์กันของจุลินทรีย์

การแยกวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ทำให้สามารถศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาวัฒนธรรมชีวเคมีแอนติเจนและลักษณะอื่น ๆ ได้จำนวนทั้งสิ้นซึ่งกำหนดชนิดและประเภทของเชื้อโรคนั่นคือการระบุตัวตน

เพื่อแยกจุลินทรีย์บริสุทธิ์ออกจากกัน ใช้วิธีการที่สามารถแบ่งออกเป็นหลายกลุ่ม

วิธีการของปาสเตอร์– การเจือจางตามลำดับของวัสดุทดสอบในตัวกลางสารอาหารเหลวจนมีความเข้มข้นเท่ากับหนึ่งเซลล์ในปริมาตร (มีความสำคัญทางประวัติศาสตร์)

2. วิธี Koch ("การเดินสายไฟแบบแผ่น")– การเจือจางวัสดุทดสอบตามลำดับในวุ้นหลอมเหลว (อุณหภูมิ 48-500C) ตามด้วยการเทลงในจานเพาะเชื้อ โดยที่วุ้นจะแข็งตัว

ตามกฎแล้วจะทำการฉีดวัคซีนจากการเจือจางสามหรือสี่ครั้งล่าสุดซึ่งมีแบคทีเรียไม่กี่ตัวและต่อมาในระหว่างการเจริญเติบโตอาณานิคมที่แยกได้จะปรากฏบนจานเพาะเชื้อซึ่งเกิดจากเซลล์แม่เริ่มแรกหนึ่งเซลล์ จากโคโลนีที่แยกได้ที่อยู่ลึกลงไปในวุ้น การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียบริสุทธิ์จะได้มาจากการเพาะเลี้ยงย่อยบนอาหารเลี้ยงเชื้อสด

วิธีชูเควิช– ใช้เพื่อให้ได้วัฒนธรรมบริสุทธิ์ของโพรทูสและจุลินทรีย์อื่น ๆ ที่มีการเติบโตแบบ "คืบคลาน" วัสดุทดสอบถูกฉีดลงในน้ำควบแน่นที่ฐานของวุ้นเอียง จุลินทรีย์เคลื่อนที่ (โพรทูส) สามารถเจริญขึ้นในวุ้นที่เอียงได้ รูปแบบที่ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้จะยังคงเติบโตด้านล่างในบริเวณที่มีการฉีดวัคซีน

การปรับขอบด้านบนของวัฒนธรรมใหม่ จะทำให้คุณได้วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์

4. วิธีดริกัลสกี้– ใช้กันอย่างแพร่หลายในการปฏิบัติงานด้านแบคทีเรีย โดยที่วัสดุทดสอบจะถูกเจือจางในหลอดทดลองด้วยสารละลายทางสรีรวิทยาหรือน้ำซุปที่ปราศจากเชื้อ

เติมวัสดุหนึ่งหยดลงในถ้วยแรกแล้วเกลี่ยให้ทั่วพื้นผิวของตัวกลางโดยใช้ไม้พายแก้วฆ่าเชื้อ จากนั้นด้วยไม้พายเดียวกัน (โดยไม่ต้องเผาในเปลวไฟจากเตา) การหว่านแบบเดียวกันจะทำในถ้วยที่สองและสาม ในการหว่านแบคทีเรียแต่ละครั้ง ไม้พายจะเหลืออยู่บนไม้พายน้อยลงเรื่อยๆ และเมื่อหว่านบนถ้วยที่สาม แบคทีเรียจะถูกกระจายไปทั่วพื้นผิวของสารอาหารแยกจากกัน

หลังจากเก็บจานไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 1-7 วัน (ขึ้นอยู่กับอัตราการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์) ในจานที่สาม แบคทีเรียแต่ละตัวจะสร้างเซลล์โคลนขึ้นมาก่อตัวเป็นอาณานิคมที่แยกออกจากกัน ซึ่งถูกเพาะเลี้ยงลงไปบนวุ้นที่เอียงเพื่อสะสม วัฒนธรรมอันบริสุทธิ์

5. วิธีการของไวน์เบิร์กปัญหาพิเศษเกิดขึ้นเมื่อแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแอนแอโรบีที่มีภาระผูกพัน

หากการสัมผัสกับออกซิเจนโมเลกุลไม่ทำให้เซลล์ตายทันที การเพาะจะดำเนินการตามวิธี Drygalsky แต่หลังจากนั้นจานจะถูกวางในเครื่องแอนนาโรสแตททันที อย่างไรก็ตามมีการใช้วิธีผสมพันธุ์บ่อยกว่า สาระสำคัญอยู่ที่ข้อเท็จจริงที่ว่าการเจือจางวัสดุที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะดำเนินการในตัวกลางที่หลอมละลายและทำให้เย็นลงจนถึงอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นที่มีอุณหภูมิ 45-500C ทำการเจือจางติดต่อกัน 6-10 ครั้ง จากนั้นตัวกลางในหลอดทดลองจะถูกทำให้เย็นลงอย่างรวดเร็วและพื้นผิวถูกปกคลุมด้วยชั้นของส่วนผสมของพาราฟินและปิโตรเลียมเจลลี่เพื่อป้องกันไม่ให้อากาศทะลุเข้าไปในความหนาของตัวกลางของสารอาหาร

บางครั้งสารอาหารหลังจากหว่านและผสมแล้ว จะถูกถ่ายโอนไปยังหลอด Burri ที่ผ่านการฆ่าเชื้อหรือปิเปตปาสเตอร์ของเส้นเลือดฝอย ซึ่งปลายของหลอดจะถูกปิดผนึกไว้ ด้วยการเจือจางที่ประสบความสำเร็จ อาณานิคมของแอนแอโรบีที่แยกออกมาจะเติบโตในหลอดทดลอง หลอด Burri และปิเปตของปาสเตอร์

เพื่อให้แน่ใจว่าโคโลนีที่แยกออกมานั้นมองเห็นได้ชัดเจน จึงมีการใช้สารอาหารที่มีความชัดเจน ในการสกัดโคโลนีที่ไม่ใช้ออกซิเจนที่แยกได้ออกจากกัน ท่อจะถูกทำให้ร้อนเล็กน้อยโดยการหมุนด้วยเปลวไฟ ในขณะที่วุ้นที่อยู่ติดกับผนังจะละลาย และสิ่งที่อยู่ในหลอดในรูปของคอลัมน์วุ้นจะเลื่อนออกไปในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ

คอลัมน์วุ้นถูกตัดด้วยแหนบปลอดเชื้อและเอาโคโลนีออกโดยใช้ห่วง โคโลนีที่สกัดแล้วจะถูกวางในตัวกลางที่เป็นของเหลวซึ่งเอื้อต่อการพัฒนาของจุลินทรีย์ที่แยกได้ (เช่น ตัวกลาง Kitta-Tarozzi) อาหารวุ้นจะถูกเป่าออกจากท่อ Burri โดยส่งก๊าซผ่านปลั๊กสำลี

6. วิธีฮังเกต– เมื่อพวกเขาต้องการได้รับโคโลนีของแบคทีเรียที่แยกได้ซึ่งมีความไวต่อออกซิเจนสูงเป็นพิเศษ (แอโรบีที่เข้มงวด) พวกเขาใช้วิธีการท่อหมุนแบบ Hungate

ในการทำเช่นนี้ อาหารวุ้นที่หลอมละลายจะถูกฉีดวัคซีนด้วยแบคทีเรียด้วยกระแสคงที่ผ่านหลอดทดลองที่มีก๊าซเฉื่อยซึ่งปราศจากออกซิเจนเจือปน จากนั้นปิดหลอดทดลองด้วยจุกยางและวางในแนวนอนในแคลมป์ที่หมุนหลอดทดลอง ในขณะที่ตัวกลางกระจายทั่วผนังหลอดทดลองอย่างสม่ำเสมอและแข็งตัวเป็นชั้นบางๆ การใช้ชั้นบางๆ ในหลอดทดลองที่เติมส่วนผสมของก๊าซจะทำให้ได้โคโลนีที่แยกออกมาซึ่งมองเห็นได้ด้วยตาเปล่าได้ชัดเจน

การแยกเซลล์แต่ละเซลล์โดยใช้เครื่องไมโคร- micromanipulator เป็นอุปกรณ์ที่ช่วยให้คุณถอดเซลล์หนึ่งเซลล์ออกจากระบบกันสะเทือนโดยใช้ไมโครปิเปตหรือไมโครลูปแบบพิเศษ การดำเนินการนี้ถูกควบคุมภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ห้องชื้นได้รับการติดตั้งบนเวทีกล้องจุลทรรศน์ โดยวางสารเตรียมหยดแบบแขวนไว้

Micropipettes (micropoops) ได้รับการแก้ไขในที่ยึดของแท่นปฏิบัติการซึ่งการเคลื่อนไหวในมุมมองของกล้องจุลทรรศน์จะดำเนินการด้วยความแม่นยำระดับไมครอนด้วยระบบสกรูและคันโยก

นักวิจัยมองผ่านกล้องจุลทรรศน์ เพื่อเอาเซลล์แต่ละเซลล์ที่มีไมโครปิเปตออก และถ่ายโอนไปยังหลอดที่มีตัวกลางของเหลวปลอดเชื้อเพื่อให้ได้โคลนเซลล์

ก่อนหน้า17181920212223242526272829303132ถัดไป

ดูเพิ่มเติม:

วิธีการแยกเชื้อบริสุทธิ์ของแบคทีเรียแอโรบิก

ก) วิธีการของปาสเตอร์– มีความสำคัญทางประวัติศาสตร์ โดยจัดให้มีการเจือจางตามลำดับของวัสดุทดสอบในตัวกลางที่เป็นสารอาหารเหลวโดยใช้วิธีการกลิ้ง

ข) วิธีโคช์ส– วิธีการแบบจาน – ขึ้นอยู่กับการเจือจางตามลำดับของวัสดุทดสอบด้วยวุ้นเนื้อ-เปปโตน ตามด้วยการเทหลอดทดลองที่มีวัสดุเจือจางลงในจานเพาะเชื้อ

วี) วิธีดริกัลสกี้– เมื่อหว่านวัสดุที่มีการปนเปื้อนจุลินทรีย์อย่างมาก ให้ใช้ไม้พาย 2-3 ถ้วยในการหว่านตามลำดับ

ช) การหว่านแบบวนเป็นจังหวะขนาน.

วิธีการทางชีวภาพขึ้นอยู่กับคุณสมบัติทางชีวภาพของเชื้อโรค

ก) ทางชีวภาพ– การติดเชื้อในสัตว์ที่มีความไวสูงซึ่งจุลินทรีย์จะขยายตัวและสะสมอย่างรวดเร็ว

ในบางกรณี วิธีการนี้เป็นวิธีการเดียวที่ช่วยให้สามารถแยกวัฒนธรรมของเชื้อโรคออกจากผู้ป่วยได้ (เช่น ทิวลารีเมีย) ในกรณีอื่น ๆ จะมีความไวมากกว่า (เช่น การแยกโรคปอดบวมในหนูขาวหรือสารที่ก่อให้เกิดโรค) วัณโรคในหนูตะเภา)

ข) เคมี– ขึ้นอยู่กับความต้านทานต่อกรดของมัยโคแบคทีเรีย เพื่อปลดปล่อยวัสดุจากพืชที่มาพร้อมกับมัน
บำบัดด้วยสารละลายกรด

มีเพียงแบคทีเรียวัณโรคเท่านั้นที่จะเติบโต เนื่องจากจุลินทรีย์ที่ทนต่อกรดจะตายภายใต้อิทธิพลของกรด

วี) วิธีการทางกายภาพขึ้นอยู่กับความต้านทานของสปอร์ต่อความร้อน เพื่อแยกการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่สร้างสปอร์ออกมา
ของผสม วัสดุจะถูกให้ความร้อนที่ 80°C และปลูกเชื้อบนตัวกลางที่เป็นสารอาหาร มีเพียงสปอร์แบคทีเรียเท่านั้นที่จะเติบโต เนื่องจากสปอร์ของพวกมันยังมีชีวิตอยู่และทำให้เกิดการเจริญเติบโต

ช) วิธีชูเควิช– ขึ้นอยู่กับความคล่องตัวสูงของ Proteus vulgaris ซึ่งสามารถทำให้เกิดการเติบโตแบบคืบคลาน

วิธีการเพาะใหม่จากโคโลนีลงบนวุ้นและ MPB:

ก) การย้ายจากโคโลนีไปเป็นวุ้นเอียง

เปิดฝาจานเล็กน้อย นำส่วนหนึ่งของโคโลนีที่แยกออกมาออกด้วยห่วงที่เผาแล้วและเย็นแล้ว เปิดหลอดทดลองที่มีวุ้นลาดเอียงที่ปลอดเชื้อ โดยถือไว้ในมือซ้ายในตำแหน่งเอียง เพื่อให้คุณสามารถสังเกตพื้นผิวของจานได้ ปานกลาง.

ย้ายห่วงที่มีการเพาะเลี้ยงเข้าไปในหลอดทดลองโดยไม่ต้องสัมผัสกับผนัง ถูมันให้ทั่วตัวกลางที่เป็นสารอาหาร เลื่อนไปตามพื้นผิวจากขอบด้านหนึ่งของหลอดทดลองไปยังอีกด้านหนึ่ง ยกจังหวะขึ้นไปที่ด้านบนของการเพาะเชื้อแบบแนวกลาง หลอดทดลองปิดอยู่และจะมีการลงนามชื่อของจุลินทรีย์ที่ได้รับการฉีดวัคซีนและวันที่ของการฉีดวัคซีนโดยไม่ต้องปล่อย

ข) ย้ายจากอาณานิคมไปเป็นน้ำซุปเปปโตนเนื้อ

เทคนิคการเพาะซ้ำบน MPB นั้นโดยพื้นฐานแล้วเหมือนกับการหว่านบนอาหารแข็ง

เมื่อหว่านบน MPB ห่วงที่มีวัสดุอยู่จะถูกจุ่มลงในสื่อ หากวัสดุมีความหนืดและไม่สามารถเอาออกจากห่วงได้ ให้บดบนผนังของภาชนะแล้วล้างออกด้วยตัวกลางที่เป็นของเหลว วัสดุของเหลวที่เก็บรวบรวมด้วยปาสเตอร์ที่ปราศจากเชื้อหรือปิเปตแบบตวงจะถูกเทลงในตัวกลางที่เป็นสารอาหาร

จากการทำงานอิสระ นักเรียนควรรู้:

วิธีการแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์

2. วิธีการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์

สามารถ:

1. ทักษะในการปฏิบัติตามกฎเกณฑ์การป้องกันการแพร่ระบาดและข้อควรระวังด้านความปลอดภัย

ฆ่าเชื้อวัสดุ ดูแลรักษามือ

3.เตรียมการเตรียมจากโคโลนีของแบคทีเรีย

4. อาณานิคมด้วยกล้องจุลทรรศน์

5. จุลินทรีย์แกรมสเตน

บทเรียนที่ 8

หัวข้อ.

วิธีการแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ (ต่อ) การทำงานของเอนไซม์ของแบคทีเรียและวิธีการศึกษา

วิธีของปาสเตอร์ (จำกัดวิธีการเจือจาง)ประกอบด้วยการเจือจางต่อเนื่องกันหลายครั้งจากวัสดุที่กำลังศึกษาในตัวกลางที่เป็นสารอาหารเหลว ในการทำเช่นนี้ ให้หยดหัวเชื้อลงในหลอดทดลองที่มีตัวกลางของเหลวปลอดเชื้อ จากนั้นหยดจากหัวเชื้อจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองถัดไป และหลอดทดลองมากถึง 8...10 หลอดจะถูกฉีดด้วยวิธีนี้ ในการเจือจางแต่ละครั้ง จำนวนเซลล์จุลินทรีย์ที่เข้าสู่ตัวกลางจะลดลง และเป็นไปได้ที่จะได้รับการเจือจางดังกล่าว โดยในหลอดทดลองทั้งหมดที่มีตัวกลางจะมีเซลล์จุลินทรีย์เพียงเซลล์เดียวเท่านั้น ซึ่งการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์บริสุทธิ์จะ พัฒนา. เนื่องจากจุลินทรีย์เจริญเติบโตอย่างแพร่กระจายในตัวกลางที่เป็นของเหลว เช่น กระจายไปทั่วสิ่งแวดล้อมได้ง่าย เป็นการยากที่จะแยกเซลล์จุลินทรีย์หนึ่งเซลล์ออกจากอีกเซลล์หนึ่ง ดังนั้น วิธีการของปาสเตอร์จึงไม่ได้ก่อให้เกิดวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์เสมอไป ดังนั้นปัจจุบันวิธีนี้จึงใช้เพื่อลดความเข้มข้นของจุลินทรีย์ในวัสดุเบื้องต้นก่อนนำไปเพาะเลี้ยงในตัวกลางที่เป็นของแข็งเพื่อให้ได้โคโลนีที่แยกได้

วิธี Koch (วิธีการหว่านแบบลึก)วัสดุทดสอบจะถูกใส่โดยใช้ลูปทางแบคทีเรียหรือปิเปตของปาสเตอร์ลงในหลอดทดลองที่มีสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงหลอมเหลว คนส่วนผสมในหลอดทดลองให้เท่าๆ กันโดยหมุนระหว่างฝ่ามือ หยดวัสดุเจือจางจะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองที่สอง จากหลอดที่สองไปหลอดที่สาม ฯลฯ เนื้อหาของหลอดทดลองแต่ละหลอดเริ่มจากหลอดแรกเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ หลังจากที่อาหารเลี้ยงแข็งตัวในจานแล้ว ก็นำไปใส่ในเทอร์โมสตัทเพื่อการเพาะปลูก

ในการแยกจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจนโดยใช้วิธี Koch จำเป็นต้องจำกัดการเข้าถึงออกซิเจนในการเพาะเลี้ยง เพื่อจุดประสงค์นี้ พื้นผิวของการเพาะเมล็ดลึกในจานเพาะเชื้อจะเต็มไปด้วยส่วนผสมปลอดเชื้อของพาราฟินและปิโตรเลียมเจลลี่ (1:1) คุณยังสามารถทิ้งหัวเชื้อที่ผสมอย่างทั่วถึงกับอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ในหลอดทดลองโดยตรงก็ได้ ในกรณีนี้ปลั๊กสำลีจะถูกแทนที่ด้วยยางหรือพื้นผิวของวุ้นจะเต็มไปด้วยส่วนผสมของพาราฟินและปิโตรเลียมเจลลี่ ในการสกัดโคโลนีที่เติบโตของจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจน ท่อจะได้รับความร้อนเล็กน้อยโดยการหมุนอย่างรวดเร็วเหนือเปลวไฟของหัวเผา วุ้นที่อยู่ติดกับผนังจะละลาย และคอลัมน์ก็เลื่อนเข้าไปในจานเพาะเชื้อที่เตรียมไว้ได้อย่างง่ายดาย ถัดไป คอลัมน์วุ้นจะถูกตัดด้วยมีดผ่าตัดที่ผ่านการฆ่าเชื้อ อาณานิคมจะถูกลบออกด้วยห่วงปลอดเชื้อหรือเครื่องตัดเส้นเลือดฝอยที่ปลอดเชื้อ และถ่ายโอนไปยังตัวกลางที่เป็นของเหลว

วิธีดริกัลสกี้ขึ้นอยู่กับการแยกทางกลของเซลล์จุลินทรีย์บนพื้นผิวของสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงในจานเพาะเชื้อ เซลล์จุลินทรีย์แต่ละเซลล์ซึ่งจับตัวอยู่ในสถานที่แห่งหนึ่งเริ่มเพิ่มจำนวนขึ้นและก่อตัวเป็นอาณานิคม

สำหรับการหว่านโดยใช้วิธี Drygalsky จะใช้จานเพาะเชื้อหลายจานที่เต็มไปด้วยสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูง หยดวัสดุทดสอบลงบนพื้นผิวของตัวกลาง จากนั้นใช้ไม้พายที่ปลอดเชื้อ หยดนี้กระจายไปทั่วสารอาหาร (การหยอดหญ้า)

เพื่อประหยัดสื่อและอุปกรณ์ คุณสามารถใช้หนึ่งถ้วยโดยแบ่งออกเป็นส่วนต่างๆ และหว่านตามลำดับด้วยริ้ว (วิธีทำลายริ้ว) ในการดำเนินการนี้ ให้นำวัสดุมาเป็นวงแล้ววาดเส้นขนานเป็นชุดโดยใช้วัสดุนั้น อันดับแรกไปตามพื้นผิวของเซกเตอร์แรก จากนั้นจึงทำการเพาะเซกเตอร์อื่นๆ ทั้งหมดตามลำดับโดยมีเซลล์ที่เหลืออยู่ในลูป ในแต่ละจังหวะที่ตามมา จำนวนเซลล์ที่เพาะจะลดลง

วิธีการแยกเชื้อบริสุทธิ์โดยใช้สารเคมีใช้ในการแยกเชื้อจุลินทรีย์ที่ทนต่อสารเคมีบางชนิด ตัวอย่างเช่น การใช้วิธีนี้ทำให้สามารถแยกเชื้อมัยโคแบคทีเรียวัณโรคบริสุทธิ์ที่ทนต่อกรด ด่าง และแอลกอฮอล์ได้ ในกรณีนี้ วัสดุที่อยู่ระหว่างการศึกษาจะเต็มไปด้วยสารละลายกรดหรือแอนติฟอร์มิน 15% ก่อนหยอดเมล็ด และเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 3...4 ชั่วโมง หลังจากสัมผัสกับกรดหรือด่าง เซลล์ของวัณโรคบาซิลลัสจะยังคงมีชีวิตอยู่ และจุลินทรีย์อื่นๆ ทั้งหมดที่มีอยู่ในวัสดุทดสอบจะตาย หลังจากทำให้กรดหรือด่างเป็นกลางแล้ว วัสดุที่ผ่านการบำบัดจะถูกหว่านบนตัวกลางที่เป็นของแข็งและได้รับโคโลนีที่แยกได้ของเชื้อโรควัณโรค

ใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อกำหนดจำนวนจุลินทรีย์ที่มีชีวิตในดินและพื้นผิวธรรมชาติอื่นๆ การใช้งานไม่เพียงแต่ช่วยคำนึงถึงจำนวนจุลินทรีย์เท่านั้น แต่ยังช่วยประเมินความหลากหลายของพวกมันตามสัณฐานวิทยาของอาณานิคมด้วย

เก็บตัวอย่างดินโดยใช้ช้อนปลอดเชื้อ และทำการศึกษาในวันที่เก็บตัวอย่าง สาระสำคัญของวิธีการนี้คือการหว่านตัวอย่างดินที่กำลังศึกษาลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีความหนาแน่นสูงในจานเพาะเชื้อ จากนั้นจึงนับโคโลนีที่ปลูก เชื่อกันว่าแต่ละอาณานิคมเป็นผลมาจากการสืบพันธุ์ของเซลล์เดียว งานนี้ดำเนินการในสามขั้นตอน ได้แก่ การเตรียมสารเจือจาง การหว่านในจาน และการนับจำนวนโคโลนีที่โตแล้ว

การฉีดวัคซีนทำได้จากการเจือจางสารแขวนลอย ขึ้นอยู่กับจำนวนจุลินทรีย์ที่คาดหวังในสารตั้งต้นที่กำลังศึกษา การเจือจางจะทำในน้ำประปาปลอดเชื้อหรือสารละลายโซเดียมคลอไรด์ไอโซโทนิก ในระหว่างการทดลอง จะใช้ปัจจัยการเจือจางคงที่ ส่วนใหญ่มักจะทำการเจือจางทศนิยม

ตัวอย่างดินที่จะวิเคราะห์ (1-10 กรัม) ใส่ในขวดที่มีน้ำฆ่าเชื้อ 100 มล. แล้วเขย่า จากนั้นถ่ายโอนวัสดุทดสอบ 1 มิลลิลิตรพร้อมปิเปตปลอดเชื้อลงในหลอดทดลองที่มีน้ำฆ่าเชื้อ 9 มิลลิลิตร หากเจือจางวัสดุทดสอบไปแล้ว 100 ครั้ง จะได้อัตราส่วนเจือจาง 1:1000 สารแขวนลอยของการเจือจางนี้จะถูกผสมให้เข้ากันโดยนำสารแขวนลอยที่เกิดขึ้นไปใส่ในปิเปตแล้วปล่อยออกมา จากนั้นใช้ปิเปตอันเดียวกัน นำการเจือจางที่เกิดขึ้น 1 มิลลิลิตรแล้วโอนไปยังหลอดทดลองอันที่สอง - จะได้การเจือจาง 1:10,000 การเจือจางครั้งต่อไปจะถูกเตรียมในลักษณะเดียวกัน ระดับของการเจือจางจะกำหนดโดยจำนวนจุลินทรีย์โดยประมาณในตัวอย่าง: ยิ่งมีจุลินทรีย์ในสารตั้งต้นเริ่มต้นมากเท่าใด จำนวนการเจือจางก็จะยิ่งมากขึ้นเท่านั้น

การฉีดวัคซีนจะดำเนินการบนอาหารเลี้ยงเชื้อในจานเพาะเชื้อ ในการกำหนดจำนวนจุลินทรีย์ทั้งหมด จะใช้วุ้นเนื้อเปปโตนหรือเปปโตนปลา (MPA, RPA) เพื่อตรวจสอบปริมาณของเชื้อราในดิน จะใช้วุ้นสาโท (SA) เพื่อกำหนดจำนวนกลุ่มทางสรีรวิทยาต่างๆ และจุลินทรีย์บ่งชี้ด้านสุขอนามัย ใช้สารอาหารที่เหมาะสม อาหารวุ้นที่ละลายในอ่างน้ำเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ แต่ละชิ้นมีขนาด 20-30 มล. วางจานไว้บนพื้นผิวแนวนอนจนกระทั่งวุ้นแข็งตัว ใช้ปิเปตปลอดเชื้อ เทเจือจางที่เหมาะสมในปริมาณหนึ่ง (ปกติ 0.1-0.5 มล.) ซึ่งผสมให้เข้ากันก่อนหน้านี้แล้ว ลงบนพื้นผิวของแผ่นวุ้นในจานเพาะเชื้อ ปริมาตรนี้ถูกกระจายไปทั่วพื้นผิวของตัวกลางด้วยไม้พายที่ปลอดเชื้อ จากนั้นไม้พายนี้จะถูกส่งไปทั่วทั้งพื้นผิวของตัวกลางในถ้วยที่สองและสาม โดยที่ไม่มีการเติมหัวเชื้อ (วิธีการปลูกเชื้อแบบละเอียด)

จากการเจือจางแต่ละครั้งจะมีการเพาะเมล็ดแบบขนาน 4-6 อัน เมื่อฉีดยาเจือจางเดียวกันแบบขนาน คุณสามารถใช้ปิเปตปลอดเชื้อและไม้พายหนึ่งอันได้ ถ้วยที่มีสารผสมเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทที่ปรับให้เป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการพัฒนาของสิ่งมีชีวิตที่ตรวจพบ แบคทีเรียจะถูกนับในระหว่างการเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 30 °C หลังจากสามวัน ที่อุณหภูมิห้อง - หลังจากเจ็ดวัน การนับยีสต์และเห็ด - ที่อุณหภูมิห้องหลังจาก 310 วัน (ที่อุณหภูมิ 25 ° C ระยะเวลาการสังเกตเห็ดสามารถลดลงเหลือ 2-3 วัน)

จำนวนโคโลนีที่ปลูกในจานเพาะเชื้อจะถูกนับและคำนวณใหม่ต่อ 1 กรัม ผลลัพธ์ของการเพาะแบบขนานจะถูกสรุปและคำนวณจำนวนเฉลี่ยของโคโลนีที่ปลูกเมื่อเพาะจากการเจือจางนี้ อาณานิคมจะถูกนับโดยไม่ต้องเปิดจานเพาะเชื้อ

ความแม่นยำของวิธีการขึ้นอยู่กับจำนวนโคโลนีที่นับ ไม่ใช่จำนวนการจำลอง การผสมพันธุ์ที่ดีที่สุดถือเป็นการผสมพันธุ์ที่ผลิตได้ตั้งแต่ 50 ถึง 100 โคโลนีเมื่อหว่านบนอาหารที่เป็นของแข็ง หากจำนวนโคโลนีที่ปลูกน้อยกว่า 10 ผลลัพธ์เหล่านี้จะถูกละทิ้งและจะไม่ใช้ในการคำนวณจำนวนเซลล์ในสารตั้งต้นดั้งเดิม เป็นที่พึงประสงค์ว่าจำนวนโคโลนีทั้งหมดที่นับได้เมื่อหว่านจากการเจือจางที่กำหนดคืออย่างน้อย 300

จำนวนจุลินทรีย์ใน 1 กรัม (1 มล.) ของสารตั้งต้นเริ่มต้นคำนวณโดยใช้สูตร:

T = ก x ข x ค / ง

โดยที่ T คือจำนวนจุลินทรีย์ใน 1 กรัม a คือจำนวนอาณานิคมที่นับ b คือการทำให้เจือจางจากการเพาะเมล็ด c คือ 10 (หากหว่านสารแขวนลอย 0.1 มิลลิลิตรลงบนจาน) d คือมวล ของสารตั้งต้น (ดิน) ที่นำมาวิเคราะห์

การประมวลผลผลลัพธ์ทางสถิติสามารถทำได้โดยมีข้อผิดพลาดทางเทคนิคเพียงเล็กน้อยเท่านั้น ดังนั้นวิธีแบบถ้วยจึงต้องมีความสะอาดและแม่นยำสูงเมื่อดำเนินการทั้งหมด จำเป็นต้องปกป้องปิเปตและตัวกลางอย่างระมัดระวังจากการปนเปื้อนจากจุลินทรีย์แปลกปลอม เนื่องจากเซลล์ที่เข้าไปโดยไม่ได้ตั้งใจสามารถประเมินจำนวนจุลินทรีย์ในสารแขวนลอยทดสอบได้สูงเกินไป ควรเตรียมการเจือจางและการเพาะเมล็ดในกล่อง

วิธีที่อธิบายนี้ใช้ได้กับการนับแอโรบีและแอนแอโรบีแบบปัญญา เพื่อให้คำนึงถึงสภาวะไร้ออกซิเจนที่เข้มงวด จานเพาะเชื้อจึงถูกวางภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนหลังการฉีดวัคซีน

วิธีทางนิเวศวิทยาเพื่อศึกษาจุลินทรีย์ในดิน

วิธี Koch ใช้เพื่อกำหนดจำนวนแบคทีเรียทั้งหมด วัสดุทดสอบ 1 มล. จากการเจือจางที่เหมาะสมเทลงในจานเพาะเชื้อที่ว่างเปล่าและ 10 - 15 มล. ละลายและทำให้เย็นลงถึง 45 0 C MPA เทผสมกับของเหลวแล้วหมุนจานบนพื้นผิวโต๊ะ

หลังจากปลูกพืชแล้ว จะนับโคโลนีที่เติบโตบนพื้นผิวและในส่วนลึกของวุ้น เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ถ้วยจะวางคว่ำบนพื้นหลังสีดำ แต่ละอาณานิคมที่นับจะถูกทำเครื่องหมายด้วยเครื่องหมายบนกระจก มีการประเมินเฉพาะแผ่นเปลือกโลกที่มีอาณานิคม 30 ถึง 300 อาณานิคมเท่านั้น หากจานหนึ่งมีโคโลนีมากกว่า 300 โคโลนีเติบโต และไม่สามารถวิเคราะห์ซ้ำได้ ก็สามารถนับโคโลนีได้ภายใต้การส่องสว่างด้านข้างที่สว่างจ้าโดยใช้แว่นขยายและจานพิเศษที่มีตาราง

จำนวนอาณานิคมจะถูกนับอย่างน้อย 20 สี่เหลี่ยมโดยมีพื้นที่ 1 ซม. 2 ในตำแหน่งต่างๆบนจาน จำนวนโคโลนีเฉลี่ยต่อ 1 ซม. 2 คำนวณและคูณด้วยพื้นที่ของจาน

เมื่อนับโคโลนี สามารถใช้อุปกรณ์นับแบคทีเรียแบบพิเศษ PSB ได้

ผลการนับโคโลนีในแต่ละจานคือจำนวนแบคทีเรียต่อวัสดุทดสอบ 1 มิลลิลิตร (ซม. 3) หรือ 1 กรัม โดยคำนึงถึงการเจือจางด้วย จำนวนแบคทีเรียสุดท้ายถือเป็นค่าเฉลี่ยเลขคณิตของผลลัพธ์ของการนับโคโลนีบนจานที่ฉีดวัคซีนด้วยการเจือจางสองครั้งที่อยู่ติดกัน

ตัวอย่าง:เจือจาง 10 -1 - 250 โคโลนี เจือจาง 10 -2 - 23 โคโลนี

จำนวนแบคทีเรียทั้งหมด = 250 x 10 + 23 x 100/2 = 2,400 cfu/ml = 2.4 x 10 2 cfu/ml (หน่วยการสร้างโคโลนีต่อมล.)

ผลการวิจัยสามารถปัดเศษเป็นเลขนัยสำคัญได้ 2 - 3 ตัว

วิธีการไทเทรต

ใช้เพื่อกำหนดจำนวน SPM

ขั้นที่ 1:การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของวัสดุ หากจำเป็นให้เตรียมสารแขวนลอยเพื่อถ่ายเทจุลินทรีย์เข้าสู่สถานะของเหลว

ขั้นตอนที่ 2:เตรียมชุดเจือจาง

ขั้นตอนที่ 3:การหว่านปริมาณที่เลือกของวัสดุทดสอบ (100, 10, 1 มล.) และการเจือจาง 1 มล. ลงในอาหารเหลว เพื่อเพิ่มความแม่นยำของวิธีการ สามารถฉีดวัคซีนแต่ละปริมาตรขนานไปกับสารอาหารหลายๆ ส่วนได้ (การหว่านแบบสอง, สาม, ห้าแถว) ความเหมาะสมที่สุดคือการทำซ้ำสามเท่า (ความน่าเชื่อถือที่เพียงพอด้วยต้นทุนที่ค่อนข้างต่ำ)

ขั้นตอนที่ 4:โดยคำนึงถึงการเจริญเติบโตของสารอาหารที่เป็นของเหลวและการหว่านจากปริมาตรบวกไปยังอาหารที่เป็นของแข็ง

ขั้นตอนที่ 5:การจำแนกจุลินทรีย์ที่ปลูกบนอาหารที่เป็นของแข็ง ในกรณีนี้จะคำนึงถึงคุณสมบัติทางวัฒนธรรมและหากจำเป็นก็จะมีการศึกษาเพิ่มเติม (การศึกษาคุณสมบัติทางดีบุกสัณฐานวิทยาทางชีวเคมีและซีรัมวิทยา)

หากใช้วิธีการแบบแถวเดียว ผลลัพธ์จะแสดงเป็นไทเตอร์ของจุลินทรีย์ที่ต้องการ ซึ่งถือเป็นปริมาตรที่น้อยที่สุด (การเจือจางสูงสุด) ที่ยังพบอยู่

หากใช้วิธีการแบบหลายแถว ผลลัพธ์จะถูกบันทึกโดยใช้ตารางพิเศษที่ทำให้สามารถกำหนดไทเทอร์หรือดัชนี (TNI) โดยพิจารณาจากการรวมกันของปริมาตรบวกที่ทำให้เกิดการเติบโต

ความรู้เบื้องต้นเกี่ยวกับการใช้สีย้อมสวรรค์

การใช้ระบบแช่และคอนเดนเซอร์ในกล้องจุลทรรศน์

การพัฒนาวิธีการเพาะเลี้ยงของเหลวชีวภาพและสารอาหารที่เป็นของแข็ง

การพัฒนาวิธีการแบ่งย่อยแบบเศษส่วน

การค้นพบสาเหตุของโรคแอนแทรกซ์ อหิวาตกโรค วัณโรค และวัณโรค

ในช่วงปีเดียวกันนั้น โรงเรียนจุลชีววิทยาชาวเยอรมัน นำโดย ROBERT KOCH (1843 - 1910) ได้ก่อตั้งขึ้นและประสบความสำเร็จในการทำงาน Koch เริ่มการวิจัยในช่วงเวลาที่บทบาทของจุลินทรีย์ในสาเหตุของโรคติดเชื้อกำลังถูกตั้งคำถามอย่างจริงจัง เพื่อพิสูจน์ จำเป็นต้องมีเกณฑ์ที่ชัดเจน ซึ่งกำหนดโดย Koch และลงไปในประวัติศาสตร์ภายใต้ชื่อ "Henle-Koch triad" สาระสำคัญของทั้งสามมีดังนี้:

1) ควรตรวจพบเชื้อจุลินทรีย์ที่ต้องสงสัยในโรคที่กำหนดเท่านั้น และไม่ควรแยกจากโรคอื่นหรือจากบุคคลที่มีสุขภาพดี

2) จะต้องแยกจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคในวัฒนธรรมบริสุทธิ์

3) การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่บริสุทธิ์ควรทำให้เกิดโรคในสัตว์ทดลองที่ติดเชื้อซึ่งมีภาพทางคลินิกและพยาธิวิทยาคล้ายกับโรคในมนุษย์

การปฏิบัติแสดงให้เห็นว่าทั้งสามประเด็นมีความสำคัญสัมพัทธ์ เนื่องจากไม่สามารถแยกสาเหตุที่ทำให้เกิดโรคในวัฒนธรรมบริสุทธิ์และทำให้เกิดลักษณะโรคของมนุษย์ในสัตว์ทดลองได้เสมอไป นอกจากนี้ยังพบเชื้อโรคในคนที่มีสุขภาพดีโดยเฉพาะหลังเจ็บป่วย อย่างไรก็ตาม ในระยะแรกของการพัฒนาและการก่อตัวของจุลชีววิทยาทางการแพทย์ เมื่อจุลินทรีย์จำนวนมากที่ไม่เกี่ยวข้องกับโรคถูกแยกออกจากร่างกายของผู้ป่วย ทั้งสามกลุ่มมีบทบาทสำคัญในการระบุสาเหตุที่แท้จริงของโรค จากแนวคิดของเขา ในที่สุด Koch ก็พิสูจน์ได้ว่าจุลินทรีย์ที่ค้นพบก่อนหน้านี้ในสัตว์ที่เป็นโรคแอนแทรกซ์นั้นตรงตามข้อกำหนดของกลุ่มที่สามและเป็นสาเหตุที่แท้จริงของโรคนี้ ในระหว่างทาง Koch ได้สร้างความสามารถของแบคทีเรียแอนแทรกซ์ในการสร้างสปอร์

โคช์สมีบทบาทสำคัญในการพัฒนาวิธีการพื้นฐานในการศึกษาจุลินทรีย์ ดังนั้น เขาจึงได้แนะนำวิธีการปฏิบัติทางจุลชีววิทยาในการแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแบคทีเรียบนตัวกลางที่เป็นสารอาหาร เป็นวิธีแรกที่ใช้สีย้อมสวรรค์เพื่อทำให้เซลล์จุลินทรีย์เปื้อน และใช้เลนส์แช่และการถ่ายภาพไมโครสำหรับการศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์

ในปี พ.ศ. 2425 โคช์สได้พิสูจน์ว่าจุลินทรีย์ที่เขาแยกได้เป็นสาเหตุของวัณโรค ซึ่งต่อมาได้ชื่อว่าบาซิลลัสของโคช์ส ในปีพ. ศ. 2426 Koch และเพื่อนร่วมงานของเขาได้แยกเชื้อสาเหตุของอหิวาตกโรค - Vibrio cholerae (vibrio ของ Koch)

ตั้งแต่ปี พ.ศ. 2429 Koch ได้ทุ่มเทงานวิจัยทั้งหมดของเขาเพื่อค้นหายาที่มีประสิทธิภาพในการรักษาหรือป้องกันวัณโรค ในระหว่างการศึกษาเหล่านี้ เขาได้รับยาต้านวัณโรคตัวแรก - tuberculin ซึ่งเป็นสารสกัดจากการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียวัณโรค แม้ว่าวัณโรคจะไม่มีผลการรักษา แต่ก็สามารถนำไปใช้ในการวินิจฉัยวัณโรคได้สำเร็จ

งานทางวิทยาศาสตร์ของ Koch ได้รับการยอมรับทั่วโลก และในปี 1905 เขาได้รับรางวัลโนเบลสาขาการแพทย์

ด้วยวิธีการที่พัฒนาโดย Koch นักแบคทีเรียวิทยาชาวฝรั่งเศสและเยอรมันได้ค้นพบแบคทีเรีย สไปโรเชต และโปรโตซัวหลายชนิด ซึ่งเป็นสาเหตุของโรคติดเชื้อในมนุษย์และสัตว์ ในหมู่พวกเขามีเชื้อโรคของการติดเชื้อเป็นหนองและบาดแผล: staphylococci, streptococci, clostridia ของการติดเชื้อแบบไม่ใช้ออกซิเจน, E. coli และเชื้อโรคของการติดเชื้อในลำไส้ (แบคทีเรียไทฟอยด์และไข้รากสาดเทียม, แบคทีเรียโรคบิด Shiga), สาเหตุของการติดเชื้อในเลือด - spirochete ของการกำเริบ ไข้ เชื้อโรคในระบบทางเดินหายใจ และการติดเชื้ออื่นๆ อีกมากมาย รวมทั้งที่เกิดจากโปรโตซัว (พลาสโมเดีย มาลาเรีย โรคบิดอะมีบา ลิชมาเนีย) ช่วงนี้เรียกว่า “ยุคทอง” ของจุลชีววิทยา

บทบาทของนักวิทยาศาสตร์ในประเทศในการพัฒนาวิทยาศาสตร์จุลชีววิทยา (I.I. Mechnikov, D.I. Ivanovsky, G.N. Gabrichevsky, S.N. Vinogradsky, V.D. Timakov, N.F. Gamaleya, L.A. Zilber, P.F. Zdrodovsky, Z.V. Ermolyeva)

หนึ่งในผู้ก่อตั้งวิทยาภูมิคุ้มกันคือ I.I. MECHNIKOV (1845-1916) ผู้สร้างทฤษฎีภูมิคุ้มกันทำลายเซลล์หรือเซลล์ ในปี พ.ศ. 2431 เมชนิคอฟตอบรับคำเชิญของปาสเตอร์และเป็นหัวหน้าห้องทดลองที่สถาบันของเขา อย่างไรก็ตาม Mechniov ไม่ได้ทำลายความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับบ้านเกิดของเขา เขาไปเยือนรัสเซียหลายครั้ง และแพทย์ชาวรัสเซียหลายคนทำงานในห้องปฏิบัติการของเขาในปารีส ในหมู่พวกเขา ได้แก่ Y.Yu.Bardakh, V.A.Barykin, A.M.Bezredka, M.V.Weinberg, G.N.Gabrichevsky, V.I.Isaev, N.N.Klodnitsky, I.G.Savchenko, L.A. Tarasevich, V.A. Khavkin, Ts.V. ผู้มีส่วนสำคัญในการพัฒนาจุลชีววิทยา ภูมิคุ้มกันวิทยา และพยาธิวิทยาทั้งในประเทศและทั่วโลก

แม้จะมีความก้าวหน้าที่สำคัญในด้านการสร้างภูมิคุ้มกันต่อต้านการติดเชื้อ แต่แทบไม่มีใครรู้เกี่ยวกับกลไกของการพัฒนาเลย จุดเปลี่ยนคือการค้นพบ I.I. Mechnikov (1845-1916) สร้างโดยเขาที่เมสซีนาในปี 1882 ขณะที่ศึกษาปฏิกิริยาของตัวอ่อนปลาดาวต่อการนำหนามกุหลาบเข้าไป เป็นโอกาสอันน่ายินดีที่การสังเกตโดยบังเอิญตกอยู่ในจิตใจที่เตรียมพร้อมและนำ I.I. Mechnikov สู่การสร้างหลักคำสอนของ phagocytosis การอักเสบและภูมิคุ้มกันของเซลล์

ในปี พ.ศ. 2435 Mechnikov ตีพิมพ์ผลงานของเขาเรื่อง "การบรรยายเกี่ยวกับพยาธิวิทยาเปรียบเทียบของการอักเสบ" ซึ่งในฐานะนักคิดที่โดดเด่นเขาได้ตรวจสอบกระบวนการทางพยาธิวิทยาจากมุมมองของทฤษฎีวิวัฒนาการ ในปี 1901 หนังสือเล่มใหม่ของเขาเรื่อง "ภูมิคุ้มกันต่อโรคติดเชื้อ" ปรากฏขึ้นซึ่งสรุปผลการวิจัยหลายปีในสาขาภูมิคุ้มกัน

การอภิปรายที่เกิดขึ้นระหว่าง Mechnikov และผู้สนับสนุนของเขากับผู้ติดตามทฤษฎีทางร่างกายซึ่งมองว่าการกระทำของแอนติบอดีเป็นพื้นฐานของภูมิคุ้มกันได้รับความสำคัญเชิงสร้างสรรค์อย่างมาก การศึกษาแอนติบอดีเริ่มต้นด้วยงานของ P. Ehrlich จากนั้น J. Bordet ซึ่งดำเนินการในทศวรรษสุดท้ายของศตวรรษที่ 19

การมีส่วนร่วมของ PAUL EHRLICH (1854-1915) ต่อการพัฒนาภูมิคุ้มกันวิทยา ตลอดจนการก่อตัวและพัฒนาการของเคมีบำบัด เป็นสิ่งที่ประเมินค่ามิได้ นักวิทยาศาสตร์คนนี้เป็นคนแรกที่กำหนดแนวความคิดเกี่ยวกับภูมิคุ้มกันแบบแอคทีฟและพาสซีฟและเป็นผู้เขียนทฤษฎีภูมิคุ้มกันทางร่างกายที่ครอบคลุมซึ่งอธิบายทั้งที่มาของแอนติบอดีและปฏิสัมพันธ์กับแอนติเจน การทำนายของเออร์ลิชเกี่ยวกับการมีอยู่ของตัวรับเซลล์ที่มีปฏิสัมพันธ์กับแอนติเจนบางกลุ่มโดยเฉพาะ ได้รับการวิพากษ์วิจารณ์อย่างรุนแรงมาหลายปีแล้ว อย่างไรก็ตาม ได้รับการฟื้นคืนชีพขึ้นมาในช่วงครึ่งหลังของศตวรรษที่ 20 ตามทฤษฎีของเบอร์เน็ต และในระดับโมเลกุลได้รับการยอมรับในระดับสากล

I.I. Mechnikov เป็นหนึ่งในคนกลุ่มแรก ๆ ที่เข้าใจว่าทฤษฎีภูมิคุ้มกันของร่างกายและ phagocytic นั้นไม่ได้แยกจากกัน แต่เพียงเสริมซึ่งกันและกันเท่านั้น ในปี 1908 Mechnikov และ Ehrlich ได้รับรางวัลโนเบลร่วมกันจากผลงานด้านภูมิคุ้มกันวิทยา

การค้นพบของ Ehrlich:

1. การใช้เมทิลีนบลูในการรักษาโรคมาลาเรีย

2. การใช้ trypan red เพื่อรักษา trypanosoma

3. การค้นพบซัลวาร์ซาน (1907)

4. การพัฒนาวิธีการตรวจสอบฤทธิ์ของซีรั่มต้านพิษและศึกษาปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี

5. ทฤษฎีภูมิคุ้มกันของร่างกาย

ปลายศตวรรษที่ 19 ถูกทำเครื่องหมายด้วยการค้นพบอาณาจักรแห่งวีราที่สร้างยุคสมัย ตัวแทนคนแรกของอาณาจักรนี้คือไวรัสโมเสกยาสูบซึ่งติดเชื้อในใบยาสูบซึ่งค้นพบเมื่อวันที่ 12 กุมภาพันธ์ พ.ศ. 2435 โดย D.I IVANOVSKY พนักงานของภาควิชาพฤกษศาสตร์แห่งมหาวิทยาลัยเซนต์ปีเตอร์สเบิร์ก คนที่สองคือโรคปากและเท้าเปื่อย ไวรัสที่ทำให้เกิดโรคชื่อเดียวกันในสัตว์เลี้ยง ค้นพบในปี พ.ศ. 2441 โดย F. Leffler และ P. Frosch อย่างไรก็ตาม การค้นพบเหล่านี้ไม่สามารถชื่นชมได้ในเวลานั้น และแทบจะไม่มีใครสังเกตเห็นฉากหลังของความสำเร็จอันยอดเยี่ยมของวิทยาแบคทีเรีย

หัวหน้าโรงเรียนแบคทีเรียวิทยาแห่งมอสโกและหนึ่งในผู้นำของนักแบคทีเรียวิทยาชาวรัสเซียคือ G.N. GABRICHEVSKY (พ.ศ. 2403-2550) ซึ่งในปี พ.ศ. 2438 เป็นหัวหน้าสถาบันแบคทีเรียวิทยาที่มหาวิทยาลัยมอสโกเปิดทำการด้วยเงินทุนส่วนตัว เขาทำงานด้านการรักษาและป้องกันไข้อีดำอีแดงและไข้กำเริบโดยเฉพาะ ทฤษฎีสเตรปโทคอกคัสของเขาเกี่ยวกับต้นกำเนิดของไข้อีดำอีแดงในที่สุดก็ได้รับการยอมรับจากทั่วโลก Gabrichevsky เป็นผู้เขียน "Guide to Clinical Bacteriology for Doctors and Students" (1893) และตำราเรียน "Medical Bacteriology" ซึ่งมีการพิมพ์สี่ฉบับ จี.เอ็น. Gabrichevsky (1860-1907) แนะนำการบำบัดด้วยซีรั่มในรัสเซียและศึกษากลไกของภูมิคุ้มกันต่อไข้กำเริบ คอตีบ และไข้อีดำอีแดง

ศูนย์กลางหลักของโรงเรียนแบคทีเรียวิทยา Pererburg คือสถาบันเวชศาสตร์ทดลอง S.N.VINOGRADSKY ซึ่งมีชื่อเสียงไปทั่วโลกจากผลงานของเขาในสาขาจุลชีววิทยาทั่วไป ได้รับการแต่งตั้งเป็นหัวหน้าแผนกแบคทีเรียวิทยา โดยใช้วิธีการเลือกพืชผลที่เขาพัฒนา Winogradsky ค้นพบแบคทีเรียกำมะถันและเหล็กซึ่งเป็นแบคทีเรียไนตริไฟอิงซึ่งเป็นสาเหตุของกระบวนการไนตริฟิเคชั่นในดิน เขาก่อตั้งบทบาทของจุลินทรีย์ในการเกษตร

วี.ดี. TIMAKOV (1905-1977) เป็นหนึ่งในผู้ก่อตั้งหลักคำสอนของไมโคพลาสมาและแบคทีเรียรูปแบบ L ศึกษาพันธุศาสตร์ของจุลินทรีย์ แบคทีเรียและการป้องกันโรคติดเชื้อ

ในปี พ.ศ. 2477 V.D. Timakov ได้รับเชิญให้เข้าร่วมสถาบันจุลชีววิทยาและระบาดวิทยา Turmen ซึ่งเขาเป็นหัวหน้าแผนกผลิตวัคซีนและซีรั่ม อุบัติการณ์ของการติดเชื้อในลำไส้ยังคงสูงในสาธารณรัฐในขณะนั้น วี.ดี. Timakov กำลังปกป้องวิทยานิพนธ์ระดับปริญญาเอกของเขาเกี่ยวกับยาป้องกันการติดเชื้อในลำไส้ นักวิทยาศาสตร์รุ่นเยาว์คนนี้กำลังทำการศึกษาครั้งแรกเกี่ยวกับแบคทีริโอฟาจและไวรัสที่กรองได้ในประเทศเติร์กเมนิสถาน

ภายใต้การนำของ วี.ดี. Timakov เริ่มสร้างส่วนใหม่ของจุลชีววิทยาทางการแพทย์ - การศึกษาแบคทีเรียและไมโคพลาสมาในรูปแบบ L ทิศทางนี้เป็นความต่อเนื่องเชิงตรรกะของการศึกษารูปแบบการกรองซึ่ง V.D. Timakov เริ่มกิจกรรมทางวิทยาศาสตร์ของเขา สำหรับชุดการศึกษาเพื่ออธิบายบทบาทของแบคทีเรียรูปแบบ L และตระกูลไมโคพลาสมาในโรคติดเชื้อ V.D. Timakov ร่วมกับศาสตราจารย์ G.Ya. คาแกนได้รับรางวัลเลนินในปี 1974
หนึ่งในทิศทางหลักของกิจกรรมทางวิทยาศาสตร์ของ V.D. Timakova ทุ่มเทให้กับพันธุศาสตร์ของจุลินทรีย์ วี.ดี. Timakov พิจารณาว่าจำเป็นต้องใช้การวิเคราะห์ทางพันธุกรรมเพื่อแก้ไขปัญหาทางจุลชีววิทยาและระบาดวิทยาที่มีนัยสำคัญทางการแพทย์ และปัจจุบันทิศทางการทำงานด้านพันธุศาสตร์ของแบคทีเรียเป็นแนวทางหลักที่สถาบันระบาดวิทยาและจุลชีววิทยาตั้งชื่อตาม กามาลียา. กิจกรรมของวี.ดี. ความพยายามของ Timakova ในการสร้างพันธุศาสตร์ขึ้นใหม่นั้นไม่ได้จำกัดอยู่เพียงการทำวิจัยของเธอเองเท่านั้น เขาทำเงินจำนวนมหาศาลเพื่อสร้างพันธุกรรมขึ้นมาใหม่ทั่วประเทศของเรา
นอกจากความหลงใหลในงานของเขาแล้ว Vladimir Dmitrievich ยังมีจิตใจที่ชัดเจน เข้าใจชีวิต และความกล้าหาญ คุณสมบัติอย่างหลังแสดงให้เห็นอย่างเต็มที่ในการต่อสู้กับการค้นพบที่ "ยิ่งใหญ่" ที่ต่อต้านวิทยาศาสตร์ เช่น การค้นพบที่อ้างว่าไวรัสสามารถกลายเป็นแบคทีเรียได้

นักจุลชีววิทยาชาวรัสเซียผู้มีชื่อเสียง N.F.GAMALEYA (1859-1949) ซึ่งย้อนกลับไปในปี 1886 ได้ทำงานร่วมกับปาสเตอร์ในเรื่องโรคพิษสุนัขบ้า ร่วมกับเมชนิคอฟและบาร์ดาคได้ก่อตั้งสถานีแบคทีเรียวิทยาแห่งแรกในรัสเซีย ซึ่งมีการผลิตวัคซีนป้องกันโรคพิษสุนัขบ้าและผู้คนได้รับการฉีดวัคซีนป้องกันโรคพิษสุนัขบ้า N.F. Gamaleya เป็นผู้เขียนผลงานทางวิทยาศาสตร์มากมายเกี่ยวกับโรคพิษสุนัขบ้า อหิวาตกโรค และปัญหาอื่นๆ ของจุลชีววิทยาและภูมิคุ้มกันวิทยา

L.A. ZILBER (พ.ศ. 2437-2509) เป็นผู้ก่อตั้งทฤษฎีไวรัสเกี่ยวกับต้นกำเนิดของเนื้องอกเขาแยกสาเหตุที่เป็นสาเหตุของโรคไข้สมองอักเสบจากเห็บฟาร์อีสเทิร์น

ความก้าวหน้าในการศึกษาแอนติเจนของเนื้องอกเป็นแรงบันดาลใจให้แอล.เอ. ซิลเบอร์พยายามฉีดวัคซีนต้านเนื้องอก ซึ่งเขาเริ่มราวปี 1950 ร่วมกับ Z.L. Baidakova และ R.M. Radzikhovskaya ในสองรุ่น: เนื้องอก Brown-Pierce ในกระต่ายและมะเร็งเต้านมที่เกิดขึ้นเองในหนู

พี.เอฟ. ZDRODOVSKY (1890-1976) จัดการกับปัญหาโรคริกเก็ตเซียล มาลาเรีย โรคแท้งติดต่อ และการควบคุมภูมิคุ้มกัน

Zinaida Vissarionovna ERMOLYEVA เป็นผู้สร้างยาปฏิชีวนะในประเทศตัวแรก ในบรรดาความสำเร็จทั้งหมดของความก้าวหน้าทางวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี การค้นพบยาปฏิชีวนะและเพนิซิลินเป็นหลัก มีความสำคัญอย่างยิ่งอย่างไม่ต้องสงสัยในการรักษาสุขภาพของผู้คนและเพิ่มอายุขัยของพวกเขา ในบรรดานักวิทยาศาสตร์ผู้มีชื่อเสียงในประเทศของเราที่มีส่วนร่วมอย่างมากในการพัฒนาสาขาการแพทย์นี้ หนึ่งในสถานที่ชั้นนำที่เป็นของผู้สร้างยาปฏิชีวนะในประเทศตัวแรก นักจุลชีววิทยาที่โดดเด่น ผู้จัดงานด้านการดูแลสุขภาพที่มีความสามารถ ประชาชนที่มีชื่อเสียง รูป, ครูที่ยอดเยี่ยม, นักวิชาการของสถาบันวิทยาศาสตร์การแพทย์ของสหภาพโซเวียต, นักวิทยาศาสตร์ผู้มีเกียรติของ RSFSR, ผู้ได้รับรางวัลสหภาพโซเวียต Zinaida Vissarionovna Ermolyeva เธอยืนอยู่ที่จุดกำเนิดของเคมีแบคทีเรียทางการแพทย์และการศึกษายาปฏิชีวนะในประเทศของเราร่วมกับนักวิทยาศาสตร์คนอื่น ๆ เป็นบุคคลที่มีความสามารถในองค์กรที่ยอดเยี่ยมและมีพลังงานไม่สิ้นสุดซึ่งการทำงานที่ไม่รู้จักเหน็ดเหนื่อยและคุณสมบัติส่วนบุคคลที่ยอดเยี่ยมทำให้เธอได้รับความเคารพและยอมรับในระดับสากล

กิจกรรมทางวิทยาศาสตร์ที่สำคัญอย่างหนึ่งของ Zinaida Vissarionovna คือการศึกษาอหิวาตกโรค จากการศึกษาเชิงลึกที่ครอบคลุมเกี่ยวกับสัณฐานวิทยาและชีววิทยาของอหิวาตกโรคและไวบริโอที่คล้ายอหิวาตกโรค Z. V. Ermolyeva เสนอวิธีการใหม่ในการวินิจฉัยแยกโรคของจุลินทรีย์เหล่านี้

ในปีพ. ศ. 2485 เอกสารของ Z.V. Ermolyeva เรื่อง "Cholera" ได้รับการตีพิมพ์ซึ่งสรุปผลการศึกษา Vibrio cholerae เกือบ 20 ปี เอกสารนี้ให้วิธีการใหม่สำหรับการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ การรักษา และการป้องกันโรคอหิวาตกโรค
Zinaida Vissarionovna อุทิศส่วนสำคัญของงานทางวิทยาศาสตร์ของเธอให้กับการแยกและการศึกษาสารที่มีฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย สารชนิดแรกที่เรียกว่า "ไลโซไซม์" ถูกแยกโดย Z. V. Ermolyeva ร่วมกับ I. S. Buyanovskaya ย้อนกลับไปในปี 1929 จากผลการวิจัยเพิ่มเติมแสดงให้เห็นว่าไลโซไซม์พบได้ในเนื้อเยื่อหลายชนิดทั้งจากสัตว์และพืช

ในปี 1960 กลุ่มนักวิทยาศาสตร์ที่นำโดย Z.V. Ermolyeva เป็นครั้งแรกในประเทศของเรา ได้รับยาต้านไวรัส interferon ยานี้ใช้รักษาโรคไข้หวัดใหญ่ชนิดรุนแรงครั้งแรกในปี พ.ศ. 2505 และเป็นยาป้องกันโรค ปัจจุบันยานี้ใช้ในการป้องกันโรคไข้หวัดใหญ่และการติดเชื้อไวรัสทางเดินหายใจเฉียบพลันอื่นๆ รวมถึงการรักษาโรคไวรัสหลายชนิดในการปฏิบัติงานเกี่ยวกับดวงตาและผิวหนัง

Zinaida Vissarionovna อุทิศเวลามากกว่า 30 ปีในชีวิตของเธอ (พ.ศ. 2485-2517) ในการศึกษายาปฏิชีวนะ

ชื่อของ Z.V. Ermolyeva เชื่อมโยงอย่างแยกไม่ออกกับการสร้างเพนิซิลินในประเทศตัวแรกการพัฒนาวิทยาศาสตร์ของยาปฏิชีวนะและการใช้อย่างแพร่หลายในประเทศของเรา ผู้บาดเจ็บจำนวนมากในช่วงแรกของมหาสงครามแห่งความรักชาติจำเป็นต้องมีการพัฒนาอย่างเข้มข้นและการแนะนำเวชปฏิบัติทางการแพทย์ที่มีประสิทธิภาพสูงเพื่อต่อสู้กับการติดเชื้อที่บาดแผลโดยทันที ในเวลานี้ (พ.ศ. 2485) ที่ Z.V. Ermolyeva และเพื่อนร่วมงานของเธอที่ All-Union Institute of Epidemiology and Microbiology ได้พบผู้ผลิตเพนิซิลินที่กระตือรือร้นและแยกเพนิซิลินในประเทศตัวแรก - ครัสโตซิน ในปีพ.ศ. 2486 ห้องปฏิบัติการเริ่มเตรียมเพนิซิลินสำหรับการทดลองทางคลินิก

ต่อมาภายใต้การนำของ Z.V. Ermolyeva ยาปฏิชีวนะใหม่จำนวนมากถูกสร้างขึ้นและนำเข้าสู่การผลิตรวมถึง ecmolin, ecmonovocillin, bicillin, streptomycin, tetracycline; การเตรียมยาปฏิชีวนะแบบผสม (dipasfen, ericycline ฯลฯ ) ควรเน้นย้ำว่า Zinaida Vissarionovna มีส่วนร่วมอย่างแข็งขันในการจัดการผลิตยาปฏิชีวนะทางอุตสาหกรรมในประเทศของเรามาโดยตลอด