อย่างไรก็ตาม มีการนำ TLC เวอร์ชันแก๊สมาใช้ด้วย ใช้อัล 2 O 3 เนื้อละเอียด ฯลฯ หุ้มด้วยแก้วฟอยล์หรือแผ่น เพื่อรักษาความปลอดภัยของเลเยอร์ การใช้งาน หรืออื่นๆ อุตสาหกรรมผลิตบันทึกสำเร็จรูปโดยมีเลเยอร์แนบอยู่แล้ว ตัวชะมักเป็นของผสมระหว่างองค์กร สารละลาย, สารละลายน้ำ, สารก่อเชิงซ้อน ฯลฯ ขึ้นอยู่กับการเลือกใช้โครมาโตกราฟี ระบบ (องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่และนิ่ง) ในแยกเข้า-ออก

ขั้นพื้นฐาน กระบวนการอาจมีบทบาท

ในทางปฏิบัติ มักมีการดำเนินการหลายอย่างพร้อมกัน กลไกการแยก

ขึ้นอยู่กับตำแหน่งของแผ่นและทิศทางการไหลของตัวชะ จะมีการแยกแยะ TLC จากน้อยไปมาก จากมากไปน้อย และแนวนอน ตามเทคนิคการปฏิบัติงาน การวิเคราะห์ด้านหน้าจะมีความแตกต่างกัน (เมื่อส่วนผสมที่วิเคราะห์ทำหน้าที่เป็นเฟสเคลื่อนที่) และเวอร์ชันชะล้างที่ใช้กันทั่วไป TLC แบบ “วงกลม” (เมื่อสารละลายที่วิเคราะห์และสารละลายถูกป้อนตามลำดับไปที่กึ่งกลางของเพลต) และ TLC แบบ “ต้านวงกลม” (เมื่อสารละลายที่วิเคราะห์ถูกนำไปใช้ในวงกลมและตัวชะเคลื่อนจากขอบด้านนอกไปยังศูนย์กลางของ จาน), TLC ภายใต้ (เมื่อ -ตัวทำละลายภายใต้ถูกส่งผ่านชั้นที่กดอย่างแน่นหนา) เช่นเดียวกับ TLC ภายใต้เงื่อนไขของการไล่ระดับของอุณหภูมิองค์ประกอบ ฯลฯ ในสิ่งที่เรียกว่า โครมาโตกราฟี TLC สองมิติ กระบวนการนี้ดำเนินการตามลำดับในสองทิศทางตั้งฉากกันโดยมีความแตกต่างกัน สารชะซึ่งเพิ่มประสิทธิภาพในการแยกสาร เพื่อจุดประสงค์เดียวกัน จะมีการชะล้างหลายครั้งในทิศทางเดียวโดยมีส่วนประกอบของส่วนผสมที่จะแยกออกจากกัน สารกัมมันตภาพรังสีจะถูกตรวจจับโดยอัตโนมัติ (โดยการสัมผัสกับแผ่นที่ซ้อนทับไว้)

ยังใช้. และวิธีการตรวจจับแบบแอคทีฟ ภาพผลลัพธ์การกระจายตัวของโครมาโทกราฟี โซนที่เรียกว่า โครมาโตกราฟี (ดูรูป)

โครมาโตแกรมที่ได้จากการแยกส่วนผสมของส่วนประกอบสามส่วนโดยใช้วิธีชั้นบาง

ตำแหน่งโครมาโตกราฟี

โซนในโครมาโตแกรมมีลักษณะเฉพาะด้วยค่า R f - อัตราส่วนของเส้นทาง l i ที่เคลื่อนที่ผ่านศูนย์กลางของโซนขององค์ประกอบ i-th จากเส้นเริ่มต้นไปยังเส้นทาง l ที่เคลื่อนที่โดยตัวชะ: R f = l i /l ;

R f 1 ค่าของ R f ขึ้นอยู่กับสัมประสิทธิ์ การกระจาย () และอัตราส่วนของปริมาตรของเฟสเคลื่อนที่และอยู่กับที่

การแยกตัวใน TLC ได้รับอิทธิพลจากปัจจัยหลายประการ ได้แก่ องค์ประกอบและคุณสมบัติของตัวชะ ธรรมชาติ อุณหภูมิ ขนาดและความหนาของชั้น และขนาดของห้องเพาะเลี้ยง ดังนั้นเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่สามารถทำซ้ำได้ จึงจำเป็นต้องกำหนดเงื่อนไขการทดลองให้เป็นมาตรฐานอย่างระมัดระวัง การปฏิบัติตามข้อกำหนดนี้ทำให้คุณสามารถตั้งค่า R f ด้วยค่าสัมพัทธ์ได้ ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน 0.03 ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน R f จะเป็นค่าคงที่สำหรับรายการที่กำหนดและใช้สำหรับรายการหลัง

ปริมาณของส่วนประกอบในโครมาโตกราฟี โซนจะถูกกำหนดโดยตรงบนเลเยอร์ตามพื้นที่ของโซน (โดยปกติเส้นผ่านศูนย์กลางจะแตกต่างกันไปตั้งแต่ 3 ถึง 10 มม.) หรือความเข้มของสี ()

พวกเขายังใช้ระบบอัตโนมัติ เครื่องมือสแกนที่ใช้วัดการดูดกลืน การส่งผ่าน หรือการสะท้อนของแสง หรือโครมาโตกราฟี โซน โซนที่แยกออกจากกันสามารถขูดออกจากเพลตพร้อมกับชั้นได้ สามารถแยกส่วนประกอบออกเป็นสารละลาย และสามารถวิเคราะห์สารละลายโดยใช้วิธีที่เหมาะสม (การเรืองแสง การดูดซับของอะตอม ฟลูออเรสเซนต์ของอะตอม การวิเคราะห์เชิงรังสี ฯลฯ) ข้อผิดพลาดในการหาปริมาณมักจะอยู่ที่ 5-10%; ขีดจำกัดการตรวจจับสารในโซน -10 -3 -10 -2 μg (โดยใช้อนุพันธ์ที่มีสี) และ 10 -10 -10 -9 μg (โดยใช้ ) ข้อดีของ TLC: ความเรียบง่าย ความคุ้มทุน ความพร้อมใช้งานของอุปกรณ์ ความรวดเร็ว (ระยะเวลาในการแยกสาร 10-100 นาที) ความสามารถในการผลิตและประสิทธิภาพในการแยกสารสูง ความชัดเจนของผลการแยกสาร ความง่ายในการตรวจจับโครมาโตกราฟี โซน TLC ใช้สำหรับการแยกและการวิเคราะห์ทั้งแบบอินทรีย์และแบบ inorg in-in: เกือบทั้งหมดที่ไม่ใช่องค์กร โครมาโตกราฟีในเคมีสมัยใหม่ สิ่งแวดล้อม, การตรวจทางนิติเวช ตลอดจน สารเคมี, น้ำมัน, ก๊าซ, อาหาร, อุตสาหกรรมการแพทย์ และภาคส่วนอื่น ๆ ของเศรษฐกิจของประเทศ

วิธีที่ละเอียดอ่อนที่สุดวิธีหนึ่งคือการวิเคราะห์โครมาโตกราฟี ซึ่งเสนอครั้งแรกโดยนักวิทยาศาสตร์ชาวรัสเซีย M.S. Tsvet เมื่อต้นศตวรรษที่ 20 และเมื่อถึงปลายศตวรรษ มันก็กลายเป็นเครื่องมืออันทรงพลัง โดยที่ทั้งนักสังเคราะห์และนักเคมีที่ทำงานในสาขาอื่นไม่สามารถทำได้อีกต่อไป

การแยกสีดำเนินการในคอลัมน์ที่แสดงในรูปที่ 1. ส่วนผสมของสาร A, B และ C - เม็ดสีธรรมชาติที่เริ่มแรกอยู่ในโซน อี– แบ่งโดยการเติมตัวทำละลาย D (ตัวชะ) ที่เหมาะสมลงในโซนแยก

และเช่นเคย ทุกอย่างเริ่มต้นขึ้นด้วยสิ่งที่ง่ายที่สุดที่เด็กนักเรียนคนใดสามารถทำได้ ในปีที่แล้ว เด็กนักเรียนรวมทั้งผู้เขียนบทความนี้เขียนด้วยหมึก และถ้าแผ่นซับหมึกตกลงบนคราบหมึก เราจะสังเกตได้ว่าสารละลายหมึกถูกแบ่งออกเป็น "ส่วนหน้า" หลายส่วน โครมาโตกราฟีขึ้นอยู่กับการกระจายตัวของสารตัวใดตัวหนึ่งจากหลาย ๆ ตัวระหว่างเฟสตามที่พวกเขากล่าวกัน (เช่น ระหว่าง ร่างกายที่มั่นคงและก๊าซ ระหว่างของเหลวสองชนิด เป็นต้น) และระยะหนึ่งมีการเคลื่อนที่อย่างต่อเนื่อง นั่นคือ เคลื่อนที่ได้

ซึ่งหมายความว่าเฟสดังกล่าว เช่น ก๊าซหรือของเหลว กำลังเคลื่อนที่ไปข้างหน้าอย่างต่อเนื่อง ซึ่งรบกวนสมดุล ยิ่งไปกว่านั้น ยิ่งสารชนิดใดชนิดหนึ่งถูกดูดซับ (ดูดซับ) หรือละลายในเฟสที่อยู่นิ่งได้ดียิ่งขึ้น ความเร็วในการเคลื่อนที่ของสารก็จะยิ่งลดลง และในทางกลับกัน ยิ่งสารประกอบถูกดูดซับน้อยลง กล่าวคือ สารประกอบจะมีความสัมพันธ์กับเฟสที่อยู่นิ่งน้อยลง ความเร็วในการเคลื่อนที่มากขึ้น เป็นผลให้ดังแสดงในรูปที่. 2 หากในตอนแรกเรามีส่วนผสมของสารประกอบ จากนั้นค่อยๆ พวกมันทั้งหมดถูกผลักโดยเฟสเคลื่อนที่ เคลื่อนไปสู่ ​​"เส้นชัย" ด้วยความเร็วที่แตกต่างกัน และในที่สุดก็แยกจากกัน

ข้าว. 2. หลักการพื้นฐานของการแยกโครมาโตกราฟี: NF คือชั้นของเฟสที่อยู่นิ่งซึ่งครอบคลุมพื้นผิวด้านในของท่อคาปิลลารี T ซึ่งเฟสเคลื่อนที่ (MP) ไหลผ่าน ส่วนประกอบ A 1 ของของผสมที่จะแยกออกมีสัมพรรคภาพสูงสำหรับเฟสเคลื่อนที่ และส่วนประกอบ A 2 สำหรับเฟสที่อยู่นิ่ง A "1 และ A" 2 – ตำแหน่งของโซนของส่วนประกอบเดียวกันหลังจากช่วงระยะเวลาหนึ่งซึ่งมีการแยกโครมาโตกราฟีเกิดขึ้นในทิศทางที่ระบุด้วยลูกศร

ในทางปฏิบัติ จะมีการใส่ตัวอย่างของส่วนผสมของสาร เช่น ใช้เข็มฉีดยาเข้าไปในชั้นของเฟสที่อยู่นิ่ง จากนั้นสารประกอบต่างๆ ที่รวมอยู่ในส่วนผสมพร้อมกับเฟสเคลื่อนที่ (ตัวชะ) จะเคลื่อนที่ไปตามชั้น ขับเคลื่อนด้วยเฟสนี้ ความเร็วของการเคลื่อนที่ขึ้นอยู่กับขนาดของปฏิสัมพันธ์ (ความสัมพันธ์) ของส่วนประกอบในเฟสที่อยู่นิ่งและเคลื่อนที่ และเป็นผลให้สามารถแยกส่วนประกอบต่างๆ ได้

หลังจากการแยกส่วนประกอบทั้งหมดจะต้องได้รับการระบุและกำหนดปริมาณ นี่คือรูปแบบทั่วไปของโครมาโตกราฟี

ควรสังเกตว่าวิธีการสมัยใหม่นี้ทำให้สามารถระบุปริมาณสารประกอบต่างๆ นับสิบและหลายร้อยชนิดในส่วนผสมภายในไม่กี่นาที แม้ว่าจะเป็นเพียงปริมาณ "ติดตาม" ที่เพียงเล็กน้อยก็ตาม ~10–8%

มาดูวิธีการวิเคราะห์โครมาโทกราฟีโดยละเอียดยิ่งขึ้น ระบบโครมาโตกราฟีสามารถแบ่งออกได้ตามหลักการดังต่อไปนี้:

– สถานะของการรวมตัวของเฟสเคลื่อนที่และอยู่กับที่
– ลักษณะทางเรขาคณิตของระบบ
– กลไกของอันตรกิริยาระหว่างสารที่ถูกแยกออกจากเฟส

ก๊าซหรือของเหลวถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ ของแข็งหรือของเหลวถูกใช้เป็นเฟสที่อยู่นิ่งหรืออยู่กับที่

จากการจัดเรียงเฟส ระบบโครมาโตกราฟีแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม: ระนาบและคอลัมน์

ในทางกลับกันจะแบ่งออกเป็น:

– บรรจุ บรรจุด้วยวัสดุแข็งที่เป็นเม็ดเล็กๆ (ลูกบอลขนาดเล็ก) โดยอาจทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการแยกหรือทำหน้าที่เป็นพาหะของสถานะของเหลวที่อยู่นิ่ง
– เส้นเลือดฝอยผนังด้านในถูกปกคลุมด้วยฟิล์มของเหลวที่อยู่นิ่งหรือชั้นของตัวดูดซับที่เป็นของแข็ง (ตัวดูดซับ)

ปฏิสัมพันธ์ระหว่างสารที่ถูกแยกออกจากกันและเฟสของระบบโครมาโทกราฟีสามารถเกิดขึ้นได้ทั้งบนพื้นผิวของเฟสหรือในปริมาณมาก ในกรณีแรกเรียกว่าโครมาโทกราฟี การดูดซับในครั้งที่สอง – การกระจาย.

กลไกการแยกโมเลกุลในระบบโครมาโตกราฟีส่วนใหญ่มักมีสาเหตุดังต่อไปนี้:

– เฟสที่อยู่นิ่งจะดูดซับ (ดูดซับ) สารที่ถูกแยกออกจากกันทางกายภาพ
– เฟสที่อยู่นิ่งมีปฏิกิริยาทางเคมีกับสารที่ถูกแยกออกจากกัน
– เฟสคงที่ละลายสารที่จะแยกออกจากสารละลายในตัวทำละลายที่ละลายไม่ได้
– เฟสคงที่มีโครงสร้างเป็นรูพรุนซึ่งขัดขวางการแพร่กระจายของโมเลกุลของสารที่ถูกแยกออกจากกันในระยะนี้

โครมาโตกราฟีซึ่งเริ่มต้นด้วยอุปกรณ์ที่ทำเองที่บ้าน เช่น แถบกระดาษที่จุ่มลงในตัวทำละลาย ในปัจจุบันนำเสนอด้วยระบบเครื่องมือที่ซับซ้อนสูงโดยอิงตามหลักการความแม่นยำหรือความแม่นยำสมัยใหม่ และติดตั้งซอฟต์แวร์คอมพิวเตอร์ พอจะกล่าวได้ว่าหนึ่งในบริษัทคอมพิวเตอร์ที่ดีที่สุดอย่าง Hewlett-Packard ก็ผลิตโครมาโตกราฟีสมัยใหม่เช่นกัน

ผังงานของกระบวนการโครมาโตกราฟีโดยพื้นฐานแล้วจะเรียบง่ายมากและแสดงไว้ในรูปที่ 1 3. ถัดไป โดยประมาณในลำดับนี้ จะพิจารณาหลักการทำงานของโครมาโตกราฟี

โครมาโตกราฟีประเภทหลัก

โครมาโทกราฟีประเภทหลัก ได้แก่ การดูดซับ การแลกเปลี่ยนไอออน ของเหลว กระดาษ ชั้นบาง การกรองแบบเจล และโครมาโตกราฟีแบบอัฟฟินิตี

โครมาโตกราฟีแบบดูดซับ ในกรณีนี้การแยกสารจะดำเนินการเนื่องจากการดูดซับแบบเลือกสรร (เลือกสรร) ของสารในเฟสที่อยู่นิ่ง การดูดซับแบบเลือกสรรดังกล่าวเกิดจากความสัมพันธ์ของสารประกอบเฉพาะกับตัวดูดซับที่เป็นของแข็ง (เฟสคงที่) และในทางกลับกัน จะถูกกำหนดโดยปฏิกิริยาเชิงขั้วของโมเลกุลของพวกมัน ดังนั้นโครมาโทกราฟีประเภทนี้จึงมักใช้ในการวิเคราะห์สารประกอบที่มีคุณสมบัติถูกกำหนดโดยจำนวนและประเภทของหมู่ขั้ว โครมาโตกราฟีแบบดูดซับประกอบด้วยการแลกเปลี่ยนไอออน ของเหลว กระดาษ โครมาโตกราฟีแบบดูดซับชั้นบางและก๊าซ โครมาโตกราฟีแบบดูดซับแก๊สอธิบายไว้โดยละเอียดมากขึ้นในส่วน “การวิเคราะห์ตัวชะ”

โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนใช้เป็นเฟสนิ่ง เรซินแลกเปลี่ยนไอออน(รูปที่ 4) ทั้งในคอลัมน์และในรูปแบบของชั้นบาง ๆ บนจานหรือกระดาษ โดยปกติการแยกสารจะดำเนินการในตัวกลางที่เป็นน้ำ ดังนั้นวิธีนี้จึงใช้ในเคมีอนินทรีย์เป็นหลัก แม้ว่าจะใช้ตัวทำละลายแบบผสมก็ตาม แรงผลักดันสำหรับการแยกในกรณีนี้คือความสัมพันธ์ที่แตกต่างกันของไอออนของสารละลายที่แยกออกจากศูนย์กลางการแลกเปลี่ยนไอออนที่มีขั้วตรงข้ามในเฟสที่อยู่นิ่ง

โครมาโตกราฟีของเหลว ในกรณีนี้เฟสที่อยู่นิ่งจะเป็นของเหลว กรณีที่พบบ่อยที่สุดคือเวอร์ชันการดูดซับของคอลัมน์โครมาโตกราฟีของเหลว ตัวอย่างของการแยกเม็ดสีธรรมชาติแสดงไว้ในรูปที่ 1 5.

ข้าว. 5. การแยกเม็ดสีธรรมชาติด้วยโครมาโตกราฟี (ฟลาโวนและไอโซฟลาโวน)

โครมาโทกราฟีแบบกระดาษ แถบหรือแผ่นกระดาษถูกใช้เป็นเฟสคงที่ (รูปที่ 6) การแยกเกิดขึ้นโดยกลไกการดูดซับ และบางครั้งก็ดำเนินการในสองทิศทางตั้งฉาก

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางคือระบบใดๆ ที่เฟสที่อยู่นิ่งเป็นชั้นบางๆ โดยเฉพาะชั้นอะลูมิเนียมออกไซด์ (หนา 2 มม.) ในรูปแบบเพสต์ ทาบนแผ่นกระจก ตัวอย่างของระบบดังกล่าวและผลการแยกจะแสดงในรูป 7.

การกรองเจลหรือตะแกรงโมเลกุลโครมาโตกราฟี หลักการแยกในระบบดังกล่าวค่อนข้างแตกต่างไปจากกรณีก่อนหน้า เฟสคงที่นั้นเป็นวัสดุ ซึ่งมักจะเป็นเจลซึ่งมีการควบคุมความพรุนอย่างเข้มงวด ส่งผลให้ส่วนประกอบบางส่วนของส่วนผสมตามขนาดและรูปร่างของโมเลกุลสามารถทะลุผ่านระหว่างอนุภาคของเจลได้ ในขณะที่ส่วนประกอบอื่นๆ ไม่สามารถทำได้ โครมาโตกราฟีประเภทนี้มักใช้เพื่อแยกสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง ทางเลือกหนึ่งในการใช้วิธีนี้คือการหามวลโมเลกุลของสารที่แยกออกจากกัน ซึ่งมักจำเป็นสำหรับการศึกษาทางเคมี (รูปที่ 8)

โครมาโตกราฟีแบบอัฟฟินิตี้ โครมาโตกราฟีประเภทนี้ขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์ระหว่างสารในด้านหนึ่งซึ่งสามารถทำปฏิกิริยากับสารประกอบที่แยกได้ และอีกด้านหนึ่งเกี่ยวข้องกับตัวพาของแข็งของเฟสที่อยู่นิ่ง สารดังกล่าวมีสัมพรรคภาพกับสารประกอบที่แยกได้และเรียกว่าลิแกนด์ที่มีสัมพรรคภาพ

วิธีนี้มักใช้ในการวิเคราะห์ทางชีวเคมี ตัวอย่างเช่น เมื่อแอนติเจนทางชีวภาพที่มีโปรตีนถูกส่งผ่านเซลลูโลสที่ถูกกระตุ้นด้วยไซยาโนเจนโบรไมด์ การคงอยู่จำเพาะของพวกมันจะเกิดขึ้น ดังแสดงไว้ในแผนผัง 1

ในอีกวิธีหนึ่ง ในการยึดโปรตีนเข้ากับกลุ่มไฮดรอกซิลของเซลลูโลส เซลลูโลสกลุ่มหลังจะได้รับการบำบัดด้วย 2-อะมิโน-4,6-ไดคลอโร- ซิม-triazine จากนั้นผลิตภัณฑ์จากปฏิกิริยาของพวกมันจะทำปฏิกิริยากับกลุ่มอะมิโนของโปรตีนตามรูปแบบที่ 2:

แน่นอนว่าจำนวนวิธีโครมาโตกราฟีไม่ได้จำกัดอยู่เพียงวิธีที่ระบุไว้ข้างต้น โครมาโตกราฟีมักใช้ร่วมกับวิธีการเคมีกายภาพอื่นๆ เช่น แมสสเปกโตรเมทรี แต่บทความนี้มุ่งหวังที่จะแนะนำผู้อ่านให้รู้จักเฉพาะหลักการทั่วไปของโครมาโตกราฟีเท่านั้น ดังนั้น ต่อไปเราจะพิจารณาการประมวลผลผลลัพธ์ของโครมาโทกราฟี

วิธีการพัฒนาโครมาโตกราฟี

การสำแดงเป็นกระบวนการถ่ายโอนสารที่แยกจากกันโดยเฟสเคลื่อนที่ การพัฒนาสามารถดำเนินการได้สามวิธีหลัก: การวิเคราะห์ด้านหน้า การกระจัด และการชะล้าง ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดคือการชะล้าง

การวิเคราะห์หน้าผาก นี่เป็นกรณีที่ง่ายที่สุด เนื่องจากตัวอย่างนี้ทำหน้าที่เป็นเฟสเคลื่อนที่ มีการเพิ่มเข้าไปในระบบอย่างต่อเนื่อง ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีตัวอย่างในปริมาณมาก ผลลัพธ์จะแสดงในรูป 9.

การก่อตัวของหลายโซนเกิดจากความสัมพันธ์ที่แตกต่างกันของส่วนประกอบต่าง ๆ สำหรับเฟสที่อยู่นิ่ง ขอบนำหน้าเรียกว่าส่วนหน้า จึงเป็นที่มาของชื่อ โซนแรกมีเพียงสาร A ที่คงเหลือน้อยที่สุดซึ่งจะเคลื่อนที่เร็วที่สุด โซนที่สองประกอบด้วยสาร A และ B โซนที่สามเป็นส่วนผสมของสาร A, B และ C ในการวิเคราะห์หน้าผาก ส่วนประกอบ A เท่านั้นที่ได้รับในรูปของเหลว

การวิเคราะห์การเคลื่อนที่ ในกรณีนี้ เฟสเคลื่อนที่มีความสัมพันธ์กับเฟสที่อยู่นิ่งมากกว่าสารที่ถูกแยกออกจากกัน ตัวอย่างขนาดเล็กจะถูกฉีดเข้าไปในเฟสที่อยู่นิ่ง แต่เนื่องจากความสัมพันธ์สูง เฟสเคลื่อนที่จึงเข้ามาแทนที่และผลักผ่านส่วนประกอบทั้งหมด โดยจะแทนที่ส่วนประกอบ B ที่ถูกดูดซับอย่างแรงที่สุด ซึ่งในทางกลับกัน จะแทนที่สาร B ซึ่งจะแทนที่ส่วนประกอบ A ที่ถูกดูดซับน้อยที่สุด ต่างจากการวิเคราะห์ด้านหน้า โดยการใช้วิธีนี้ คุณสามารถได้รับส่วนประกอบหลักทั้งหมดในรูปแบบเฉพาะ (ของเหลว)

การวิเคราะห์สารชะล้าง เฟสเคลื่อนที่เพื่อย้ายตัวถูกละลายจะถูกส่งผ่านระบบโครมาโตกราฟี การแยกเกิดขึ้นเนื่องจากความสัมพันธ์ที่แตกต่างกันของส่วนประกอบของส่วนผสมสำหรับเฟสที่อยู่นิ่ง และด้วยเหตุนี้ เนื่องจากอัตราการเคลื่อนที่ที่แตกต่างกัน ตัวอย่างปริมาณเล็กน้อยถูกใส่เข้าไปในระบบโครมาโตกราฟี เป็นผลให้โซนที่มีส่วนประกอบจะค่อยๆก่อตัวขึ้น แยกพื้นที่คั่นด้วยตัวชะบริสุทธิ์ เนื่องจากมีประสิทธิภาพในการแยกสูง วิธีการนี้จึงกลายเป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายและแทนที่ตัวเลือกการแยกอื่นๆ เป็นส่วนใหญ่ ดังนั้นต่อไปเราจะพิจารณาทฤษฎีและการออกแบบฮาร์ดแวร์ของวิธีนี้

ทฤษฎีเล็กน้อย มักจะสะดวกที่จะนึกถึงกระบวนการโครมาโตกราฟีว่าเป็นชุดของกระบวนการสกัด และสารที่มีคุณสมบัติคล้ายกันมากสามารถแยกออกจากกันได้ เนื่องจากรอบการสกัดหลายร้อยหรือหลายพันรอบเกิดขึ้นอย่างรวดเร็วและพร้อมกันในระหว่างกระบวนการโครมาโตกราฟี

เพื่อประเมินประสิทธิภาพของกระบวนการโครมาโทกราฟี ตามแนวคิดทางทฤษฎีของการกลั่น (โดยการเปรียบเทียบกับการแยกน้ำมันในคอลัมน์การกลั่น โดยที่แผ่นทางทฤษฎีสอดคล้องกับส่วนของคอลัมน์การกลั่นซึ่งมีไอและของเหลวอยู่ในสมดุล) แนวคิด “ความสูงเทียบเท่ากับแผ่นทฤษฎี”(เวทท์). คอลัมน์โครมาโตกราฟีจึงถือเป็นชุดของชั้นสมมุติ (เพลต) โดยทั่วไปแล้ว HETT จะหมายถึงความหนาของชั้นที่จำเป็นสำหรับส่วนผสมที่มาจากชั้นก่อนหน้าให้เข้าสู่สภาวะสมดุลกับความเข้มข้นเฉลี่ยของสารในเฟสเคลื่อนที่ของชั้นนี้ สามารถอธิบายได้ด้วยสูตรต่อไปนี้:

เดิมพัน = ล/เอ็น,

ที่ไหน ล– ความยาวคอลัมน์ เอ็น– จำนวนแผ่นทฤษฎี

HETT เป็นคุณลักษณะโดยสรุปของการแยกสาร อย่างไรก็ตาม การแยกส่วนประกอบของส่วนผสมเป็นสิ่งสำคัญแต่ยังไม่เพียงพอ จำเป็นต้องระบุแต่ละส่วนประกอบและกำหนดปริมาณในตัวอย่าง โดยปกติจะทำโดยการประมวลผลโครมาโตกราฟี ซึ่งจะขึ้นอยู่กับความเข้มของสัญญาณตามสัดส่วนกับความเข้มข้นของสารตามเวลาในการแยก ตัวอย่างของโครมาโตกราฟีแสดงไว้ในรูปที่ 1 10, 11.

เวลานับจากช่วงเวลาที่นำตัวอย่างเข้าไปในคอลัมน์จนกระทั่งถึงจุดสูงสุดสูงสุดที่ถูกบันทึก เวลาการเก็บรักษา (ทีอาร์- ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม จะไม่ขึ้นอยู่กับจำนวนตัวอย่างที่แนะนำ และเมื่อคำนึงถึงพารามิเตอร์ทางเรขาคณิตของคอลัมน์ จะถูกกำหนดโดยโครงสร้างของสารประกอบเฉพาะ เช่น มันเป็นลักษณะเชิงคุณภาพของส่วนประกอบ ปริมาณของส่วนประกอบจะมีลักษณะเฉพาะตามขนาดของจุดสูงสุดหรือค่อนข้างเป็นพื้นที่ นับ พื้นที่สูงสุดมักจะดำเนินการโดยอัตโนมัติโดยใช้เครื่องมือบูรณาการที่บันทึกทั้งเวลาการเก็บรักษาและพื้นที่สูงสุด อุปกรณ์ที่ทันสมัยช่วยให้คุณได้รับงานพิมพ์จากคอมพิวเตอร์ทันทีโดยระบุเนื้อหาของส่วนประกอบทั้งหมดของส่วนผสมที่ถูกแยกออกจากกัน

การทำงานของโครมาโตกราฟี แผนภาพการติดตั้งสำหรับแก๊สโครมาโตกราฟีที่ง่ายที่สุดแสดงไว้ในรูปที่ 1 12. ประกอบด้วยถังแก๊สที่มีเฟสเฉื่อยเคลื่อนที่ (ก๊าซตัวพา) ซึ่งส่วนใหญ่มักเป็นฮีเลียม ไนโตรเจน อาร์กอน ฯลฯ การใช้ตัวลดที่ลดความดันก๊าซให้อยู่ในระดับที่ต้องการ ก๊าซตัวพาจะเข้าสู่คอลัมน์ซึ่งก็คือ หลอดที่เต็มไปด้วยตัวดูดซับหรือวัสดุโครมาโตกราฟีอื่น ๆ ที่ทำหน้าที่เป็นเฟสที่อยู่นิ่ง

ข้าว. 12. รูปแบบการทำงานของแก๊สโครมาโตกราฟี:
1 – กระบอกสูบ แรงดันสูงด้วยก๊าซตัวพา 2 – โคลงการไหล; 3 และ 3 " – เกจวัดความดัน 4 – คอลัมน์โครมาโตกราฟี 5 – อุปกรณ์ฉีดตัวอย่าง 6 – เทอร์โมสตัท 7 – เครื่องตรวจจับ 8 – เครื่องบันทึก 9 – มิเตอร์วัดการไหล

คอลัมน์โครมาโตกราฟีคือ "หัวใจ" ของโครมาโตกราฟีเนื่องจากมีการแยกสารผสมเกิดขึ้น ลำโพงส่วนใหญ่มักทำจากแก้ว มีทั้งเสาเหล็ก เทฟลอน และคาปิลารี มีการติดตั้งอุปกรณ์สำหรับแนะนำตัวอย่างใกล้กับช่องจ่ายก๊าซในคอลัมน์ ส่วนใหญ่แล้วตัวอย่างจะดำเนินการโดยใช้กระบอกฉีดยา โดยเจาะเยื่อหุ้มยาง ส่วนผสมที่วิเคราะห์จะถูกแยกออกเป็นคอลัมน์และเข้าสู่เครื่องตรวจจับ ซึ่งเป็นอุปกรณ์ที่จะแปลงผลการแยกให้อยู่ในรูปแบบที่สะดวกสำหรับการบันทึก

เครื่องตรวจจับที่ใช้มากที่สุดตัวหนึ่งคือคาทาโรมิเตอร์ซึ่งมีหลักการทำงานขึ้นอยู่กับการวัดความจุความร้อนของวัตถุต่างๆ

ในรูป รูปที่ 13 แสดงแผนผังของคาทาโรมิเตอร์ เกลียวโลหะ (เกลียวต้านทาน) ถูกวางไว้ในช่องทรงกระบอก ทำให้เกิดความร้อนขึ้นอันเป็นผลมาจากการที่กระแสไฟฟ้าตรงผ่านเข้าไป เมื่อก๊าซตัวพาไหลผ่านด้วยความเร็วคงที่ อุณหภูมิของเกลียวจะยังคงที่ อย่างไรก็ตาม หากองค์ประกอบของก๊าซเปลี่ยนแปลงไปเมื่อสารชะปรากฏขึ้น อุณหภูมิของเกลียวจะเปลี่ยนไปตามที่อุปกรณ์บันทึกไว้

เครื่องตรวจจับทั่วไปอีกตัวหนึ่งคือเครื่องตรวจจับไอออไนเซชันเปลวไฟซึ่งแผนภาพแสดงในรูปที่ 1 14. มีความไวมากกว่าคาธาโรมิเตอร์มาก แต่ต้องไม่เพียงแต่จ่ายก๊าซพาหะเท่านั้น แต่ยังต้องมีไฮโดรเจนด้วย ก๊าซตัวพาที่ออกจากคอลัมน์ที่มีตัวชะจะถูกผสมกับไฮโดรเจนและผ่านเข้าไปในหัวฉีดหัวเผาของเครื่องตรวจจับ เปลวไฟจะทำให้โมเลกุลของตัวชะแตกตัวเป็นไอออน ซึ่งส่งผลให้ความต้านทานไฟฟ้าระหว่างอิเล็กโทรดลดลงและกระแสเพิ่มขึ้น

โครมาโตกราฟีของเหลวใช้เครื่องตรวจจับสเปกโตรโฟโตเมตริก (ในบริเวณที่มองเห็น UV และ IR) เช่นเดียวกับเครื่องตรวจจับการหักเหของแสงโดยอิงจากการวัดดัชนีการหักเหของแสงของสารละลาย

พวกนี้เข้าแล้ว โครงร่างทั่วไปพื้นฐานของการวิเคราะห์โครมาโทกราฟี แน่นอนว่าบทความนี้มีให้เท่านั้น หลักการทั่วไปโครมาโทกราฟี และบ่อยครั้งจะมีป้ายกำกับง่ายๆ ที่จริงแล้ว “ครัว” ของวิธีนี้มีขนาดค่อนข้างใหญ่และซับซ้อน เป้าหมายหลักบทความนี้ตามที่ผู้เขียนระบุจะดึงดูดความสนใจของผู้อ่านรุ่นเยาว์ให้มาที่วิธีการอันทรงพลังนี้

ผู้ที่ต้องการทำความคุ้นเคยกับพื้นที่นี้มากขึ้นสามารถดูได้จากเอกสารด้านล่าง

วรรณกรรม

Zhukhovitsky A.A., Turkeltaub N.M. แก๊สโครมาโทกราฟี อ.: Gostoptekhizdat, 2505, 240 หน้า;
Sakodinsky K.I. คิเซเลฟ เอ.วี., ไอโอแกนเซน เอ.วี.ฯลฯ การประยุกต์ใช้เคมีฟิสิกส์แก๊สโครมาโตกราฟี อ.: เคมี, 2516,
254 หน้า;
โครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์ของเหลว ใน 3 เล่มเอ็ด ซี. เดลา, เค. มาซีเอก้า, เจ. จานาก้า. อ.: มีร์ 2515;
เบเรซคิน วี.จี., อลิโชเยฟ วี.อาร์., เนมิรอฟสกายา ไอ.บี.- แก๊สโครมาโตกราฟีในเคมีโพลีเมอร์ อ.: Nauka, 1972, 287 หน้า;
โมโรซอฟ เอ.เอ.โครมาโตกราฟีในการวิเคราะห์อนินทรีย์ ม.: สูงกว่า. โรงเรียน, 2515, 233 หน้า;
เบเรซคิน วี.จี., โบชคอฟ เอ.เอส.- โครมาโทกราฟีชั้นบางเชิงปริมาณ อ.: Nauka, 1980, 183 หน้า;
คู่มือห้องปฏิบัติการด้านโครมาโตกราฟีและเทคนิคที่เกี่ยวข้อง ใน 2 เล่มเอ็ด โอ มิเคช. อ.: มีร์, 1982, เล่ม 1–2, 783 หน้า;
การวิเคราะห์โครมาโตกราฟีของสิ่งแวดล้อม เอ็ด อาร์. โกรบา. อ.: มีร์ 2522, 606 หน้า;
เคิร์ชเนอร์ ยู- โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง ใน 2 เล่ม M.: Mir, 1981, เล่ม 1, 615 หน้า, เล่ม 2, 523 หน้า;
โครมาโทกราฟีแบบสกัด เอ็ด ที. บราวน์, จี. เกอร์ซินี. อ.: มีร์ 2521, 627 หน้า

วี.วี.ซาโฟนอฟ
ศาสตราจารย์แห่งมอสโก
สิ่งทอของรัฐ
สถาบันการศึกษาตั้งชื่อตาม A.N. Kosygina

มจส

ดีวีเอสเอ็มยู

ภาควิชาเคมีทั่วไป ฟิสิกส์ และคอลลอยด์

เชิงนามธรรม

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง การประยุกต์ใช้ในร้านขายยา

เสร็จสิ้นโดย: นักเรียนกลุ่ม 201-F

ดานิลอฟ ดี.ไอ.

ตรวจสอบโดย: Nemov V. A.

คาบารอฟสค์, 2005

วางแผน:

การแนะนำ

พื้นฐานเคมีฟิสิกส์ของ TLC

การแบ่งพาร์ติชันโครมาโตกราฟีบนกระดาษ

ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง

• ตัวดูดซับ
• ตัวทำละลาย
• การเตรียมจาน
• เทคนิคการใช้สารละลายทดสอบ

โครมาโตกราฟี

การอบแห้งจาน

การจำแนกสารที่แยกออกจากกัน

การประยุกต์ใช้วิธี TLC ในร้านขายยา

• การหาปริมาณซาโปนินของไตรเทอร์พีนโดย HPTLC โดยใช้การสแกนความหนาแน่น
• การศึกษาองค์ประกอบของไขมันและฟลาโวนอยด์ของตัวอย่างบางชนิดในสกุล Chin (Lathyrus.)

บทสรุป

วรรณกรรม

การแนะนำ

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง (TLC, TLC) เป็นหนึ่งในวิธีการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีที่ใช้มากที่สุด แต่เป็นวิธีที่ได้รับความนิยมน้อยที่สุด
แม้จะมีข้อบกพร่องที่สำคัญที่มีอยู่จนกระทั่งเมื่อเร็ว ๆ นี้ แต่ก็มีการใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับ การวิเคราะห์เชิงคุณภาพสารผสมส่วนใหญ่เนื่องมาจากต้นทุนที่ต่ำและความเร็วในการรับผลลัพธ์ โครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง (TLC) เดิมได้รับการพัฒนาเพื่อการแยกไขมัน แม้ว่าโครมาโตกราฟีแบบกระดาษจะเร็วกว่าคอลัมน์โครมาโตกราฟี แต่ข้อเสียก็คือกระดาษสามารถทำจากวัสดุที่มีเซลลูโลสเป็นหลักเท่านั้น ซึ่งทำให้ไม่เหมาะสมสำหรับการแยกสารที่ไม่มีขั้ว โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางยังคงข้อดีทั้งหมดของโครมาโตกราฟีแบบกระดาษ แต่อนุญาตให้ใช้วัสดุใดๆ ที่สามารถบดละเอียดแล้วสร้างชั้นที่เป็นเนื้อเดียวกันได้ มันอาจจะเป็นเช่นนั้น สารอนินทรีย์เช่น ซิลิกาเจล อลูมินา ดินเบา และแมกนีเซียมซิลิเกต ตลอดจนสารอินทรีย์ เช่น เซลลูโลส โพลีเอไมด์ และผงโพลีเอทิลีน

รากฐานเคมีฟิสิกส์ของโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง

พื้นฐานของโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางคือวิธีการดูดซับ แม้ว่าจะใช้โครมาโตกราฟีแบบแบ่งส่วนก็ตาม
วิธีการดูดซับจะขึ้นอยู่กับความแตกต่างในระดับของการดูดซับ-การดูดซับของส่วนประกอบที่แยกออกจากกันในเฟสที่อยู่นิ่ง การดูดซับเกิดขึ้นเนื่องจากแรงแวนเดอร์วอลส์ซึ่งเป็นพื้นฐานของการดูดซับทางกายภาพ โพลีโมเลกุล (การก่อตัวของตัวดูดซับหลายชั้นบนพื้นผิวของตัวดูดซับ) และการดูดซับทางเคมี (ปฏิกิริยาทางเคมีของตัวดูดซับและตัวดูดซับ)
เพื่อให้กระบวนการดูดซับ-กำจัดการดูดซึมมีประสิทธิภาพเป็นสิ่งจำเป็น พื้นที่ขนาดใหญ่ซึ่งกำหนดความต้องการบางอย่างเกี่ยวกับตัวดูดซับ ที่ พื้นผิวขนาดใหญ่การแยกเฟสเกิดขึ้นเมื่อเกิดความสมดุลอย่างรวดเร็วระหว่างเฟสของส่วนประกอบของส่วนผสมและการแยกเฟสที่มีประสิทธิผลเกิดขึ้น
อีกประเภทหนึ่งที่ใช้ในวิธีโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางคือโครมาโตกราฟีของเหลวแบบแบ่งส่วน
ในพาร์ติชันโครมาโตกราฟี ทั้งสองเฟส - แบบเคลื่อนที่และแบบอยู่กับที่ - เป็นของเหลวที่ไม่ผสมกัน การแยกสารขึ้นอยู่กับความแตกต่างในสัมประสิทธิ์การกระจายระหว่างขั้นตอนเหล่านี้
เป็นครั้งแรกที่วิธีโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางประกาศตัวเองว่าเป็น "โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางแบบกระดาษ" ซึ่งอิงตามวิธีการกระจายการแยกส่วนประกอบ

การแบ่งพาร์ติชันโครมาโตกราฟีบนกระดาษ

เนื่องจากกระดาษโครมาโตกราฟีที่ใช้ในวิธีนี้ (กระดาษกรองเกรดพิเศษ) มีน้ำ (20-22%) ในรูขุมขน ตัวทำละลายอินทรีย์จึงถูกใช้เป็นอีกเฟสหนึ่ง
การใช้โครมาโตกราฟีบนกระดาษมีข้อเสียที่สำคัญหลายประการ: การขึ้นอยู่กับกระบวนการแยกองค์ประกอบและคุณสมบัติของกระดาษ การเปลี่ยนแปลงปริมาณน้ำในรูพรุนของกระดาษเมื่อสภาพการเก็บรักษาเปลี่ยนแปลง ความเร็วโครมาโตกราฟีต่ำมาก ( นานหลายวัน) และความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์ต่ำ ข้อบกพร่องเหล่านี้ส่งผลกระทบร้ายแรงต่อการแพร่กระจายของโครมาโตกราฟีแบบกระดาษในฐานะวิธีโครมาโตกราฟี
ดังนั้นการปรากฏตัวของโครมาโตกราฟีในชั้นบาง ๆ ของตัวดูดซับ - โครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง - จึงถือได้ว่าเป็นธรรมชาติ

พื้นฐานของโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง

ในวิธี TLC โครมาโตกราฟีของสารจะเกิดขึ้นในชั้นบางๆ ของตัวดูดซับที่สะสมอยู่บนพื้นผิวเรียบที่เป็นของแข็ง การแยกวิธีนี้ขึ้นอยู่กับการดูดซับ-การดูดซับเป็นหลัก
การใช้ตัวดูดซับหลายชนิดทำให้สามารถขยายและปรับปรุงวิธีการนี้ได้อย่างมาก
ในตอนต้นของวิธีการ จะต้องสร้างเพลตแยกกัน แต่ทุกวันนี้ ส่วนใหญ่จะใช้เพลตที่ผลิตจากโรงงาน ซึ่งมีขนาด สื่อ และซับสเตรตที่หลากหลาย
เพลตโครมาโทกราฟีสมัยใหม่ทำจากแก้ว อลูมิเนียม หรือโพลีเมอร์ (เช่น โพลีเทเรฟทาเลต) เนื่องจากฐานแก้วเริ่มได้รับความนิยมน้อยลง (มักจะแตกหักจึงไม่สามารถแบ่งแผ่นออกเป็นหลายส่วนได้โดยไม่ทำลายชั้นตัวดูดซับซึ่งมีน้ำหนักมาก) แผ่นที่ใช้อลูมิเนียมฟอยล์หรือโพลีเมอร์เป็นฐานจึงกลายเป็น แพร่หลายมากที่สุด
ในการแก้ไขตัวดูดซับ ยิปซั่ม แป้ง ซิลิกาโซล ฯลฯ ถูกนำมาใช้ซึ่งยึดเม็ดตัวดูดซับไว้บนพื้นผิว ความหนาของชั้นอาจแตกต่างกัน (100 ไมครอนขึ้นไป) แต่เกณฑ์ที่สำคัญที่สุดคือชั้นจะต้องมีความหนาสม่ำเสมอทุกที่บนแผ่นโครมาโตกราฟี

ตัวดูดซับ

ตัวดูดซับที่พบบ่อยที่สุดคือซิลิกาเจล
ซิลิกาเจลคือกรดซิลิซิกไฮเดรต ที่เกิดขึ้นจากการกระทำของกรดแร่กับโซเดียมซิลิเกต และทำให้โซลที่เกิดขึ้นแห้ง หลังจากบดโซลแล้วจะใช้เศษของขนาดเกรนที่แน่นอน (ระบุไว้บนแผ่นโดยปกติคือ 5-20 ไมครอน)
ซิลิกาเจลเป็นตัวดูดซับที่มีขั้วซึ่งมีหมู่ -OH ทำหน้าที่เป็นศูนย์กลางที่ทำงานอยู่ ดูดซับน้ำบนพื้นผิวได้ง่ายและสร้างพันธะไฮโดรเจน
อลูมินา. อะลูมิเนียมออกไซด์เป็นตัวดูดซับที่เป็นเบสอ่อน และใช้เป็นหลักในการแยกสารประกอบที่เป็นเบสอ่อนและเป็นกลาง ข้อเสียของแผ่นอลูมิเนียมออกไซด์คือการเปิดใช้งานพื้นผิวโดยบังคับก่อนใช้ในตู้อบแห้งที่ อุณหภูมิสูง(100-150 0 C) และความสามารถในการดูดซับของชั้นต่ำเมื่อเทียบกับซิลิกาเจล
ดินเบาเป็นตัวดูดซับที่ได้จากแร่ธาตุธรรมชาติ: ดินเบา ตัวดูดซับมีคุณสมบัติชอบน้ำ แต่มีความสามารถในการดูดซับของชั้นต่ำกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับซิลิกาเจล
แมกนีเซียมซิลิเกตมีขั้วน้อยกว่าซิลิกาเจล และมักใช้ในกรณีที่ตัวดูดซับที่มีขั้วมากกว่าไม่สามารถแยกตัวได้อย่างมีประสิทธิภาพ
เซลลูโลส - แผ่นบาง ๆ ที่เคลือบด้วยเซลลูโลสมีประสิทธิภาพมากในการแยกโมเลกุลอินทรีย์ที่ซับซ้อน ตัวดูดซับประกอบด้วยเม็ดบีดเซลลูโลสเป็นส่วนใหญ่ซึ่งมีเส้นผ่านศูนย์กลางไม่เกิน 50 ไมครอน จับจ้องอยู่ที่ตัวพาที่มีแป้ง แต่เช่นเดียวกับในโครมาโตกราฟีแบบกระดาษ การเพิ่มขึ้นของส่วนหน้าของตัวทำละลายจะเกิดขึ้นช้ามาก
ในเพลตโครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน เรซินแลกเปลี่ยนไอออนที่มีควอเตอร์นารีแอมโมเนียมหรือหมู่ซัลโฟที่ออกฤทธิ์ซึ่งเกี่ยวข้องกับการแลกเปลี่ยนไอออนจะถูกใช้เป็นตัวดูดซับ โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางด้วยเพลตประเภทนี้ดำเนินการด้วยเฟสเคลื่อนที่ที่มีกรดหรือด่างแก่ เพลตเหล่านี้มีประสิทธิภาพในการแยกน้ำหนักโมเลกุลสูงและสารประกอบแอมโฟเทอริก

ตัวดูดซับข้างต้นเป็นตัวดูดซับที่พบได้บ่อยที่สุด แต่นอกเหนือจากนี้แล้ว ยังมีสารอีกหลายชนิดที่ใช้เป็นตัวดูดซับ ได้แก่ ทัลก์ แคลเซียมซัลเฟต แป้ง ฯลฯ
ในเวลาเดียวกัน แม้แต่ตัวดูดซับที่กล่าวไปแล้วก็สามารถปรับเปลี่ยนเพื่อให้มีคุณสมบัติการดูดซับใหม่ได้ (การชุบตัวดูดซับด้วยรีเอเจนต์ เช่น AgNO 3 การสร้างเพลตที่มีเฟสกลับด้าน) ขั้นตอนที่เป็นไปได้ที่หลากหลายด้วยต้นทุนที่ต่ำที่สุดทำให้สามารถใช้ TLC สำหรับโครมาโตกราฟีของสารจำนวนมากได้

ตัวทำละลาย

ในโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง จะใช้สารบริสุทธิ์ (เอทิลอะซิเตต เบนซิน ฯลฯ) หรือสารผสมของสาร (ระบบ) ในอัตราส่วนที่กำหนดเป็นเฟสเคลื่อนที่
การเลือกเฟสเคลื่อนที่ (ระบบ) ดำเนินการตามกฎต่อไปนี้:

· เลือกระบบที่ส่วนประกอบที่แยกออกจากกันมีความสามารถในการละลายต่ำ (หากความสามารถในการละลายของสารสูง สารจะเคลื่อนที่ไปด้านหน้า หากความสามารถในการละลายต่ำ สารนั้นจะยังคงอยู่ที่จุดเริ่มต้น) เมื่อทำการแบ่งโครมาโตกราฟีหรือเมื่อใช้เฟสย้อนกลับ ความสามารถในการละลายของสารจะต้องสูงกว่าในเฟสที่เคลื่อนที่ได้สูงกว่าในเฟสที่อยู่นิ่ง

· องค์ประกอบของระบบจะต้องคงที่และทำซ้ำได้ง่าย

· ตัวทำละลายหรือส่วนประกอบของระบบจะต้องไม่เป็นพิษหรือไม่เพียงพอ

· ระบบจะต้องแยกสารที่มีโครงสร้างคล้ายคลึงกันอย่างสมบูรณ์ และค่า Rf ที่แตกต่างกันจะต้องไม่ต่ำกว่า 0.05

· ระบบไม่ควรทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางเคมีในส่วนประกอบที่แยกออกจากกัน

· ในระบบที่เลือก ผู้วิเคราะห์จะต้องมี ความหมายที่แตกต่างกัน Rf และกระจายไปตามความยาวของโครมาโตกราฟี เป็นที่พึงประสงค์ว่าค่า Rf อยู่ในช่วง 0.05-0.85

· เมื่อเลือกระบบ จำเป็นต้องคำนึงถึงลักษณะของสารที่แยกออกมาด้วย ดังนั้นเมื่อโครมาโทกราฟีของสารที่มีคุณสมบัติพื้นฐานระบบไม่ควรมีคุณสมบัติเป็นกรดและในทางกลับกัน

การเตรียมจาน

เมื่อใช้เพลตที่ซื้อมา จะต้องเตรียมเพลตสำหรับโครมาโตกราฟีก่อน เนื่องจากตัวดูดซับแบบแผ่นระหว่างการเก็บรักษาไม่เพียงดูดซับความชื้นเท่านั้น แต่ยังรวมถึงสารอื่น ๆ ที่มีอยู่ในอากาศด้วย เมื่อใช้เพลตที่ไม่ได้เตรียมไว้ในระหว่างกระบวนการโครมาโทกราฟี ด้านหน้า "สิ่งสกปรก" จะปรากฏขึ้น ซึ่งอาจรบกวนการกำหนดสารที่มีค่า Rf มาก และสารบางชนิด เช่น น้ำ สามารถเปลี่ยนองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ได้ ดังนั้นจึงเปลี่ยนค่าที่ได้รับ ค่า RF
การเตรียมเพลตเบื้องต้นประกอบด้วยการเกลี่ยเพลทด้วยตัวทำละลายบริสุทธิ์จนเต็มความสูงของเพลต (เมทานอล, เบนซิน, ไดเอทิลอีเทอร์) ตามด้วยการอบแห้งเพลทในเตาอบที่อุณหภูมิ 110-120 0C เป็นเวลา 0.5-1 ชั่วโมง. ด้วยวิธีนี้ คุณสามารถเตรียมจานหลายใบได้ในคราวเดียว และเมื่อเก็บไว้ในที่แห้งและปิดสนิท จะคงคุณสมบัติไว้เป็นเวลาหลายเดือน

เทคนิคการประยุกต์ใช้วิธีแก้ปัญหาที่กำลังศึกษาอยู่

ปรากฎว่าการใช้สารทดสอบไม่ใช่การดำเนินการที่ซับซ้อน แต่ในขณะเดียวกัน ก็มีอิทธิพลอย่างมากต่อผลลัพธ์ทางโครมาโตกราฟีที่ได้รับ
บ่อยครั้งที่มีการศึกษาสารวิเคราะห์ของเหลวหรือสารละลายของสารที่เป็นของแข็ง โดยไม่ต้องเตรียมตัวอย่างเบื้องต้น
ดังนั้นจึงจำเป็นต้องจำประเด็นต่างๆ ที่ส่งผลกระทบร้ายแรงต่อผลการแยกสารอยู่เสมอ
ที่สำคัญที่สุดคือความเข้มข้นของสารที่ใช้ ใน TLC เป็นธรรมเนียมที่จะใส่ความเข้มข้นของสารละลายประมาณ 1% แต่ในทางกลับกัน ความไวของวิธีการทำให้สามารถระบุสารที่มีความเข้มข้นต่ำกว่ามากได้
หากไม่ทราบความเข้มข้นรวมของส่วนประกอบในสารทดสอบ หรือทราบความเข้มข้น แต่สารประเภทนี้ยังไม่ได้ผ่านโครมาโตกราฟี จำเป็นต้องพิจารณาว่าสารละลายทดสอบเพียงพอสำหรับโครมาโทกราฟีคุณภาพสูงมากน้อยเพียงใด มีเทคนิคหลายประการในการพิจารณาสิ่งนี้
ขั้นแรก คุณต้องใช้สารละลายโครมาโตกราฟีหลายจุดซึ่งมีขนาดเท่ากัน แต่มีปริมาณต่างกัน (เช่น 1, 2, 5 µl) และหลังจากโครมาโตกราฟี ให้ศึกษารูปร่างและขนาดของจุดที่แยกจากกัน
ดังนั้นด้วยความเข้มข้นที่เหมาะสม รูปร่างของสารที่แยกออกมาจะเหมือนกับรูปร่างที่วาดบนเส้นสตาร์ท หากจุดที่แยกจากกันมีขนาดใหญ่กว่าจุดเริ่มต้น แสดงว่าความเข้มข้นที่ใช้สูงเกินไป การปรากฏตัวของ “หาง” และรูปร่างที่ผิดปกติของจุดที่แยกจากกันบนจานยังสามารถบ่งบอกถึงความเข้มข้นสูง แต่อาจเกิดจากระบบโครมาโตกราฟีที่เลือกไม่ถูกต้อง หรือจากปฏิกิริยาทางเคมีของส่วนประกอบที่แยกออกจากกัน
ด้วยการเลือกปริมาณของสารที่ใช้และระบบตัวทำละลาย จึงสามารถแยกส่วนประกอบในสารที่อยู่ระหว่างการศึกษาได้อย่างสมบูรณ์สูงสุด 10 รายการบนจานเดียว
สะดวกในการใช้ตัวอย่างบนโต๊ะพิเศษที่มีลายฉลุและเครื่องทำความร้อน คราบจะถูกทาบน "เส้นสตาร์ท" ห่างจากขอบด้านล่างของแผ่น 1-2 ซม. นี่เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อที่ว่าเมื่อแผ่นเพลตถูกหย่อนลงในระบบ ตัวอย่างจะไม่ละลายในนั้น และสารที่ใช้ทั้งหมดจะต้องผ่านโครมาโตกราฟี
การใช้สารละลายทำได้โดยใช้ไมโครไซรินจ์หรือด้วยเส้นเลือดฝอยแบบไล่ระดับ ขนาดของจุดที่ทาไม่ควรเกิน 4 มม. เนื่องจากขนาดสปอตที่ใหญ่ขึ้น การเปลี่ยนแปลงรูปร่างเกิดขึ้นภายใต้อิทธิพลของแรงทางกายภาพ และขอบเขตของส่วนประกอบที่แยกจากกันอาจทับซ้อนกัน
การใส่สารทดสอบลงบนเพลตไม่ควรมาพร้อมกับการทำลายตัวดูดซับ (ซึ่งส่งผลกระทบอย่างมากต่อคุณภาพของการแยกตัว) ดังนั้น การหยดควรกระทำโดยการสัมผัสเข็มหรือเส้นเลือดฝอยกับชั้นตัวดูดซับ และไม่โดยการกด ขนาดของจุดที่เกิดจะได้รับผลกระทบไม่เพียงแต่จากปริมาณของสารละลายที่ใช้เท่านั้น แต่ยังรวมถึงขั้วของตัวทำละลายและจุดเดือดด้วย ดังนั้น เมื่อใช้สารเดียวกันในตัวทำละลายต่างกัน คราบที่เกิดขึ้นซึ่งใช้เมทานอลเป็นตัวทำละลายจะมีขนาดใหญ่กว่าคราบจากสารละลายคลอโรฟอร์ม ในทางกลับกัน เมื่อพื้นผิวถูกให้ความร้อน การระเหยของตัวทำละลายจะมีความเข้มข้นมากขึ้น และขนาดของจุดก็จะลดลงด้วย
แน่นอนว่าการใช้เครื่องเป่าผมเพื่อทำให้คราบแห้งนั้นง่ายกว่าเมื่อใช้ แต่ต้องมั่นใจอย่างเต็มที่ว่าสารที่ใช้จะไม่ออกซิไดซ์ภายใต้อิทธิพลของอากาศร้อน
บางครั้งในระหว่างโครมาโทกราฟีบนเพลตจะสังเกตเห็นเอฟเฟกต์ขอบซึ่งเป็นผลมาจากจุดที่ไม่ได้อยู่บนเส้นเดียวกัน แต่มีรูปร่างคล้ายเกือกม้าหรือแนวทแยง เพื่อขจัดผลกระทบนี้ แต่ละจุดสามารถ "ติดตั้ง" ด้วยรางของตัวเอง โดยแยกตัวอย่างที่ใช้ออกจากจุดอื่นๆ โดยการถอดสายตัวดูดซับออก วิธีนี้ทำได้ดีที่สุดโดยใช้ไม้บรรทัดกับของมีคม (เช่น มีดผ่าตัด) แต่ระวังอย่าเอาตัวดูดซับออกมากเกินไป
หลังจากใช้สารทดสอบบนเพลต จำเป็นต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้กำจัดตัวทำละลายออกอย่างสมบูรณ์ เนื่องจากแม้แต่ตัวทำละลายเพียงเล็กน้อยในสารทดสอบก็อาจส่งผลต่อการแยกตัวและแม้กระทั่งเปลี่ยนองค์ประกอบของระบบโครมาโตกราฟี
โดยปกติการกำจัดตัวทำละลายจะดำเนินการโดยการทำให้แผ่นแห้งตามธรรมชาติเป็นเวลา 5-10 นาที หรือโดยการทำความร้อนด้วยเครื่องเป่าผมหรือในเตาอบ

โครมาโตกราฟี

โครมาโทกราฟีแบบชั้นบางมีหลายวิธี ซึ่งส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับประเภทของการเคลื่อนที่ของตัวทำละลาย

โครมาโทกราฟีแบบชั้นบางจากน้อยไปมาก

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางจากมากไปน้อย

โครมาโตกราฟีชั้นบางแนวนอน

· โครมาโทกราฟีแบบชั้นบางแบบเรเดียล

โครมาโทกราฟีแบบชั้นบางจากน้อยไปมาก

โครมาโตกราฟีประเภทนี้เป็นประเภทที่พบได้บ่อยที่สุดและขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าด้านหน้าของระบบโครมาโตกราฟีลอยขึ้นตามแผ่นภายใต้การกระทำของแรงของเส้นเลือดฝอย เช่น ด้านหน้าของระบบโครมาโตกราฟีจะเลื่อนจากล่างขึ้นบน สำหรับวิธีนี้ จะใช้อุปกรณ์ที่ง่ายที่สุด เนื่องจากภาชนะใดๆ ที่มีก้นแบนและมีฝาปิดที่แน่นหนาซึ่งสามารถใส่แผ่นโครมาโทกราฟีได้อย่างอิสระสามารถใช้เป็นห้องโครมาโตกราฟีได้
วิธีโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางจากน้อยไปหามากมีข้อเสียหลายประการ ตัวอย่างเช่น อัตราที่ส่วนหน้ายกขึ้นตามแผ่นเกิดขึ้นไม่สม่ำเสมอ เช่น ส่วนล่างจะสูงที่สุด และเมื่อส่วนหน้าสูงขึ้นก็จะลดลง เนื่องจากความอิ่มตัวของไอระเหยของตัวทำละลายในส่วนบนของห้องจะน้อยลง ดังนั้นตัวทำละลายจากแผ่นโครมาโตกราฟีจึงระเหยได้เข้มข้นมากขึ้น ดังนั้นความเข้มข้นจึงลดลงและความเร็วในการเคลื่อนที่ช้าลง เพื่อขจัดข้อเสียเปรียบนี้ จึงมีแถบกระดาษกรองติดไว้กับผนังของห้องโครมาโทกราฟี ซึ่งระบบโครมาโทกราฟีที่เพิ่มขึ้นจะทำให้ห้องอิ่มตัวด้วยไอระเหยตลอดปริมาตรทั้งหมด
ห้องโครมาโตกราฟีบางห้องแบ่งออกเป็นสองถาดที่ด้านล่าง การปรับปรุงนี้ไม่เพียงแต่ช่วยลดการใช้ระบบโครมาโตกราฟีเท่านั้น (ต้องใช้ปริมาตรน้อยลงเพื่อให้ได้ความสูงที่ต้องการของระบบโครมาโตกราฟี) แต่ยังใช้คิวเวตต์เพิ่มเติมสำหรับตัวทำละลายที่เพิ่มความดันไออิ่มตัวในห้องเพาะเลี้ยงอีกด้วย
ข้อเสียอีกประการหนึ่งคือความจำเป็นในการตรวจสอบด้านหน้าของตัวทำละลาย เนื่องจากแนวหน้าของตัวทำละลายอาจ "หนี" ไปที่ขอบด้านบน ในกรณีนี้ ไม่สามารถระบุมูลค่าที่แท้จริงของ Rf ได้อีกต่อไป

โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางจากมากไปน้อย

วิธีการโครมาโตกราฟีนี้ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าด้านหน้าของระบบโครมาโตกราฟีเคลื่อนลงมาตามแผ่นโดยส่วนใหญ่อยู่ภายใต้อิทธิพลของแรงโน้มถ่วง กล่าวคือ ด้านหน้าของเฟสเคลื่อนที่จะเลื่อนจากบนลงล่าง
สำหรับวิธีนี้ คิวเวตต์ที่มีระบบโครมาโตกราฟีติดอยู่ที่ส่วนบนของห้องโครมาโตกราฟี จากนั้นตัวทำละลายจะถูกส่งไปยังเพลตโครมาโทกราฟีโดยใช้ไส้ตะเกียง ซึ่งจะไหลลงมาและตัวอย่างทดสอบจะถูกโครมาโตกราฟี
ข้อเสียของวิธีนี้ได้แก่ความซับซ้อนของอุปกรณ์ วิธีนี้ใช้เป็นหลักในโครมาโตกราฟีแบบกระดาษ

โครมาโตกราฟีชั้นบางแนวนอน

วิธีนี้ซับซ้อนที่สุดในแง่ของฮาร์ดแวร์ แต่สะดวกที่สุด ดังนั้น ในห้องโครมาโตกราฟี แผ่นจะถูกวางในแนวนอน และระบบจะถูกป้อนไปที่ขอบด้านหนึ่งของแผ่นโดยใช้ไส้ตะเกียง ด้านหน้าของตัวทำละลายจะเคลื่อนที่ไปในทิศทางตรงกันข้าม
มีเคล็ดลับอีกอย่างหนึ่งที่ช่วยให้คุณทำให้กล้องง่ายขึ้นอย่างมาก ในการทำเช่นนี้ แผ่นโครมาโทกราฟีบนฐานอะลูมิเนียมจะโค้งงอเล็กน้อยแล้ววางไว้ในห้องเพาะเลี้ยง ในกรณีนี้ระบบจะรับสัญญาณเข้าจากทั้งสองด้านพร้อมกัน เฉพาะแผ่นที่มีแผ่นรองอะลูมิเนียมเท่านั้นจึงจะเหมาะสมสำหรับวัตถุประสงค์นี้ เนื่องจากฐานพลาสติกและแก้ว "ไม่โค้งงอ" เช่น ไม่คงรูปร่างไว้
ข้อดีของวิธีนี้ ได้แก่ ความจริงที่ว่าในเซลล์แนวนอนความอิ่มตัวของระบบที่มีไอจะเกิดขึ้นเร็วกว่ามากความเร็วของการเคลื่อนที่ด้านหน้าจะคงที่ และเมื่อทำโครมาโทกราฟีทั้งสองด้าน ด้านหน้าจะไม่ “หนี”

โครมาโตกราฟีชั้นบางเรเดียล

โครมาโทกราฟีแบบชั้นบางแบบเรเดียลประกอบด้วยการใช้สารทดสอบที่กึ่งกลางของเพลต และเพิ่มระบบที่เคลื่อนจากศูนย์กลางไปยังขอบของเพลต

การอบแห้งจาน

หลังจากกระบวนการแยกสารภายใต้การศึกษาแล้ว แผ่นจะถูกทำให้แห้ง นี่เป็นกระบวนการที่สำคัญเช่นกัน เนื่องจากแม้ว่าจะมีร่องรอยของตัวทำละลายบนเพลต แต่ก็เป็นไปได้ที่จะได้รับผลลัพธ์ทางโครมาโตกราฟีที่ไม่ถูกต้อง
หากระบบโครมาโตกราฟีมีเพียงส่วนประกอบที่มีจุดเดือดต่ำ การอบแห้งตามธรรมชาติเป็นเวลา 3-5 นาทีก็เพียงพอแล้ว หากระบบประกอบด้วยของเหลวที่มีจุดเดือดสูง (แอลกอฮอล์ น้ำ กรดอินทรีย์ ฯลฯ) ต้องทำให้เพลตแห้งเป็นเวลาอย่างน้อย 10 นาที หรือต้องวางเพลตไว้ในตู้อบแห้ง

การจำแนกสารที่แยกออกจากกัน

จานแห้งเป็นโครมาโตแกรมของสารที่อยู่ระหว่างการศึกษา หากสารมีสี การระบุจะเริ่มด้วยการกำหนดสีของสารที่แยกออกจากกัน
แต่ในกรณีส่วนใหญ่ สารที่ถูกแยกออกจะไม่มีสี และการเปรียบเทียบด้วยภาพอย่างง่าย ๆ นั้นเป็นไปไม่ได้
สำหรับโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง มีการวิเคราะห์เชิงคุณภาพ (การระบุ) หลายประเภทของสารที่แยกออกจากกัน:

· วิธีการมองเห็นและการหาค่า Rf ของสารที่แยกออกจากกัน

· ปฏิกิริยาของสี

· เปรียบเทียบกับพยาน

· วิธีการระบุตัวตนทางเคมีกายภาพ

เรามาดูรายละเอียดการวิเคราะห์เชิงคุณภาพแต่ละประเภทในโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางกันดีกว่า

วิธีการทางกายภาพ

วิธีการมองเห็นส่วนใหญ่จะใช้เพื่อระบุตำแหน่งของจุดของสารที่แยกออกจากกันบนเพลตโครมาโทกราฟี ในการทำเช่นนี้ให้ตรวจสอบจานทั้งในแสงที่มองเห็นได้และใช้แสงอัลตราไวโอเลต (ส่วนใหญ่เป็นแสงที่มีความยาวคลื่น 366 และ 254 นาโนเมตร)
นี่เป็นขั้นตอนแรกของการระบุ ซึ่งคุณภาพของเงื่อนไขที่เลือกและผลลัพธ์ทางโครมาโตกราฟีที่ได้รับจะถูกกำหนด
ดังนั้น เมื่อพิจารณาถึงคุณภาพของโครมาโตกราฟี (การไม่มี “หาง” ของสารที่แยกออกจากกันหรือการทับซ้อนกันของจุด รูปร่างและขนาดที่ถูกต้อง การไม่มีการรวมตัวของแทร็กโครมาโทกราฟี ฯลฯ) และตระหนักถึงการแยกตามความเหมาะสม การวิจัยเพิ่มเติมให้กำหนด Rf ของจุดที่ระบุ

ค่า RF

หนึ่งในตัวบ่งชี้หลักใน TLC คือตัวบ่งชี้ Rf พารามิเตอร์นี้เป็นการเปรียบเทียบเวลากักเก็บและขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของสารที่ถูกแยก องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่และตัวดูดซับ และขึ้นอยู่กับพารามิเตอร์ทางกายภาพ
ค่า Rf ถูกกำหนดเป็นอัตราส่วนของระยะทางที่สารส่งผ่านต่อระยะทางที่ผ่านด้านหน้าของตัวทำละลาย

ค่า Rf เป็นปริมาณไร้มิติและมีค่าตั้งแต่ 0 ถึง 1 อย่างไรก็ตาม ในวรรณกรรม มักพบตัวบ่งชี้ เช่น hRf, Rf×100 ซึ่งเป็น Rf เดียวกัน แต่คูณด้วย 100 เพื่อไม่ให้ทำงาน ที่มีค่าทศนิยม
ค่าของ Rf ไม่ได้รับผลกระทบจากระยะทางที่เดินทางโดยด้านหน้าของตัวทำละลาย อย่างไรก็ตาม หลายวิธีอธิบายการเคลื่อนที่ของด้านหน้าที่ระยะ 10 ซม. ซึ่งใช้เพื่ออำนวยความสะดวกในการคำนวณ Rf เท่านั้น
ในทางปฏิบัติ ในตอนแรก ระยะห่างที่ผ่านด้านหน้าของตัวทำละลายจะถูกกำหนด: จากเส้นเริ่มต้น (ไม่ใช่จากขอบของเพลต) ไปยังตำแหน่งที่ส่วนหน้าอยู่ที่ส่วนท้ายของโครมาโทกราฟี จากนั้นจึงกำหนดระยะห่างจากเส้นเริ่มต้นไปยังจุดของสารที่แยกออกจากกัน นี่คือจุดที่ขนาดของจุดมีบทบาท! เพราะหากมีคราบเกิดขึ้น ทรงกลมและมีขนาดเล็ก ทำให้ Rf ที่ได้มีความหมายชัดเจน และหากจุดผลลัพธ์มีขนาดใหญ่หรือมีรูปร่างผิดปกติ เมื่อพิจารณา Rf ของจุดนั้น ข้อผิดพลาดอาจสูงถึง 0.1!
ในกรณีของการแบ่งโครมาโตกราฟีแบบแบ่งส่วน ค่าสัมประสิทธิ์การกระจายของสารและ Rf ของสารจะสัมพันธ์กันโดยความสัมพันธ์:

ที่ไหน สปและ สน- พื้นที่หน้าตัดของเฟสเคลื่อนที่และนิ่ง
ดังที่เราเห็นค่าสัมประสิทธิ์การกระจายที่มีอัตราส่วนคงที่ เอสพี/สนเป็นปริมาณที่ขึ้นอยู่กับ Rf ตามสัดส่วน และสามารถหาได้จากปริมาณนั้น

ปฏิกิริยาสี

ปฏิกิริยาสีในโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลาย ไม่เพียงแต่ทำหน้าที่ระบุตำแหน่งของส่วนประกอบที่แยกออกจากกัน (การบำบัดด้วยกรดซัลฟิวริก ไอโอดีน) แต่ยังช่วยกำหนดทั้งประเภทของสารและการจำแนก (ในปฏิกิริยาแต่ละอย่าง)
เราจะไม่พิจารณาความหลากหลายของสีที่นี่ ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพสมมติว่าถ้าปฏิกิริยาเชิงคุณภาพทั้งหมดตรงกันและค่า Rf ที่ได้รับของสารตรงกันในสาม ระบบต่างๆด้วยข้อมูลวรรณกรรม สารดังกล่าวได้ถูกระบุแล้ว แม้ว่าในความคิดของฉัน จำเป็นต้องมีการยืนยันเพิ่มเติมโดยการวิจัยโดยใช้วิธีทางกายภาพและเคมีอื่น

เปรียบเทียบกับพยาน

เมื่อทำการศึกษาสารที่มีองค์ประกอบตามที่คาดหวัง ให้ใช้วิธีโครมาโตกราฟีด้วย พยาน- สารที่รู้จัก วิธีการนี้ใช้เมื่อยากต่อการทนต่อสภาวะโครมาโทกราฟี ไม่มีข้อมูลวรรณกรรมเกี่ยวกับ Rf สำหรับระบบหรือตัวดูดซับนี้ การใช้วิธีไล่ระดับ ฯลฯ และเมื่อทำปฏิกิริยากับสี คุณสามารถเปรียบเทียบได้ไม่เพียงแต่สีเท่านั้น แต่ยังรวมถึงเฉดสีของสารที่กำลังศึกษาและพยานซึ่งมีความสำคัญเช่นกัน
ในทางกลับกัน วิธีนี้ต้องเสียค่าใช้จ่ายเพิ่มเติมสำหรับพยาน

วิธีการวิเคราะห์เชิงปริมาณ

การวิเคราะห์เชิงปริมาณในโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางมีหลายประเภท ซึ่งแสดงลักษณะเฉพาะแต่ละขั้นตอนของการพัฒนาวิธีการ แม้ว่าวิธีการบางอย่างสามารถใช้ได้เพียงกึ่งปริมาณเท่านั้น แต่ยังคงใช้ในทางปฏิบัติ

วิธีการเปรียบเทียบด้วยภาพตามที่กล่าวไว้ข้างต้น ความเข้มของสีของจุดและขนาดของจุดนั้นขึ้นอยู่กับปริมาณของสารที่โครมาโตกราฟี ดังนั้น การหาปริมาณด้วยสายตาจึงขึ้นอยู่กับเทคนิคหลายประการ
วิธีการเจือจาง- วิธีการนี้ประกอบด้วยการพิจารณาความเข้มข้นจำกัดของสารแต่ละตัวซึ่งไม่สามารถระบุสารด้วยวิธีโครมาโตกราฟีได้ เมื่อทำโครมาโทกราฟี สารทดสอบจะถูกเจือจางจนไม่ปรากฏบนเพลต
เนื้อหาของสาร C ที่กำหนดโดยวิธีนี้พบได้จากสูตร:

ที่ไหน n-เจือจาง ก- ความเข้มข้นของสารที่ไม่ปรากฏระหว่างโครมาโทกราฟี
วิธีการกำหนดพื้นที่จุดหากใช้สารทดสอบและพยานในปริมาณเท่ากัน พื้นที่จุดผลลัพธ์ที่ได้หลังโครมาโทกราฟีจะเป็นสัดส่วนกับลอการิทึมของความเข้มข้นของสาร ส=ก lnค+บี

โดยที่ a และ b เป็นสัมประสิทธิ์เชิงประจักษ์ที่กำหนดโดยการทดลอง
หากจุดของสารที่แยกออกจากกันมีขอบเขตแหลมคม พื้นที่ของจุดนั้นสามารถกำหนดได้โดยวิธีกราวิเมตริก (ตัดจุดออกแล้วชั่งน้ำหนัก) วัดด้วยเครื่องวัดระนาบ วิธีนี้ให้ข้อผิดพลาดสูงถึง 10-15%
อย่างไรก็ตาม แต่ก็มีข้อเสียที่สำคัญหลายประการ ประการแรกและสำคัญที่สุดคือ ด้วยวิธีนี้ ทำให้สามารถระบุความเข้มข้นของสารที่มีสีหรือมีการเรืองแสงในบริเวณ UV (254, 366 นาโนเมตร) ข้อเสียเปรียบนี้สามารถกำจัดได้โดยการเติมฟอสเฟอร์ต่างๆ ลงในตัวดูดซับ ซึ่งจะเพิ่มข้อผิดพลาดในการกำหนด
นอกจากนี้ยังสามารถใช้การบำบัดเพลตด้วยสารที่กำลังพัฒนา (รีเอเจนต์) ได้ (เช่น การใช้กระดาษกรองที่แช่ในรีเอเจนต์ที่กำลังพัฒนา ตามด้วยการสัมผัสกับเพลตโครมาโตกราฟีและการกำหนดพื้นที่ของสารที่พัฒนาแล้วเพิ่มเติม) แต่ข้อผิดพลาดในการกำหนดก็สูงเช่นกัน
ความต้องการผลลัพธ์เชิงปริมาณที่เชื่อถือได้มากขึ้นทำให้เกิดการใช้วิธีการใช้เครื่องมือ
วิธีการชะล้าง- วิธีนี้ประกอบด้วยความจริงที่ว่าสารที่แยกออกจากกันจะถูกชะล้างออกจากตัวดูดซับด้วยตัวทำละลายและความเข้มข้นของสารจะถูกกำหนดโดยวิธีอื่น - โฟโตเมตริก, โพลาโรกราฟิก ฯลฯ นี่เป็นวิธีการที่ค่อนข้างแม่นยำ แต่เฉพาะในกรณีที่สารที่แยกออกมานั้นถูกแยกในเชิงปริมาณเท่านั้น เนื่องจากมีความเข้มข้นของแรงงานสูง วิธีการนี้จึงไม่ค่อยได้ใช้ และไม่เป็นที่ยอมรับเมื่อมีตัวอย่างจำนวนมากที่กำลังศึกษา
วิธีการถ่ายภาพการกำหนดประกอบด้วยการถ่ายภาพแผ่นด้วยสารที่แยกจากกัน และการกำหนดระดับความดำคล้ำเพิ่มเติมโดยใช้ดีซินมิเตอร์
วิธีการถ่ายภาพรังสีคล้ายกับโฟโตเมตริกโดยมีข้อแตกต่างเพียงอย่างเดียวคือการกำหนดการทำให้แผ่นดำคล้ำซึ่งเกิดจากการแผ่รังสีของสารที่แยกออกจากกัน วิธีการนี้ใช้เฉพาะเมื่อพิจารณาสารที่มีอะตอมที่มีป้ายกำกับเท่านั้น
วิธีโฟโตเดสซินเมตริกสามารถใช้ได้โดยไม่ต้องแยกสารออกจากแผ่นและขึ้นอยู่กับการกำหนดไม่เพียง แต่พื้นที่ของจุดเท่านั้น แต่ยังรวมถึงความเข้มด้วย
นี่เป็นวิธีที่แม่นยำที่สุดในการกำหนดความเข้มข้นของสาร เนื่องจากเมื่อใช้กราฟการสอบเทียบ จึงสามารถดำเนินการตรวจวัดเชิงปริมาณของสารที่แยกออกจากกันทั้งหมด (สูงถึง 2-10%) ได้โดยตรงบนจานในระยะเวลาอันสั้น เวลา.
ไม่น่าแปลกใจที่การพัฒนาโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง การใช้ดีซินโทมิเตอร์จะเพิ่มขึ้น ความไวและผลที่ตามมาคือความแม่นยำในการกำหนดความเข้มข้นของสารที่แยกออกจากกันจะเพิ่มขึ้น และเข้าใกล้ความแม่นยำของโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง

ข้าว. 1. ห้องทั่วไปสำหรับการพัฒนาเพลตโครมาโตกราฟีที่มีชั้นบางๆ

1. ฝา
2. ห้องกระจก
3. จานทีแอลซี
4. ตัวดูดซับ
5. ไซต์แอปพลิเคชันตัวอย่าง
6. ตัวทำละลาย

TLC โครมาโตกราฟีทั่วไปของกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์

บนโครมาโตกราฟี ชื่อเสียง= กรดไขมัน เมทิลเอสเทอร์ = เมทิลเอสเทอร์ของกรดไขมัน เริ่ม= จุดใช้งานของสารผสมที่จะแยก

โครมาโตแกรมถูกดำเนินการบนเพลตซอร์บฟิล ระบบ-เบนซิน. อาการ - ไหม้เกรียมหลังจากฉีดพ่นด้วยกรดซัลฟิวริก

จุด 1 - เมทิลเอสเทอร์ของกรดไขมัน จุด 2 - ผลิตภัณฑ์เมทิลเลชั่นของไขมันทั่วไป

ลูกศรทิศทางการเคลื่อนที่ของด้านหน้าตัวทำละลาย (ระบบ) จะแสดงขึ้น ในระหว่างโครมาโทกราฟี ด้านหน้าของตัวทำละลายจะเคลื่อนไปที่ขอบด้านบนของเพลต

การประยุกต์ใช้วิธี TLC ในร้านขายยา

ความสำคัญอย่างยิ่งของวิธีโครมาโตกราฟีสำหรับร้านขายยานั้นเนื่องมาจากข้อเท็จจริงที่ว่าในการผลิตยา ในหลายกรณี จำเป็นต้องมีการแยกผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติหรือผลิตภัณฑ์สังเคราะห์เบื้องต้นในรูปแบบบริสุทธิ์ การวิเคราะห์มักขึ้นอยู่กับการแยกสารผสมออกเป็นส่วนประกอบต่างๆ ลองดูตัวอย่างการใช้วิธี TLC สองตัวอย่าง ซึ่งพิสูจน์ถึงความสำคัญในการวิเคราะห์และการผลิตสารที่เป็นยา

การกำหนดเชิงปริมาณของไตรเทอร์พีนซาโปนินโดย HPTLC โดยใช้การสแกนเดนซิโตเมทรี

Triterpene saponins (ไกลโคไซด์) เป็นส่วนประกอบสำคัญของยาหลายชนิด

วิธีการที่ใช้ในปัจจุบันส่วนใหญ่ในการกำหนดปริมาณซาโปนินของไตรเทอร์พีนนั้นขึ้นอยู่กับการไฮโดรไลซิสของกรดด้วยวิธีหลังพร้อมกับการหาปริมาณอะไกลโคนเพิ่มเติม โดยส่วนใหญ่มักใช้วิธีไทไตรเมทริก แต่มักจะใช้วิธีการวิเคราะห์สเปกตรัมน้อยกว่า

วิธีการดังกล่าวซึ่งมีพื้นฐานมาจากการทำลายโมเลกุลซาโปนินนั้นมีข้อเสียหลายประการ มีอายุการใช้งานยาวนานและไม่อนุญาตให้ประเมินเชิงปริมาณของอัตราส่วนของซาโปนินแต่ละตัวในการเตรียมที่ประกอบด้วยซาโปนินทั้งหมด

ในกรณีส่วนใหญ่ ผู้เขียนมักจะจำกัดตัวเองอยู่เฉพาะการประเมินเชิงคุณภาพโดยใช้วิธี TLC ซึ่งเป็นวิธีการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีที่เข้าถึงได้ง่ายและง่ายที่สุด การใช้ TLC เพื่อระบุปริมาณเชิงปริมาณของส่วนประกอบต่างๆ จะถูกขัดขวางเนื่องจากการขาดเดนซิโตมิเตอร์แบบสแกน

งานนี้นำเสนอผลลัพธ์ของการกำหนด TLC เชิงปริมาณของซาโปนินไตรเทอร์พีนบางชนิด อนุพันธ์ของกรดโอลีโนลิก ในทางเภสัชกรรม และสารสกัดจากวัสดุจากพืช

เราเลือก triterpene saponins จาก Manchurian Aralia (aralosides) เป็นวัตถุในการศึกษา การพิจารณาเชิงคุณภาพซึ่งครอบคลุมถึงวัตถุต่าง ๆ ในงานเช่นเดียวกับซาโปนิน triterpene ของหัวบีท - สารที่มีฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า ทั้งสองเป็นอนุพันธ์ของกรดโอลีโนลิกซึ่งมีน้ำตาลตกค้างเล็กน้อย (ไม่เกินสี่) ซึ่งแสดงให้เห็นพฤติกรรมที่คล้ายกันในชั้นตัวดูดซับบาง ๆ

ผลรวมของอะราโลไซด์ที่แยกได้จากยาเม็ด Saparal และผลรวมของซาโปนินหัวบีทที่แยกได้จากเหง้าที่เก็บเกี่ยวสดถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน สำหรับการนำไปใช้กับจาน ให้เตรียมสารละลายซาโปนินที่มีน้ำและแอลกอฮอล์ (เอทานอล 80%) ที่มี 0.4 - 2.0 มก./มล. โครมาโตกราฟีดำเนินการโดยใช้เพลต TLC "Silufol" (สาธารณรัฐเช็ก) 15 x 15 ซม., "Armsorb" สำหรับ HPTLC (อาร์เมเนีย) 6 x 10 ซม. และ "Sorbfil" (รัสเซีย) 10 x 10 ซม. ความสูงของส่วนยกด้านหน้าที่เพียงพอสำหรับการแยกส่วนโดยสมบูรณ์คือ 10.6 และ 6 ซม. ตามลำดับ ตัวอย่างถูกนำมาใช้โดยใช้ไมโครไซริงค์ MS-10 (รัสเซีย) บนจานที่ให้ความร้อนถึง 40 °C ปริมาตรที่เหมาะสมที่สุดของตัวอย่างที่ใช้คือ 3-5 ไมโครลิตร ดำเนินการในหลายขั้นตอนเพื่อให้เส้นผ่านศูนย์กลางของจุดเริ่มต้น จุดไม่เกิน 2 มม.

โครมาโตกราฟีดำเนินการที่อุณหภูมิ 20 - 25 °C หลังจากการชะเสร็จสิ้น เพลตจะถูกทำให้แห้งในอากาศและบำบัดด้วยรีเอเจนต์การตรวจจับโดยใช้ขวดสเปรย์แก้วในห้องปฏิบัติการ การสแกนโซนดำเนินการโดยใช้เครื่องวัดความหนาแน่นของการสแกน Shimadzu CS-9000 (ญี่ปุ่น) มีการเปรียบเทียบคุณภาพของโซนที่ได้รับจากโครมาโตกราฟีในระบบชะล้างที่แนะนำโดยทั่วไปสามระบบ: I. คลอโรฟอร์ม - เมทานอล - น้ำ (30:17:3): II. เอ็น-บิวทานอล - เอทานอล - แอมโมเนีย (7:2:5) III. เอ็น-บิวทานอล - กรดอะซิติก (4:5:1) ชั้นบน IV ซาโปนิน)

สารละลายแอลกอฮอล์ 25% ของกรดฟอสโฟทังสติก (จุดราสเบอร์รี่ของซาโปนินบนพื้นหลังสีขาว) ถูกใช้เป็นรีเอเจนต์การตรวจจับ ส่วนใหญ่มักใช้สำหรับการตรวจวัด TLC เชิงปริมาณของสารประกอบดังกล่าวและสารละลายแอลกอฮอล์ 10% ของกรดฟอสโฟโมลิบดิก ซึ่งแนะนำสำหรับการพัฒนาโซนไตรเทอร์พีนอยด์ (โซนซาโปนินเป็นสีน้ำเงินเข้มบนพื้นหลังสีเหลือง) ในกรณีหลัง การรักษาเพลตด้วยไอแอมโมเนียจะทำให้พื้นหลังเปลี่ยนสีและเพิ่มความคมชัดของจุดต่างๆ ได้

จากผลการวิจัย เราได้เลือกสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับกระบวนการโครมาโทกราฟีสำหรับการวัดความหนาแน่น Armsorb สำหรับ HPTLC ได้รับการยอมรับว่าเป็นเพลตที่ดีที่สุดจากสามประเภท ประสิทธิภาพสูงกระบวนการนี้อำนวยความสะดวกด้วยชั้นซิลิกาเจลที่บาง (II0 µm) และเป็นเนื้อเดียวกันในองค์ประกอบที่เป็นเศษส่วน (5-10 µm) ซึ่งให้การแยกตัวที่ดีและมีการกัดเซาะโซนน้อยที่สุด แม้ว่าส่วนหน้าของตัวทำละลายจะสูงขึ้น 6 ซม. แผ่น Sorbfil เกือบก็ตาม ดีพอๆ กับความสามารถในการแยกตัว แต่เวลาในการชะล้างนั้นนานเกือบสองเท่า เพลต Silufol ที่อัตราการชะล้างสูงเพียงพอ ช่วยให้สามารถแยกส่วนประกอบต่างๆ ได้ในเส้นทางโครมาโตกราฟีที่ยาวขึ้น ซึ่งทำให้โซนเบลอบางส่วน แต่ก็สามารถนำไปใช้ได้เช่นกัน

การชะสามารถดำเนินการได้อย่างมีประสิทธิภาพในระบบการชะใดๆ จากสามระบบแรก ฉันให้เวลาเพิ่มขึ้น IV อนุญาตให้คนได้รับการแยกซาโปนินหัวบีทน้ำตาลได้ดีกว่าสามตัวแรก

รีเอเจนต์การตรวจจับทั้งสองให้สีของโซนค่อนข้างคงที่เมื่อสแกนภายใน 1 - 2 ชั่วโมงนับจากช่วงเวลาของการพัฒนา หลังจากช่วงเวลานี้ โซนซาโปนินบนจานที่ได้รับกรดฟอสโฟโนทังสติกจะเปลี่ยนสีจากสีแดงเข้มเป็นสีม่วง ซึ่งอาจนำไปสู่การบิดเบือนผลลัพธ์ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณในระหว่างการสแกน ในกรณีนี้ควรใช้การรักษาด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิกมากกว่า เมื่อเก็บไว้ในที่ที่ไม่มีแสง แผ่นเพลทที่มีโซนที่พัฒนาด้วยรีเอเจนต์นี้จะให้ผลลัพธ์ที่สามารถทำซ้ำได้อย่างสมบูรณ์หลังจากผ่านไปหลายเดือนนับจากช่วงเวลาที่พัฒนา

ขีดจำกัดการตรวจจับของซาโปนินคือ 5 ไมโครกรัมในตัวอย่างเมื่อพัฒนาด้วยกรดฟอสโฟทังสติก และ 0.5 ไมโครกรัมในตัวอย่างเมื่อพัฒนาด้วยกรดฟอสโฟโมลิบดิก การบำบัดด้วยไอแอมโมเนียทำให้สามารถลดขีดจำกัดการตรวจจับซาโปนินในกรณีหลังลงเหลือ 0.2 ไมโครกรัมในตัวอย่าง

การหาปริมาณซาโปนินเชิงปริมาณโดย TLC โดยใช้การสแกนความหนาแน่นได้ดำเนินการบนเพลต Armsorb (ความเร็วของโครมาโตกราฟีในกรณีนี้คือ 2 สูงกว่าเท่าตัว) หรือ "ซอร์บฟิล" ในระบบการชะล้าง II และ III (เนื่องจากมีส่วนประกอบที่เป็นพิษน้อยกว่า) การตรวจจับโซนดำเนินการด้วยสารละลาย 10% ของกรดฟอสโฟโมลิบดิก ปริมาตรของตัวอย่างที่ใช้คือไม่เกิน 5 µl ความสูงของส่วนหน้าตัวชะที่เพิ่มขึ้นคือ 6 ซม. เวลาในการชะคือ 30 - 60 นาที การสแกนความยาวคลื่น แล = 675 นาโนเมตร หลังจากแปรรูปจานแล้ว ซาโปนินของอาราเลียและชูการ์บีทจะปรากฏในรูปแบบของสามโซนที่มีความเข้มข้นต่างกัน

มุมมองทั่วไปของเดนซิโตแกรมที่ได้รับระหว่างการสแกนจะแสดงไว้ในรูปที่ 1 1.

การเปรียบเทียบโครมาโตกราฟีของซาโปนินที่แยกได้จากยาเม็ด Saparal (รูปที่ 1, a) และ "Tincture of Aralia" (รูปที่ 1) 1,6) ช่วยให้เราจดอัตราส่วนต่างๆ ได้ 44

อะราโลไซด์ A, B และ C ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของรูปแบบยาเหล่านี้ ความไม่สอดคล้องกันที่คล้ายกันในอัตราส่วนของซาโปนินแต่ละตัวในวัตถุดิบขึ้นอยู่กับสภาพการเจริญเติบโตของพืชถูกบันทึกไว้ก่อนหน้านี้ อัตราส่วนของซาโปนินในผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป แบบฟอร์มการให้ยาประเมินได้ง่ายโดยใช้เดนซิโตแกรมผลลัพธ์ เนื่องจากโครมาโตกราฟีแสดง 3 โซนที่สอดคล้องกับซาโปนิน และเดนซิโตแกรมมียอดเขา 3 จุด ตามลำดับ พื้นที่ของยอดเขาทั้งหมดจึงถูกรวมเข้าด้วยกันเมื่อสร้างการพึ่งพาการสอบเทียบ ข้อผิดพลาดในกรณีนี้ต่ำกว่าเมื่อทำการคำนวณตามพารามิเตอร์ของจุดสูงสุดของส่วนประกอบใดส่วนประกอบหนึ่งโดยคำนึงถึงความแปรปรวนของอัตราส่วน (รูปที่ 2)

ข้าว. I. เดนซิโตแกรมที่ได้จากการสแกนเพลต TLC: ก- Aralia saponins ที่แยกได้จากยาเม็ด "Saparal" 6 - ซาโปนินจากทิงเจอร์ Aralia; วี- ซาโปนินน้ำตาลบีท ปริมาณซาโปนินทั้งหมดในกลุ่มตัวอย่างคือ 5 ไมโครกรัม ก, บี, ซี- ยอดซาโปนิน 0 - เส้นเริ่มต้น; ฉ- แนวหน้า

ข้าว. 2. การขึ้นต่อกันของการสอบเทียบผลรวมของพื้นที่ของพิคอนซาโปนินในโครมาโตกราฟีกับเนื้อหาในตัวอย่าง / - ซาโปนินอาราเลีย; 2 - ซาโปนินน้ำตาลบีท แกนแอบซิสซาคือปริมาณซาโปนินในตัวอย่าง (mcg) แกนกำหนดคือผลรวมของพื้นที่พีค (cm2)

การขึ้นต่อกันของการสอบเทียบของผลรวมของพื้นที่พีคบนเดนซิโตแกรมกับปริมาณสารในตัวอย่างได้มาจากโครมาโตกราฟีของชุดสารละลายมาตรฐานที่มีปริมาณซาโปนินที่ทราบ สารละลายเริ่มแรกเตรียมโดยการละลายซาโปนินส่วนที่ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำในเอทานอล 80% และทำให้แห้งจนมีน้ำหนักคงที่ ชุดสารละลายทำงานถูกเตรียมโดยการเจือจางอนุกรมของสารละลายเริ่มต้นด้วยเอธานอล 80% ปริมาณซาโปนินในนั้นคือ 0.04 - 2.0 มก./มล. (0.2 - 10 ไมโครกรัมในตัวอย่างที่มีปริมาตรตัวอย่าง 5 ไมโครลิตร) ช่วงความเข้มข้นนี้ถือว่าเหมาะสมที่สุดสำหรับการสแกน ปริมาณซาโปนินขั้นต่ำที่กำหนดโดยวิธีนี้คือ 0.2 ไมโครกรัม/ตัวอย่าง ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ในกรณีนี้จะต้องไม่เกิน 0.03

ผลลัพธ์ที่ได้ขึ้นอยู่กับการสอบเทียบไม่เป็นเชิงเส้น ซึ่งสอดคล้องกับทฤษฎี Kubelka-Munk อย่างสมบูรณ์ ซึ่งคำนึงถึงการดูดกลืนและการกระเจิงของแสงโดยตัวดูดซับ ในช่วงความเข้มข้นต่ำที่แคบ การขึ้นต่อกันสามารถพิจารณาเป็นเส้นตรงได้ (0.2 - 2.0 ไมโครกรัม/ตัวอย่าง) ส่วนที่ไม่เชิงเส้นของเส้นโค้งสามารถทำให้เป็นเส้นตรงได้โดยการแปลงปริมาณของสารในตัวอย่างและพื้นที่พีคให้เป็นค่าซึ่งกันและกัน และใช้แบบฟอร์มที่แสดงในรูปที่ 1 3.

ข้าว. 3. การขึ้นอยู่กับค่าส่วนกลับของผลรวมของพื้นที่พีคของซาโปนินบนโครมาโตแกรม (1/S 10 -1) กับค่าส่วนกลับของเนื้อหาในตัวอย่าง (1/m - 10 -1) 1 ซาโปนิน -aralia; 2 - ซาโปนินน้ำตาลบีท

โดยใช้ความสัมพันธ์ในการปรับเทียบผลลัพธ์ เนื้อหาของซาโปนินในทิงเจอร์ Aralia ถูกกำหนด ทิงเจอร์ 5 มล. เจือจางด้วยเอธานอล 70% ในขวดวัดปริมาตรขนาด 25 มล. สารละลายที่ได้ 5 ไมโครลิตรถูกนำไปใช้กับเส้นเริ่มต้นของเพลต Armsorb สารละลายมาตรฐานของอะราโลไซด์ 5 ไมโครลิตรที่มีความเข้มข้น 1 มก./มล. (5 ไมโครกรัมในตัวอย่าง) ถูกนำไปใช้กับจุดที่อยู่ติดกัน ประมวลผลตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ความแตกต่างระหว่างผลลัพธ์ที่ได้รับและผลลัพธ์ของการพิจารณาโดยใช้ FS 42-1647-93 (5.3 มก./มล.) อยู่ที่ 6 - 7% ในทิศทางของการประเมินค่าสูงเกินไป ซึ่งสามารถอธิบายได้ด้วยการสูญเสียซาโปนินในระหว่างขั้นตอนการเตรียมการแบบหลายขั้นตอน การเตรียมตัวอย่างโดยใช้ FS (ตาราง)

วิธีที่อธิบายไว้ข้างต้นใช้ในการระบุซาโปนินในยาเม็ด Saparal และในวัตถุดิบจากพืช (รากแมนจูเรียอาราเลียและเหง้าหัวบีท) ด้วยการสกัดซาโปนินจากเม็ดยาในเบื้องต้นอย่างละเอียดถี่ถ้วน - เอทานอลร้อน 80% การเบี่ยงเบนจากผลลัพธ์ของการพิจารณาตาม FS 42-1755 - 81 สำหรับแท็บเล็ต (0.040 กรัม) อยู่ภายในขอบเขตเดียวกันกับทิงเจอร์ (ตาราง)

ดังนั้น จึงแสดงให้เห็นถึงความเป็นไปได้ของการกำหนดปริมาณอย่างรวดเร็วของซาโปนินไตรเทอร์พีน อนุพันธ์ของกรดโอลีอาโนลิกในเภสัชภัณฑ์ และวัตถุดิบจากพืชโดยใช้วิธี HPTLC พร้อมการประเมินเชิงปริมาณในภายหลังของโซนผลลัพธ์โดยใช้การสแกนความหนาแน่น

ผลลัพธ์ของการพิจารณามีความสัมพันธ์ค่อนข้างดีกับผลลัพธ์ของการพิจารณาของ FS เทคนิคนี้ช่วยให้คุณสามารถรวมการกำหนดความถูกต้องของยาโดย TLC (โดย FS) เข้ากับการสแกนโซนของส่วนประกอบบนจานและการประเมินเชิงปริมาณในภายหลัง โครมาโตแกรมที่ได้จากการสแกนยังทำให้สามารถกำหนดอัตราส่วนของซาโปนินแต่ละตัวในวัตถุที่วิเคราะห์ได้

ผลลัพธ์ของการกำหนดเชิงปริมาณของ araloznds ในซีโทฟิค-จากอาราเลีย (I) และแท็บเล็ต "Saparal" (2) โดย THC โดยใช้การสแกน dsnsptoietrnn /" = 0.95, และ - 5,/=2,78,/=4

ศึกษาองค์ประกอบของไขมันและฟลาโวนอยด์ของตัวอย่างบางชนิดในสกุล ( ลาธีรัส .)

จากตัวแทนจำนวนมากในตระกูล Legume เช่น อัลฟัลฟา ลูพินโคลเวอร์ เวทช์ ฟลาโวนอยด์ ที่มีการออกฤทธิ์ที่หลากหลาย: ต้านการอักเสบ สมานแผล เสริมสร้างหลอดเลือด เป็นต้น ไอโซฟลาโวนถูกแยกได้จากโคลเวอร์สีแดง: ไบโอคานินเอ - 0.8% และฟอร์โมโนเนติน - 0.78% ซึ่งมีฤทธิ์เอสโตรเจน

เราศึกษาองค์ประกอบของฟลาโวนอยด์ในสกุล Ch. การหว่าน (I), Chlugovaya (II), Ch. ฤดูใบไม้ผลิ (III), Ch. ป่า

เพื่อจุดประสงค์ในการใช้ลิพิดคอมเพล็กซ์ที่เป็นไปได้ วัตถุเจือปนอาหารและการเตรียมยา เรายังศึกษาองค์ประกอบเศษส่วนทั้งหมดของไขมันในหญ้าและเมล็ดของคางด้วย

วัสดุและวิธีการ

การแยกส่วนของไขมันออกจากวัตถุดิบแห้งดำเนินการตามวิธีการของไบลห์และไดเออร์

เติมน้ำกลั่น 1.6 มิลลิลิตรลงในตัวอย่าง (0.2 กรัม) ของวัสดุพืชแห้ง และเก็บไว้ในที่เย็นเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นเติมส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม - เมทานอล (1:2) 6 มล. แล้วทิ้งไว้ 3 วัน หลังจากนั้นปั่นแยกที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที เติมน้ำ 2 มิลลิลิตรและคลอโรฟอร์ม 2 มิลลิลิตรลงในส่วนลอยเหนือตะกอนใส ระบบ 2 เฟสที่เป็นผลลัพธ์ถูกแยกออกในกรวยแยก ชั้นคลอโรฟอร์มถูกล้างสองครั้งด้วยเมทานอลและระเหยจนแห้งบนเครื่องระเหยแบบหมุน สารตกค้างถูกทำให้แห้งในเครื่องดูดความชื้นแบบสุญญากาศ จากนั้นเจือจางด้วยคลอโรฟอร์มจนถึงความเข้มข้น 10 มก./มล. และสารละลายถูกเก็บไว้ในคลอโรฟอร์มที่เสถียรที่ + 4°C

การวิเคราะห์เชิงคุณภาพของส่วนของไขมันดำเนินการโดยใช้วิธี TLC บนเพลต Kieselgel 60 (254) ในระบบตัวทำละลายต่อไปนี้:

A. สำหรับไขมันที่เป็นกลาง: 1) เฮกเซน - เบนซีน (9:1); 2) เฮกเซน - เอสเทอร์ - กรดอะซิติก (90:10:1)

B. สำหรับโพลาร์ลิพิด (ฟอสโฟลิปิด): 1) คลอโรฟอร์ม - อะซิโตน - เมทานอล - กรดอะซิติก - น้ำ (6:8:2:2:1), มีฤทธิ์เป็นกรด; 2) คลอโรฟอร์ม - เมตา-

nol - แอมโมเนีย 26% (65:25:5) พื้นฐาน; 3) คลอโรฟอร์ม - เมทานอล - น้ำ (65:25:4) เป็นกลาง

เมื่อพิจารณาองค์ประกอบเชิงคุณภาพของฟอสโฟลิปิด การระบุพวกมันได้ดำเนินการโดยใช้นักพัฒนาหลายราย (ไอโอดีน, นินไฮดริน, รีเอเจนต์ Dragendorff, กรดซัลฟูริก) และด้วยความช่วยเหลือของ รฟมาตรฐาน

ชุดของระบบและรีเอเจนต์ข้างต้นช่วยให้สามารถวิเคราะห์เศษส่วนของไขมันที่แยกได้จากตัวอย่างของจีนอย่างครอบคลุม

เพื่อศึกษาองค์ประกอบของฟลาโวนอยด์โดยคำนึงถึงช่วงฤดูกาลปลูก จึงเลือกตัวอย่างต่อไปนี้: I (ระยะการออกดอก); IV (ระยะการออกดอก); III (สหาย) ระยะการออกดอก; II (ระยะออกดอก); II (ระยะติดผล); II (ระยะการเจริญเติบโตก่อนออกดอก)

การแยกฟลาโวนอยด์จากวัตถุดิบแห้งดำเนินการโดยใช้วิธีการที่รับประกันการสกัดที่ครบถ้วนสมบูรณ์

เพื่อจุดประสงค์นี้ให้วางสมุนไพรบด 1 กรัมในขวดที่มีกรดไหลย้อนเทเอธานอล 70% 20 มล. แล้วต้มเป็นเวลา 20 นาทีในอ่างน้ำ สารสกัดถูกทำให้เย็นลง กรองผ่านตัวกรองชอตต์แบบแก้ว และระเหยจนแห้งบนเครื่องระเหยแบบหมุน สารตกค้างถูกละลายในเอทิลแอลกอฮอล์จนถึงความเข้มข้นสุดท้ายที่ 10 มก./มล. การกำหนดปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดดำเนินการโดยใช้รูตินเป็นมาตรฐาน ผลการศึกษานี้แสดงไว้ในตาราง 3.

การหาองค์ประกอบเชิงคุณภาพของฟลาโวนอยด์ดำเนินการโดย TLC บนเพลต Kieselgel 60(254) จากเมอร์ค ในระบบตัวทำละลายของเอ็น-บิวทานอล - กรดอะซิติก - น้ำ (6:1:2) อุปกรณ์ตรวจจับ - กรดซัลฟูริกภายใต้รังสียูวี (254 นาโนเมตร) - จุดฟลาโวนอยด์ สีม่วงอ่อนบนพื้นหลังสีเขียว

ตารางที่ 1

ปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดในวัตถุดิบ (หญ้า) ของหญ้าประเภทต่างๆ (เป็น% ขึ้นอยู่กับน้ำหนักแห้งอย่างแน่นอน)

ข้าว. 1. TLC ขององค์ประกอบฟลาโวนอยด์ของแต่ละสายพันธุ์ในจีนัส C - ผลรวมของพยานฟลาโวนอยด์: onin - รฟ 0.28; กิจวัตรประจำวัน - ร.0.48; ลูทีโอลิน กลูโคไซด์ - รฟ 0.58; ฟอร์โมโนเนติน - รฟ 0.64; เควอซิติน - รฟ0,79: ลูทีโอลิน - รฟ 0.82; ไบโอคานิน เอ - รฟ 0.85; เอพิเจนิน - รฟ 0,92.

ข้าว. 2. TLC ของฟลาโวนอยด์จากหญ้าทุ่งหญ้าในระยะต่างๆ ของฤดูปลูก IIa - ระยะออกดอก; IIb - ระยะติดผล: IIc - ระยะพืชพรรณก่อนออกดอก C - ผลรวมของพยานฟลาโวนอยด์: onin - รฟฉ 0.28; กิจวัตรประจำวัน - รฟ 0.48; ลูทีโอลิน กลูโคไซด์ - รฟ 0.58; ฟอร์โมโนเนติน - รฟ 0.64; เควอซิติน - รฟ 0.79; ลูทีโอลิน - ร ( 0.82; ไบโอคานิน เอ - รฟ 0.85; เอพิเจนิน - รฟ 0,92.

เมื่อศึกษาองค์ประกอบของฟลาโวนอยด์ของ II ในระยะต่าง ๆ ของฤดูปลูกพบว่านอกเหนือจากรูตินและเควอซิตินแล้ว โอโนนินและฟอร์โมโนเนตินยังมีอยู่ในสารสกัดในปริมาณที่เห็นได้ชัดเจน สารฟลาโวนอยด์ที่เหลือจะพบได้ในปริมาณเล็กน้อย

ดังนั้นจึงแสดงให้เห็นว่าในคางประเภทต่างๆ ในช่วงต่างๆ ของฤดูปลูก พวกมันมีทั้งไกลโคไซด์และอะไกลโคน - โอโนนีน, รูติน, ลูทีโอลินกลูโคไซด์และอะไกลโคน: ฟอร์โมโนเนติน, เควอซิติน และลูทีโอลิน และองค์ประกอบของพวกมันจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับ ชนิดของพืชและในต้นเดียว (คางทุ่งหญ้า) ขึ้นอยู่กับระยะของฤดูปลูก

ตารางที่ 2

ปริมาณฟลาโวนอยด์หลักในตัวแทนแต่ละสกุล (ใน %, ในแง่ของน้ำหนักแห้งอย่างแน่นอน)

ในช่วงที่ 2 พบทั้ง ononin และ formononetin ในช่วงเจริญเติบโต ในช่วงออกดอกและติดผล ปริมาณของโอโนนินจะลดลงอย่างเห็นได้ชัด และปริมาณของฟอร์โมโนตินจะเพิ่มขึ้น

ปริมาณฟลาโวนอยด์หลักในตัวอย่างที่ศึกษาถูกกำหนดโดยใช้ TLC เชิงปริมาณภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ผลการศึกษานี้แสดงไว้ในตาราง 2.

ดังต่อไปนี้จากข้อมูลในตาราง 2, ประเภทต่างๆคางเป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยโบลฟลาโวนอยด์ ต้องขอบคุณพืชเหล่านี้ที่แสดงฤทธิ์ทางชีวภาพประเภทหนึ่ง

บทสรุป:

งานที่สำคัญอย่างหนึ่งของเคมีสมัยใหม่คือการวิเคราะห์สารอินทรีย์ที่เชื่อถือได้และแม่นยำ ซึ่งมักมีโครงสร้างและคุณสมบัติคล้ายคลึงกัน หากไม่มีสิ่งนี้ก็จะเป็นไปไม่ได้ที่จะดำเนินการทางเคมี ชีวเคมี และ การวิจัยทางการแพทย์วิธีการวิเคราะห์สิ่งแวดล้อม การตรวจทางนิติเวช ตลอดจนสารเคมี น้ำมัน ก๊าซ อาหาร อุตสาหกรรมการแพทย์ และภาคส่วนอื่น ๆ ของเศรษฐกิจของประเทศส่วนใหญ่อิงจากสิ่งนี้ บทความนี้จะนำเสนอวิธีการและเทคนิคเพียงส่วนเล็กๆ เท่านั้น แต่อย่างที่คุณเห็นจากสิ่งเล็กๆ นี้ โครมาโตกราฟีแบบเลเยอร์บางมีความสามารถที่สำคัญและจริงจัง ผสมผสานกับความสะดวกสบายและความเรียบง่าย