Các giai đoạn phân lập vi sinh vật hiếu khí thuần chủng. Sinh lý vi sinh vật: đặc tính nuôi cấy của vi khuẩn, phân lập vi sinh vật nuôi cấy thuần khiết

Việc nuôi cấy vi sinh vật ngoài thành phần môi trường dinh dưỡng còn phụ thuộc vào các yếu tố vật lý, hóa học (nhiệt độ, độ axit, độ thoáng khí, ánh sáng,…). Hơn nữa, các chỉ số định lượng của mỗi loại vi khuẩn không giống nhau và được xác định bởi đặc điểm trao đổi chất của từng nhóm vi khuẩn. Có các phương pháp nuôi cấy vi sinh vật trong môi trường dinh dưỡng rắn và lỏng trong các điều kiện hiếu khí, kỵ khí và các điều kiện khác.

Các phương pháp phân lập vi sinh vật hiếu khí thuần chủng. Để thu được các khuẩn lạc biệt lập, trong quá trình ứng dụng, vật liệu được phân phối sao cho các tế bào vi khuẩn ở xa nhau. Để có được môi trường nuôi cấy thuần khiết, hai nhóm phương pháp chính được sử dụng:

a) các phương pháp dựa trên nguyên tắc tách cơ học các vi sinh vật;

b) phương pháp dựa trên đặc tính sinh học của vi sinh vật.

Phương pháp dựa trên nguyên lý tách cơ học của vi sinh vật

Sàng bằng thìa theo Drigalski. Lấy 3 đĩa Petri đựng môi trường dinh dưỡng. Nhỏ một giọt vật liệu thử vào cốc đầu tiên bằng vòng hoặc pipet và dùng thìa chà xát lên toàn bộ bề mặt của thạch dinh dưỡng. Sau đó, thìa được chuyển sang cốc thứ 2 và dịch cấy còn lại trên thìa được chà xát vào bề mặt môi trường dinh dưỡng. Tiếp theo, thìa được chuyển sang cốc thứ 3 và việc tiêm chủng được thực hiện theo cách tương tự. Trên đĩa thứ nhất số lượng khuẩn lạc phát triển tối đa, trên đĩa thứ 3 số lượng khuẩn lạc tối thiểu tăng lên. Tùy thuộc vào hàm lượng tế bào vi sinh vật trong vật liệu thử, các khuẩn lạc riêng lẻ phát triển trên một trong các đĩa, thích hợp để phân lập môi trường nuôi cấy thuần khiết của vi sinh vật.

Phương pháp Pasteur (phương pháp pha loãng). Một loạt các độ pha loãng liên tiếp, thường là gấp 10 lần, được chuẩn bị từ vật liệu đang được nghiên cứu trong môi trường lỏng vô trùng hoặc dung dịch sinh lý trong ống nghiệm. Tiếp theo, vật liệu được gieo với một bãi cỏ 0,5 ml từ mỗi ống. Người ta cho rằng trong một số ống nghiệm sẽ còn sót lại một số vi sinh vật có thể đếm được khi gieo trên môi trường đĩa. Phương pháp này cho phép tính toán số lượng vi sinh vật trong vật liệu đang nghiên cứu. (Số lượng vi sinh vật là số lượng khuẩn lạc trên đĩa tăng trưởng vi sinh vật cuối cùng nhân với tỷ lệ pha loãng của vật liệu).

Gieo vòng (gieo theo hàng). Lấy một đĩa Petri đựng thạch dinh dưỡng chia thành 4 phần, vẽ đường phân giới ở mặt ngoài đáy đĩa. Vật liệu đang nghiên cứu được đưa vào khu vực đầu tiên bằng một vòng lặp và các đường song song được vẽ dọc theo toàn bộ khu vực này với khoảng cách khoảng 5 mm với nhau. Sử dụng cùng một vòng lặp, không thay đổi vị trí của nó so với thạch, vẽ các đường tương tự trên các phần khác của đĩa. Ở nơi có nhiều tế bào vi sinh vật rơi trên môi trường thạch, sự phát triển của vi sinh vật sẽ ở dạng vệt liên tục. Trong các khu vực có số lượng tế bào nhỏ, các khuẩn lạc riêng lẻ phát triển. Ngoài ra, có thể đổ dung dịch pha loãng của môi trường nuôi cấy hỗn hợp lên bề mặt môi trường rắn trong đĩa.

Phương pháp lọc. Nó dựa trên việc đưa vật liệu đang nghiên cứu qua các bộ lọc đặc biệt có đường kính lỗ rỗng nhất định và phân tách các vi sinh vật chứa theo kích thước. Phương pháp này được sử dụng chủ yếu để thanh lọc virus khỏi vi khuẩn, cũng như để sản xuất các thể thực khuẩn và độc tố (trong dịch lọc - thể thực khuẩn tinh khiết, độc tố tinh khiết).

Phương pháp dựa trên đặc tính sinh học của vi sinh vật

Tạo điều kiện tối ưu cho sinh sản

Tạo ra một chế độ nhiệt độ tối ưu để ngăn chặn có chọn lọc sự sinh sản của hệ vi sinh vật đi kèm ở nhiệt độ thấp và thu được vi khuẩn ưa lạnh hoặc ưa nhiệt. Hầu hết vi khuẩn phát triển tốt ở 35-37°C, Yersinia phát triển tốt ở 22°C, Leptospira nuôi cấy ở 30°C. Vi khuẩn ưa nhiệt phát triển ở nhiệt độ ngoài phạm vi nhiệt độ của các loài vi khuẩn liên quan khác (ví dụ, Campylobacter được nuôi cấy ở 42°C).
Tạo điều kiện hiếu khí, kỵ khí. Hầu hết các vi sinh vật phát triển tốt khi có oxy trong khí quyển. Vi khuẩn kỵ khí bắt buộc phát triển trong điều kiện loại trừ sự hiện diện của oxy trong khí quyển (tác nhân gây bệnh uốn ván, ngộ độc, bifidumbacteria, bacteroides, v.v.). Các vi sinh vật hiếu khí chỉ phát triển ở nồng độ oxy thấp và nồng độ CO2 cao (Campylobacter, Helicobacter).
Phương pháp làm giàu. Vật liệu đang nghiên cứu được cấy vào môi trường dinh dưỡng chọn lọc nhằm thúc đẩy sự phát triển của một loại vi sinh vật nhất định.

Phương pháp phân lập vi sinh vật nuôi thuần khiết

Vì vi khuẩn phát triển khuếch tán trong môi trường lỏng, tức là dễ dàng phân bố khắp môi trường nên rất khó để phân lập tế bào vi sinh vật này với tế bào vi sinh vật khác. Vì vậy, phương pháp của Pasteur không phải lúc nào cũng mang lại môi trường nuôi cấy thuần khiết. Do đó, hiện nay, phương pháp này được sử dụng chủ yếu để giảm sơ bộ nồng độ vi sinh vật trong nguyên liệu trước khi cấy vào môi trường rắn để thu được các khuẩn lạc phân lập.

Phương pháp tách cơ học vi sinh vật bằng môi trường dinh dưỡng rắn. Các phương pháp này bao gồm phương pháp Koch và phương pháp Drgalski.

Phương pháp Koch (phương pháp gieo sâu).

Vật liệu thử được đưa bằng vòng vi khuẩn hoặc pipet Pasteur vào ống nghiệm có môi trường dinh dưỡng đậm đặc nóng chảy. Khuấy đều lượng chứa trong ống nghiệm bằng cách xoay ống nghiệm giữa hai lòng bàn tay. Một giọt chất đã pha loãng được chuyển sang ống nghiệm thứ hai, từ ống thứ hai sang ống thứ ba, v.v. Nội dung của mỗi ống nghiệm, bắt đầu từ ống đầu tiên, được đổ vào các đĩa Petri vô trùng. Sau khi môi trường đông đặc trong đĩa, chúng được đặt vào máy điều nhiệt để nuôi cấy.

Để phân lập vi sinh vật kỵ khí bằng phương pháp Koch cần hạn chế lượng oxy tiếp cận môi trường nuôi cấy.

Với mục đích này, bề mặt gieo hạt sâu trong đĩa Petri được đổ đầy hỗn hợp parafin và dầu hỏa vô trùng (1:1). Bạn cũng có thể để chất cấy đã trộn kỹ với môi trường thạch trực tiếp vào ống nghiệm.

Trong trường hợp này, nút bông được thay thế bằng nút cao su hoặc bề mặt thạch được đổ đầy hỗn hợp parafin và dầu hỏa. Để tách các khuẩn lạc vi sinh vật kỵ khí đã phát triển, các ống được làm nóng nhẹ bằng cách quay nhanh trên ngọn lửa đốt. Thạch gần thành tan chảy và cột dễ dàng trượt vào đĩa Petri đã chuẩn bị. Tiếp theo, cột thạch được cắt bằng dao mổ vô trùng, các khuẩn lạc được loại bỏ bằng vòng vô trùng hoặc dao cắt mao quản vô trùng và chuyển sang môi trường lỏng.

Phương pháp Drigalski dựa trên sự phân tách cơ học của các tế bào vi sinh vật trên bề mặt môi trường dinh dưỡng đậm đặc trong đĩa Petri.

Mỗi tế bào vi sinh vật, cố định ở một nơi nhất định, bắt đầu nhân lên, tạo thành một đàn.

Để gieo hạt bằng phương pháp Drygalsky, người ta sử dụng một số đĩa Petri chứa đầy môi trường dinh dưỡng đậm đặc.

Một giọt vật liệu thử được đặt trên bề mặt môi trường.

Sau đó, sử dụng thìa vô trùng, giọt này được phân phối khắp môi trường dinh dưỡng (gieo hạt).

Việc gieo hạt cũng có thể được thực hiện bằng cách ria bằng vòng vi khuẩn. Cùng một thìa hoặc vòng lặp được sử dụng để gieo thứ hai, thứ ba, v.v. cốc. Theo quy định, trong cốc đầu tiên sau khi gieo hạt, vi sinh vật phát triển xuất hiện dưới dạng lớp phủ liên tục, trong các cốc tiếp theo, hàm lượng vi sinh vật giảm dần và hình thành các khuẩn lạc phân lập, từ đó có thể dễ dàng phân lập nuôi cấy thuần khiết bằng cách sàng lọc. .

Do đó, trong các khu vực đầu tiên, sự tăng trưởng liên tục đạt được và dọc theo các giai đoạn tiếp theo, các khuẩn lạc biệt lập sẽ phát triển, đại diện cho con cái của một tế bào.

Để tiết kiệm phương tiện và đồ dùng, bạn có thể sử dụng một cốc, chia thành các ô và gieo theo một vệt theo tuần tự (phương pháp làm cạn kiệt vệt).

Để thực hiện việc này, hãy lấy vật liệu thành một vòng lặp và vẽ một loạt các nét song song với nó, đầu tiên dọc theo bề mặt của khu vực đầu tiên, sau đó gieo hạt lần lượt tất cả các khu vực khác với các ô còn lại trên vòng lặp.

Với mỗi lần đột quỵ tiếp theo, số lượng tế bào được gieo hạt sẽ giảm đi.

Phương pháp phân lập chủng thuần khiết bằng hóa chấtđược sử dụng để phân lập các chủng vi sinh vật kháng một số hóa chất.

Ví dụ, bằng cách sử dụng phương pháp này, có thể phân lập được môi trường nuôi cấy thuần khiết của vi khuẩn lao có khả năng kháng axit, kiềm và rượu. Trong trường hợp này, vật liệu đang nghiên cứu được đổ đầy dung dịch axit 15% hoặc antiformin trước khi gieo và giữ trong máy điều nhiệt trong 3...4 giờ.

Sau khi tiếp xúc với axit hoặc kiềm, các tế bào của trực khuẩn lao vẫn còn sống và tất cả các vi sinh vật khác có trong vật liệu thử nghiệm sẽ chết. Sau khi trung hòa axit hoặc kiềm, vật liệu đã xử lý được gieo trên môi trường rắn và thu được các khuẩn lạc riêng biệt của mầm bệnh lao.

Phương pháp sinh học phân lập vi sinh vật gây bệnh thuần chủng dựa trên sự lây nhiễm của động vật thí nghiệm nhạy cảm với loại mầm bệnh này với vật liệu thử nghiệm.

Nếu một vi sinh vật gây bệnh có trong đối tượng đang nghiên cứu, động vật thí nghiệm sẽ bị bệnh và chết. Sau khi khám nghiệm tử thi một con vật chết, các cơ quan nội tạng được cấy vào môi trường đặc biệt, trên đó nuôi cấy thuần chủng các vi khuẩn phân lập phát triển.

Trước567891011121314151617181920Tiếp theo

XEM THÊM:

Phân lập nuôi cấy vi khuẩn thuần khiết

Nuôi cấy thuần khiết là nuôi cấy có chứa các vi sinh vật cùng loài và thu được dưới dạng con của một tế bào. Các môi trường nuôi cấy thuần khiết có thể thu được từ tế bào vi sinh vật ban đầu, được phân lập bằng máy vi thao tác hoặc từ các khuẩn lạc được phân lập bằng cách cấy chúng vào các ống riêng biệt với môi trường dinh dưỡng.

Để phân lập một nền văn hóa thuần khiết, các phương pháp sau đây được sử dụng.

1. Phương pháp Drigalsky. Trong phương pháp này, môi trường dinh dưỡng nóng chảy được đổ vào 3 đĩa Petri. Một giọt vật liệu thử được thêm vào cốc đầu tiên và phân phối trên bề mặt môi trường dinh dưỡng bằng thìa vô trùng. Sau đó, thìa được chuyển sang cốc thứ hai rồi đến cốc thứ ba, chà xát vật liệu còn lại trên đó vào bề mặt của môi trường dinh dưỡng.

Khi gieo bằng phương pháp này, các khuẩn lạc riêng biệt sẽ phát triển trên đĩa thứ hai và đĩa thứ ba. Các khuẩn lạc riêng lẻ thu được được cấy chuyển vào ống nghiệm với môi trường dinh dưỡng để thu được vi sinh vật nuôi cấy thuần khiết.

2. Phương pháp hành trình song song. Với phương pháp này, vật liệu được phân bố trên bề mặt thạch theo các nét song song theo một hướng bằng cách sử dụng vòng vi khuẩn.

Sau đó, xoay cốc 90°, thực hiện các nét theo hướng vuông góc với các nét đầu tiên. Với phương pháp gieo hạt này, vật liệu trong vòng gieo được tiêu thụ dần dần và các khuẩn lạc vi khuẩn riêng biệt phát triển dọc theo các đường nét được áp dụng vào cuối quá trình gieo hạt.

3. Phương pháp Koch (phương pháp sàng theo độ sâu của môi trường). Với phương pháp này, một vòng vi khuẩn của vật liệu thử được đưa vào ống nghiệm có chứa thạch, làm tan chảy và làm nguội đến 43-45°C rồi trộn kỹ.

Sau đó, một vòng vật liệu được chuyển từ ống nghiệm này sang ống nghiệm thứ hai, rồi từ ống nghiệm này sang ống nghiệm thứ ba. Đổ các dung dịch vi khuẩn đã pha loãng đã chuẩn bị từ ống nghiệm vào các đĩa Petri vô trùng. Sau khi môi trường đông đặc, các cốc được đặt vào bộ điều nhiệt. Số lượng khuẩn lạc trong đĩa môi trường nuôi cấy giảm khi nguyên liệu bị pha loãng.

Câu hỏi trắc nghiệm theo chủ đề bài học:

1. Bản chất sự phát triển của vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng lỏng, bán lỏng và rắn.

Đặc điểm của khuẩn lạc vi sinh vật.

3. Sắc tố vi khuẩn và vai trò của chúng đối với vi sinh vật.

4. Phương pháp phân lập vi khuẩn thuần chủng.

Văn bản chuẩn bị cho bài học:

Văn học chính:

1. Vi sinh y học, virus học và miễn dịch học. Ed. A.A.

Vorobyova. M., 2004.

Văn học bổ sung:

1. L.B. Borisov. Vi sinh y học, virus học, miễn dịch học. M., 2002.

2. Được rồi. Pozdeev. Vi sinh y học.

M., GEOTAR-MEDIA, 2005.

3. Vi sinh y học. Danh mục. Ed. TRONG VA. Pokrovsky và O.K. Pozdeeva. M., GEOTAR-MED, 1998.

BÀI 5

CHỦ ĐỀ BÀI HỌC: Enzim vi khuẩn. Nghiên cứu hoạt tính enzyme của vi sinh vật. Hô hấp của vi khuẩn. Các phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn kỵ khí thuần chủng.

MỤC TIÊU BÀI HỌC: Làm quen với enzyme của vi khuẩn.

Phương pháp nghiên cứu xác định hoạt tính enzyme của vi sinh vật. Làm quen với quá trình hô hấp của vi khuẩn. Nghiên cứu phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn kỵ khí thuần chủng.

MỤC TIÊU BÀI HỌC:

1. Làm quen với enzyme của vi khuẩn.

Phương pháp nghiên cứu xác định hoạt tính enzyme của vi sinh vật.

3. Làm quen với quá trình hô hấp của vi khuẩn.

4. Nghiên cứu phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn kỵ khí thuần chủng.

Enzyme vi khuẩn

Tất cả các quá trình sinh hóa trong tế bào của vi sinh vật liên quan đến quá trình trao đổi chất, sinh trưởng và sinh sản đều được thực hiện với sự tham gia của các enzyme.

Enzyme được tổng hợp bởi chính tế bào vi sinh vật và có cấu trúc phức tạp. Chúng chỉ là một protein có trọng lượng phân tử cao (trypsin, pepsin, v.v.) hoặc bao gồm một protein (apoenzym) liên kết với một đồng yếu tố (coenzim). Coenzym có thể là chất vô cơ (kim loại) hoặc chất hữu cơ có trọng lượng phân tử thấp.

Việc phân loại enzyme dựa trên loại phản ứng mà chúng xúc tác.

Tất cả các enzyme được chia thành sáu loại:

1). Oxidoreductase- enzym chuyển điện tử. Những enzyme này xúc tác cho các phản ứng oxi hóa khử. Chúng bao gồm dehydrogenase (NAD, NADP, FAD), catalase và cytochrome.

Chuyển giao- enzym chuyển nhóm giữa các phân tử từ hợp chất này sang hợp chất khác. Chúng bao gồm acetyltransferase, phosphotransferase, aminotransferase.

3). Hydrolase- enzym chuyển các nhóm chức với sự tham gia của nước. Loại enzyme này bao gồm peptide hydrolase, glucosidase, amylase, esterase, lipase và phosphatase.

4). Lyase- enzyme loại bỏ hoặc thêm các hợp chất khác nhau bằng liên kết đôi mà không cần sự tham gia của nước.

Những enzyme này bao gồm pyruvate decarboxylase và aldolase.

5). Đồng phân- enzym chuyển các nhóm trong phân tử để tạo thành dạng đồng phân. Những enzyme này bao gồm triisophosphate isomerase và glucose phosphate isomerase.

Ligase (tổng hợp)- enzyme kết hợp hai phân tử đồng thời phá vỡ liên kết photphat sử dụng năng lượng ATP. Ligase bao gồm các enzyme xúc tác quá trình tổng hợp các chất hữu cơ phức tạp từ các hợp chất đơn giản (asparagine synthetase, cocarboxylase).

Hoạt tính của enzyme được đo bằng đơn vị quốc tế (IU). 1 ME tương ứng với lượng enzyme chuyển đổi một micromol cơ chất trong một phút ở điều kiện tiêu chuẩn.

Ở vi khuẩn có nội enzim và ngoại enzim.

Endoenzym nằm bên trong tế bào vi khuẩn và xúc tác các quá trình trao đổi chất nội bào. Exoenzymđược thải ra môi trường bên ngoài và thực hiện chức năng phân hủy các chất dinh dưỡng phức tạp.

Enzyme xâm lược. Vi khuẩn gây bệnh có một nhóm exoenzym đặc biệt gọi là enzyme xâm lược. Chúng thực hiện các chức năng tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhập và lây lan trong các mô của cơ thể vật chủ và làm suy yếu đặc tính bảo vệ của nó.

Các enzyme xâm lấn bao gồm: hyaluronidase, neuraminidase, collagenase, protease, fibrinolysin, hemolysin, leukocidin.

Các enzym cấu thành và cảm ứng. Các enzyme được tế bào tổng hợp với tốc độ không đổi, bất kể sự có mặt của cơ chất trong môi trường, được gọi là cấu thành. Cảm ứng enzyme (thích nghi) chỉ được hình thành khi có chất nền thích hợp trong môi trường.

Ví dụ, một enzym beta-galactosidase chỉ bắt đầu được tổng hợp khi carbohydrate lactose được thêm vào môi trường dinh dưỡng, enzyme này sẽ phân hủy môi trường này để tạo thành glucose và galactose.

Phương pháp xác định hoạt tính enzyme của vi khuẩn

Điều kiện tiên quyết để xác định chủng vi khuẩn thuần chủng phân lập là xác định hoạt tính enzyme liên quan đến carbohydrate và protein (“hộ chiếu” sinh hóa của loài).

Để xác định các enzym phân hủy carbohydrate (enzym phân giải đường) Phương tiện chẩn đoán phân biệt Hiss được sử dụng.

Môi trường Hiss chứa nước peptone, chất chỉ thị pH, phao để thu khí và một trong các carbohydrate (glucose, lactose, maltose, mannitol, sucrose, tinh bột, v.v.). Nếu vi khuẩn phân hủy carbohydrate, axit sẽ được hình thành và màu sắc của môi trường thay đổi do chất chỉ thị pH trong đó. Hầu hết các vi khuẩn gây bệnh phân hủy carbohydrate để chỉ tạo ra axit; Một số loài lên men cacbohydrat để tạo ra axit và khí (CO2).

Đồng thời, màu sắc của môi trường thay đổi và xuất hiện bọt khí trong phao.

Hoạt động phân giải protein của vi khuẩn. Các chỉ số về sự phân hủy protein sâu là sự hình thành indole, amoniac, hydro sunfua.Để xác định các chất khí này, vi khuẩn nuôi cấy thuần khiết được cấy vào nước dùng peptone thịt hoặc nước peptone vào ống nghiệm có chỉ thị bằng giấy đặc biệt.

Nếu có sản phẩm phân hủy thì màu của chất chỉ thị tương ứng sẽ thay đổi.

Hoạt tính phân giải protein của vi khuẩn cũng được xác định bằng cách gieo chủng cấy thuần khiết bằng cách bơm nó vào cột gelatin dựa trên sự hiện diện và bản chất hóa lỏng của môi trường, ví dụ, ở dạng cây Giáng sinh lộn ngược, một cái đinh, một phễu, v.v.

Sự chuyển hoá năng lượng

Đây là tập hợp các phản ứng sinh hóa, kết quả của nó là sự hình thành (tích lũy năng lượng) và phân tách (tiêu thụ năng lượng) của các liên kết năng lượng cao trong phân tử ATP.

Ở vi khuẩn, ATP có thể được tổng hợp nhờ quá trình lên men và hô hấp.

Lên men. Một phương pháp thu năng lượng cũ hơn, kém hiệu quả hơn, trong đó, do sự phân hủy của phân tử glucose, 2 phân tử ATP được hình thành. Sản phẩm cuối cùng của quá trình lên men là CO2, nước, rượu và axit hữu cơ.

Quá trình xảy ra mà không có sự tham gia của oxy.

Hơi thở gọi là quá trình phosphoryl hóa oxy hóa carbohydrate với sự hình thành ATP, CO2 và các phân tử nước. Sự phân hủy của một phân tử glucose sẽ giải phóng 12 electron đi qua chuỗi enzyme hô hấp, cung cấp năng lượng cho quá trình tổng hợp 36 phân tử ATP. Sự giải phóng electron khỏi chuỗi hô hấp được thực hiện bởi các chất gọi là chất nhận điện tử.

Những chất này bao gồm oxy, sunfat, nitrat, cacbonat. Nếu chất nhận điện tử cuối cùng là oxy phân tử thì quá trình hô hấp được gọi là thể dục nhịp điệu. Trong trường hợp các hợp chất khác nhận electron hữu hạn thì quá trình hô hấp được gọi là kỵ khí.

Dựa vào kiểu hô hấp, vi khuẩn được chia thành 4 nhóm chính:

1. hiếu khí bắt buộc (nghiêm ngặt) phát triển với khả năng tiếp cận oxy miễn phí (tác nhân gây bệnh lao).

vi khuẩn hiếu khí phát triển ở nồng độ oxy thấp (tới 1%) và nồng độ carbon dioxide tăng (Haemophilusenzae).

vi khuẩn kỵ khí tùy ý có thể phát triển cả trong điều kiện có oxy và trong điều kiện yếm khí (E. coli).

4. Vi khuẩn kỵ khí bắt buộc (nghiêm ngặt) chỉ có thể phát triển trong điều kiện hoàn toàn không có oxy trong môi trường (mầm bệnh uốn ván, ngộ độc, hoại tử khí).

Đọc thêm:

Phân lập chủng vi sinh vật thuần khiết

Môi trường nuôi cấy thuần khiết là môi trường nuôi cấy có chứa các vi sinh vật cùng loài. Phân lập vi khuẩn thuần chủng là một giai đoạn bắt buộc của nghiên cứu vi khuẩn trong chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm trong phòng thí nghiệm, trong nghiên cứu ô nhiễm vi khuẩn của các đối tượng môi trường khác nhau và nói chung, trong bất kỳ công việc nào với vi sinh vật.

Vật liệu được nghiên cứu (mủ, đờm, phân, máu và các vật liệu khác từ bệnh nhân; nước, đất, không khí, thực phẩm, xác động vật và người, vectơ) thường chứa các mối liên hệ của vi khuẩn.

Việc phân lập một nền văn hóa thuần khiết giúp có thể nghiên cứu các đặc điểm hình thái, văn hóa, sinh hóa, kháng nguyên và các đặc điểm khác, tổng số các đặc điểm đó xác định loài và loại mầm bệnh, nghĩa là xác định nó.

Để phân lập các chủng vi sinh vật thuần khiết, các phương pháp được sử dụng có thể chia thành nhiều nhóm.

phương pháp Pasteur- pha loãng tuần tự vật liệu thử trong môi trường dinh dưỡng lỏng đến nồng độ một tế bào trong thể tích (có ý nghĩa lịch sử).

2. Phương pháp Koch (“dây tấm”)– pha loãng tuần tự vật liệu thử trong môi trường thạch nóng chảy (nhiệt độ 48-500C), sau đó đổ vào các đĩa Petri, nơi thạch đông đặc lại.

Theo quy định, việc tiêm chủng được thực hiện từ ba hoặc bốn độ pha loãng cuối cùng, trong đó có ít vi khuẩn và sau đó, trong quá trình phát triển, các khuẩn lạc biệt lập xuất hiện trên đĩa Petri, được hình thành từ một tế bào mẹ ban đầu. Từ các khuẩn lạc biệt lập nằm sâu trong môi trường thạch, vi khuẩn thuần chủng thu được bằng cách cấy truyền trên môi trường tươi.

phương pháp Shukevich– được sử dụng để thu được môi trường nuôi cấy thuần khiết của Proteus và các vi sinh vật khác có tốc độ phát triển “leo thang”. Vật liệu thử được cấy vào nước ngưng tụ ở đáy thạch nghiêng. Vi khuẩn di động (Proteus) có khả năng nổi lên trên môi trường thạch nghiêng, dạng bất động vẫn phát triển bên dưới vị trí cấy.

Bằng cách gieo hạt lại các cạnh trên của môi trường nuôi cấy, bạn có thể thu được môi trường nuôi cấy thuần khiết.

4. Phương pháp Drigalski– được sử dụng rộng rãi trong thực hành vi khuẩn, trong đó vật liệu thử được pha loãng trong ống nghiệm với dung dịch sinh lý hoặc nước canh vô trùng.

Một giọt vật liệu được thêm vào cốc đầu tiên và trải đều trên bề mặt môi trường bằng thìa thủy tinh vô trùng. Sau đó, với cùng một chiếc thìa (không đốt trên ngọn lửa đốt), việc gieo hạt tương tự được thực hiện ở cốc thứ hai và cốc thứ ba. Với mỗi lần cấy vi khuẩn, ngày càng ít vi khuẩn sót lại trên thìa và khi gieo vào cốc thứ ba, vi khuẩn sẽ phân bố riêng biệt trên bề mặt môi trường dinh dưỡng.

Sau 1-7 ngày để các đĩa ở nhiệt độ ổn định (tùy theo tốc độ phát triển của vi sinh vật), ở đĩa thứ 3, mỗi vi khuẩn sinh ra một dòng tế bào, hình thành khuẩn lạc riêng biệt, được cấy chuyển lên môi trường thạch nghiêng để tích tụ. một nền văn hóa thuần khiết.

5. Phương pháp của Weinberg. Những khó khăn đặc biệt nảy sinh khi phân lập các chủng thuần khiết của vi khuẩn kỵ khí bắt buộc.

Nếu việc tiếp xúc với oxy phân tử không gây chết tế bào ngay lập tức thì việc gieo hạt được thực hiện theo phương pháp Drigalsky, nhưng sau đó các đĩa ngay lập tức được đặt vào thiết bị yếm khí. Tuy nhiên, phương pháp nhân giống thường được sử dụng hơn. Bản chất của nó nằm ở chỗ việc pha loãng vật liệu đang nghiên cứu được thực hiện trong môi trường dinh dưỡng thạch nóng chảy và làm nguội đến 45-500C. Thực hiện 6-10 độ pha loãng liên tiếp, sau đó môi trường trong ống nghiệm được làm nguội nhanh và bề mặt được phủ một lớp hỗn hợp parafin và dầu hỏa để ngăn không khí xâm nhập vào độ dày của môi trường dinh dưỡng.

Đôi khi môi trường dinh dưỡng sau khi gieo và trộn được chuyển vào các ống Burri vô trùng hoặc pipet Pasteur mao quản, các đầu của chúng được bịt kín. Khi pha loãng thành công, các khuẩn lạc kỵ khí biệt lập sẽ phát triển trong ống nghiệm, ống Burri và pipet Pasteur.

Để đảm bảo rằng các khuẩn lạc biệt lập có thể nhìn thấy rõ ràng, hãy sử dụng môi trường dinh dưỡng trong suốt. Để chiết xuất các khuẩn lạc kỵ khí riêng biệt, ống được làm nóng nhẹ bằng cách xoay ống trên ngọn lửa, trong khi thạch gần thành ống tan chảy và lượng chứa trong ống ở dạng cột thạch trượt ra đĩa Petri vô trùng.

Cột thạch được cắt bằng nhíp vô trùng và loại bỏ khuẩn lạc bằng vòng. Các khuẩn lạc đã chiết được đặt trong môi trường lỏng thuận lợi cho sự phát triển của các vi sinh vật phân lập (ví dụ, môi trường Kitta-Tarozzi). Môi trường thạch được thổi ra khỏi ống Burri bằng cách cho khí đi qua nút bông.

6. Phương pháp Hungate– khi họ muốn thu được các khuẩn lạc vi khuẩn biệt lập có độ nhạy đặc biệt cao với oxy (hiếu khí nghiêm ngặt), họ sử dụng phương pháp ống quay Hungate.

Để làm điều này, môi trường thạch nóng chảy được cấy vi khuẩn với dòng điện không đổi qua ống nghiệm chứa khí trơ không chứa tạp chất oxy. Sau đó, đậy ống nghiệm bằng nút cao su và đặt nằm ngang trong một kẹp để xoay ống nghiệm, đồng thời môi trường được phân bổ đều trên thành ống nghiệm và đông đặc lại thành một lớp mỏng. Việc sử dụng một lớp mỏng trong ống nghiệm chứa đầy hỗn hợp khí cho phép người ta thu được các khuẩn lạc riêng biệt có thể nhìn thấy rõ bằng mắt thường.

Phân lập từng tế bào bằng máy vi thao tác. Máy vi thao tác là một thiết bị cho phép bạn loại bỏ một tế bào khỏi huyền phù bằng micropipette hoặc microloop đặc biệt. Hoạt động này được kiểm soát dưới kính hiển vi. Một buồng ẩm được lắp đặt trên bệ kính hiển vi, trong đó đặt chế phẩm giọt treo.

Micropipettes (micropoops) được cố định trong các giá đỡ của bệ vận hành, chuyển động của nó trong trường quan sát của kính hiển vi được thực hiện với độ chính xác micron nhờ hệ thống vít và đòn bẩy.

Nhà nghiên cứu, nhìn qua kính hiển vi, loại bỏ từng tế bào bằng micropipette và chuyển chúng vào các ống chứa môi trường lỏng vô trùng để thu được bản sao tế bào.

Trước17181920212223242526272829303132Tiếp theo

XEM THÊM:

Phương pháp phân lập vi khuẩn hiếu khí thuần chủng

MỘT) phương pháp Pasteur– có ý nghĩa lịch sử, cung cấp sự pha loãng tuần tự của vật liệu thử trong môi trường dinh dưỡng lỏng bằng phương pháp cuộn

b) Phương pháp Koch– phương pháp đĩa – dựa trên sự pha loãng tuần tự của vật liệu thử với thạch pepton thịt, sau đó đổ ống nghiệm chứa vật liệu đã pha loãng vào đĩa Petri

V) Phương pháp Drigalski– khi gieo vật liệu bị nhiễm vi sinh vật nặng, sử dụng 2-3 cốc để gieo tuần tự bằng thìa.

G) Gieo vòng theo các nét song song.

Phương pháp sinh học dựa trên đặc tính sinh học của mầm bệnh.

MỘT) sinh học– Nhiễm trùng ở động vật rất nhạy cảm, nơi vi khuẩn sinh sôi và tích tụ nhanh chóng.

Trong một số trường hợp, phương pháp này là phương pháp duy nhất cho phép phân lập môi trường nuôi cấy mầm bệnh từ người bệnh (ví dụ như bệnh tularemia), trong các trường hợp khác, nó nhạy hơn (ví dụ: phân lập phế cầu khuẩn ở chuột bạch hoặc tác nhân gây bệnh). bệnh lao ở chuột lang).

b) Hóa chất– dựa trên khả năng kháng axit của vi khuẩn mycobacteria. Để giải phóng vật liệu khỏi hệ thực vật đi kèm, nó
xử lý bằng dung dịch axit.

Chỉ có trực khuẩn lao sẽ phát triển vì vi khuẩn kháng axit sẽ chết dưới ảnh hưởng của axit.

V) Phương pháp vật lý dựa trên khả năng chống chịu nhiệt của bào tử. Để phân lập môi trường nuôi cấy vi khuẩn hình thành bào tử từ
hỗn hợp, vật liệu được làm nóng ở 80°C và được cấy vào môi trường dinh dưỡng. Chỉ có vi khuẩn bào tử mới phát triển vì bào tử của chúng vẫn còn sống và phát triển.

G) phương pháp Shchukevich– dựa trên tính di động cao của Proteus Vulgaris, có khả năng tạo ra sự tăng trưởng leo.

Phương pháp gieo hạt từ khuẩn lạc lên môi trường thạch nghiêng và MPB:

MỘT) Chuyển từ khuẩn lạc sang thạch nghiêng

Mở nhẹ nắp đĩa, lấy một phần khuẩn lạc riêng bằng vòng que đã nung, để nguội, mở ống nghiệm chứa thạch nghiêng vô trùng, cầm nghiêng bằng tay trái để quan sát bề mặt của đĩa. trung bình.

Chuyển vòng nuôi cấy vào ống nghiệm mà không chạm vào thành ống nghiệm, chà xát lên môi trường dinh dưỡng, trượt dọc theo bề mặt từ mép này sang mép kia của ống nghiệm, nâng các nét lên trên cùng của môi trường - gieo hạt. Ống nghiệm được đóng lại và không buông ra, tên của vi khuẩn được tiêm chủng và ngày tiêm chủng được ký tên.

b) Chuyển từ khuẩn lạc sang nước dùng thịt-peptone

Kỹ thuật gieo hạt trên MPB về cơ bản giống như khi gieo hạt trên giá thể rắn.

Khi gieo trên MPB, vòng có vật liệu trên đó được ngâm trong môi trường. Nếu vật liệu nhớt và không thể loại bỏ khỏi vòng lặp, nó sẽ được cọ xát vào thành bình và sau đó rửa sạch bằng môi trường lỏng. Chất lỏng được thu thập bằng pipet Pasteur vô trùng hoặc pipet chia độ, được đổ vào môi trường dinh dưỡng.

Nhờ làm việc độc lập, học sinh nên biết:

Phương pháp phân lập vi sinh vật nuôi thuần khiết

2. Phương pháp nuôi cấy vi sinh vật

Có thể:

1. Kỹ năng chấp hành các quy định của chế độ chống dịch và các biện pháp đảm bảo an toàn

Khử trùng vật liệu, thực hiện xử lý tay

3. Chuẩn bị chế phẩm từ khuẩn lạc vi khuẩn

4. Kính hiển vi khuẩn lạc

5. Vi sinh vật nhuộm gram

BÀI 8

CHỦ THỂ.

Các phương pháp phân lập chủng thuần khiết (tiếp theo). Hoạt tính enzyme của vi khuẩn và phương pháp nghiên cứu nó.

Phương pháp Pasteur (phương pháp pha loãng hạn chế). Nó bao gồm việc thực hiện một loạt các pha loãng liên tiếp từ vật liệu đang nghiên cứu trong môi trường dinh dưỡng lỏng. Để làm điều này, một giọt chất cấy được đưa vào ống nghiệm có môi trường lỏng vô trùng, giọt từ nó được chuyển sang ống nghiệm tiếp theo và có tới 8...10 ống nghiệm được cấy theo cách này. Với mỗi độ pha loãng, số lượng tế bào vi sinh vật xâm nhập vào môi trường sẽ giảm đi và có thể đạt được độ pha loãng sao cho trong toàn bộ ống nghiệm chứa môi trường sẽ chỉ có một tế bào vi sinh vật, từ đó nuôi cấy vi sinh vật thuần khiết sẽ phát triển. Vì vi khuẩn phát triển khuếch tán trong môi trường lỏng, tức là dễ dàng phân bố khắp môi trường nên rất khó để phân lập tế bào vi sinh vật này với tế bào vi sinh vật khác. Vì vậy, phương pháp của Pasteur không phải lúc nào cũng mang lại môi trường nuôi cấy thuần khiết. Do đó, hiện nay, phương pháp này được sử dụng chủ yếu để giảm sơ bộ nồng độ vi sinh vật trong nguyên liệu trước khi cấy vào môi trường rắn để thu được các khuẩn lạc phân lập.

Phương pháp tách cơ học vi sinh vật bằng môi trường dinh dưỡng rắn. Các phương pháp này bao gồm phương pháp Koch và phương pháp Drgalski.

Phương pháp Koch (phương pháp gieo sâu). Vật liệu thử được đưa bằng vòng vi khuẩn hoặc pipet Pasteur vào ống nghiệm có môi trường dinh dưỡng đậm đặc nóng chảy. Khuấy đều lượng chứa trong ống nghiệm bằng cách xoay ống nghiệm giữa hai lòng bàn tay. Một giọt chất đã pha loãng được chuyển sang ống nghiệm thứ hai, từ ống thứ hai sang ống thứ ba, v.v. Nội dung của mỗi ống nghiệm, bắt đầu từ ống đầu tiên, được đổ vào các đĩa Petri vô trùng. Sau khi môi trường đông đặc trong đĩa, chúng được đặt vào máy điều nhiệt để nuôi cấy.

Để phân lập vi sinh vật kỵ khí bằng phương pháp Koch cần hạn chế lượng oxy tiếp cận môi trường nuôi cấy. Với mục đích này, bề mặt gieo hạt sâu trong đĩa Petri được đổ đầy hỗn hợp parafin và dầu hỏa vô trùng (1:1). Bạn cũng có thể để chất cấy đã trộn kỹ với môi trường thạch trực tiếp vào ống nghiệm. Trong trường hợp này, nút bông được thay thế bằng nút cao su hoặc bề mặt thạch được đổ đầy hỗn hợp parafin và dầu hỏa. Để tách các khuẩn lạc vi sinh vật kỵ khí đã phát triển, các ống được làm nóng nhẹ bằng cách quay nhanh trên ngọn lửa đốt. Thạch gần thành tan chảy và cột dễ dàng trượt vào đĩa Petri đã chuẩn bị. Tiếp theo, cột thạch được cắt bằng dao mổ vô trùng, các khuẩn lạc được loại bỏ bằng vòng vô trùng hoặc dao cắt mao quản vô trùng và chuyển sang môi trường lỏng.

Phương pháp Drigalski dựa trên sự phân tách cơ học của các tế bào vi sinh vật trên bề mặt môi trường dinh dưỡng đậm đặc trong đĩa Petri. Mỗi tế bào vi sinh vật, cố định ở một nơi nhất định, bắt đầu nhân lên, tạo thành một đàn.

Để gieo hạt bằng phương pháp Drygalsky, người ta sử dụng một số đĩa Petri chứa đầy môi trường dinh dưỡng đậm đặc. Một giọt vật liệu thử được đặt trên bề mặt môi trường. Sau đó, sử dụng thìa vô trùng, giọt này được phân phối khắp môi trường dinh dưỡng (gieo hạt).

Để tiết kiệm phương tiện và đồ dùng, bạn có thể sử dụng một cốc, chia thành các ô và gieo theo một vệt theo tuần tự (phương pháp làm cạn kiệt vệt). Để thực hiện việc này, hãy lấy vật liệu thành một vòng lặp và vẽ một loạt các nét song song với nó, đầu tiên dọc theo bề mặt của khu vực đầu tiên, sau đó gieo hạt lần lượt tất cả các khu vực khác với các ô còn lại trên vòng lặp. Với mỗi lần đột quỵ tiếp theo, số lượng tế bào được gieo hạt sẽ giảm đi.

Phương pháp phân lập chủng thuần khiết bằng hóa chấtđược sử dụng để phân lập các chủng vi sinh vật kháng một số hóa chất. Ví dụ, bằng cách sử dụng phương pháp này, có thể phân lập được môi trường nuôi cấy thuần khiết của vi khuẩn lao có khả năng kháng axit, kiềm và rượu. Trong trường hợp này, vật liệu đang nghiên cứu được đổ đầy dung dịch axit 15% hoặc antiformin trước khi gieo và giữ trong máy điều nhiệt trong 3...4 giờ. Sau khi tiếp xúc với axit hoặc kiềm, các tế bào của trực khuẩn lao vẫn còn sống và tất cả các vi sinh vật khác có trong vật liệu thử nghiệm sẽ chết. Sau khi trung hòa axit hoặc kiềm, vật liệu đã xử lý được gieo trên môi trường rắn và thu được các khuẩn lạc riêng biệt của mầm bệnh lao.

được sử dụng rộng rãi để xác định số lượng vi sinh vật sống trong đất và các chất nền tự nhiên khác. Việc sử dụng nó không chỉ cho phép tính đến số lượng vi sinh vật mà còn đánh giá tính đa dạng của chúng dựa trên hình thái của các khuẩn lạc.

Mẫu đất được lấy bằng thìa vô trùng và nghiên cứu được thực hiện vào ngày lấy mẫu. Bản chất của phương pháp này là gieo mẫu đất đang nghiên cứu lên môi trường dày đặc trong đĩa Petri và sau đó đếm các khuẩn lạc đã trưởng thành. Người ta tin rằng mỗi thuộc địa là kết quả của sự sinh sản của một tế bào. Công việc được thực hiện theo ba bước: chuẩn bị dung dịch pha loãng, gieo vào đĩa và đếm khuẩn lạc đã trưởng thành.

Việc cấy vi khuẩn được thực hiện bằng cách pha loãng huyền phù, tùy thuộc vào số lượng vi sinh vật dự kiến có trong chất nền đang nghiên cứu. Việc pha loãng được thực hiện trong nước máy vô trùng hoặc dung dịch natri clorua đẳng trương. Trong quá trình thử nghiệm, hệ số pha loãng không đổi được sử dụng. Thông thường, pha loãng thập phân được thực hiện.

Một mẫu đất cần phân tích (1-10 g) được cho vào bình cùng với 100 ml nước vô trùng và lắc. Sau đó chuyển 1 ml vật liệu thử bằng pipet vô trùng vào ống nghiệm có 9 ml nước vô trùng. Nếu vật liệu thử đã được pha loãng 100 lần thì thu được độ pha loãng 1:1000. Huyền phù của độ pha loãng này được trộn kỹ bằng cách lấy huyền phù thu được vào pipet và nhả ra khỏi pipet. Sau đó, dùng cùng một pipet lấy 1 ml dung dịch pha loãng thu được và chuyển sang ống nghiệm thứ hai - thu được độ pha loãng 1:10000. Các dung dịch pha loãng tiếp theo được chuẩn bị theo cách tương tự. Mức độ pha loãng được xác định bằng số lượng vi sinh vật ước tính có trong mẫu: càng nhiều vi sinh vật trong chất nền ban đầu thì số lượng pha loãng càng nhiều.

Việc cấy vi khuẩn được thực hiện trên môi trường thạch trong đĩa Petri. Để xác định tổng số vi sinh vật, người ta sử dụng thạch thịt-peptone hoặc cá-peptone (MPA, RPA); để xác định hàm lượng nấm trong đất, người ta sử dụng thạch rong biển (SA); để xác định số lượng các nhóm sinh lý khác nhau và các vi sinh vật chỉ định vệ sinh, sử dụng môi trường dinh dưỡng thích hợp. Môi trường thạch tan chảy trong nồi cách thủy được đổ vào các đĩa Petri vô trùng, mỗi đĩa 20-30 ml. Các đĩa được đặt trên bề mặt nằm ngang cho đến khi thạch cứng lại. Sử dụng pipet vô trùng, bôi một thể tích nhất định (thường là 0,1-0,5 ml) dung dịch pha loãng thích hợp, đã được trộn kỹ trước đó, lên bề mặt đĩa thạch trong đĩa Petri. Thể tích này được phân phối trên bề mặt môi trường bằng thìa vô trùng. Sau đó, thìa này được đưa qua toàn bộ bề mặt môi trường trong cốc thứ hai và cốc thứ ba, nơi chất cấy không được thêm vào (phương pháp cấy toàn diện).

Từ mỗi độ pha loãng, thực hiện 4-6 lần gieo hạt song song. Khi cấy song song cùng một độ pha loãng, bạn có thể sử dụng một pipet vô trùng và một thìa. Các cốc đựng môi trường đã cấy được đặt trong bộ điều nhiệt được điều chỉnh ở nhiệt độ thuận lợi cho sự phát triển của sinh vật được phát hiện. Vi khuẩn được đếm trong quá trình nuôi cấy ở nhiệt độ 30 ° C sau ba ngày, ở nhiệt độ phòng - sau bảy ngày. Đếm nấm men - ở nhiệt độ phòng sau 310 ngày (ở nhiệt độ 25 ° C, thời gian quan sát nấm có thể giảm xuống còn 2-3 ngày).

Số lượng khuẩn lạc mọc trên đĩa Petri được đếm và tính lại trên 1 g. Kết quả của việc gieo hạt song song được tổng hợp và số lượng khuẩn lạc trung bình mọc lên khi được gieo mầm từ độ pha loãng này được tính toán. Các khuẩn lạc được đếm mà không cần mở đĩa Petri.

Độ chính xác của phương pháp phụ thuộc vào số lượng khuẩn lạc đếm được chứ không phụ thuộc vào số lần lặp lại. Phương pháp nhân giống tốt nhất được coi là phương pháp tạo ra từ 50 đến 100 khuẩn lạc khi gieo trên môi trường dinh dưỡng rắn. Nếu số lượng khuẩn lạc phát triển nhỏ hơn 10 thì kết quả này sẽ bị loại bỏ và không được sử dụng để tính số lượng tế bào trong cơ chất ban đầu. Điều mong muốn là tổng số khuẩn lạc đếm được khi gieo từ độ pha loãng nhất định ít nhất là 300.

Số lượng vi sinh vật trong 1 g (1 ml) cơ chất ban đầu được tính theo công thức:

T = a x b x c / d,

Trong đó T là số lượng vi sinh vật trong 1 g, a là số lượng khuẩn lạc đếm được, b là độ pha loãng mà từ đó gieo hạt, c là 10 (nếu 0,1 ml huyền phù được gieo lên đĩa), d là khối lượng của chất nền (đất) được lấy để phân tích

Việc xử lý thống kê kết quả chỉ có thể thực hiện được với sai số kỹ thuật tối thiểu nên phương pháp cốc đòi hỏi độ sạch và độ chính xác cao khi thực hiện mọi thao tác. Cần phải bảo vệ cẩn thận các pipet và môi trường khỏi bị nhiễm bẩn bởi các vi sinh vật lạ, vì một tế bào vô tình được đưa vào có thể đánh giá quá cao số lượng vi sinh vật trong huyền phù thử nghiệm. Việc chuẩn bị dung dịch pha loãng và gieo hạt phải được thực hiện trong hộp.

Phương pháp được mô tả có thể áp dụng để đếm vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí tùy ý. Để giải thích các vi khuẩn kỵ khí nghiêm ngặt, các đĩa Petri được đặt trong điều kiện yếm khí sau khi cấy.

Phương pháp sinh thái nghiên cứu vi sinh vật đất

Phương pháp Koch được sử dụng để xác định tổng số vi khuẩn. Đổ 1 ml vật liệu thử từ độ pha loãng thích hợp vào đĩa Petri vô trùng trống và đổ 10 - 15 ml vật liệu thử đã tan chảy và làm nguội đến 45 0 C MPA vào, trộn với chất lỏng, xoay đĩa trên mặt bàn.

Sau khi trồng trọt, đếm các khuẩn lạc mọc trên bề mặt và ở độ sâu của môi trường thạch. Để làm điều này, chiếc cốc được đặt úp ngược trên nền đen, mỗi khuẩn lạc đếm được sẽ được đánh dấu bằng bút đánh dấu trên kính. Chỉ những đĩa có từ 30 đến 300 khuẩn lạc mọc lên mới được đánh giá. Nếu có hơn 300 khuẩn lạc mọc trên một đĩa và không thể lặp lại phân tích thì có thể đếm các khuẩn lạc dưới ánh sáng mạnh từ một bên bằng cách sử dụng kính lúp và đĩa đặc biệt có lưới.

Số lượng khuẩn lạc được đếm trong ít nhất 20 ô vuông có diện tích 1 cm 2 ở các vị trí khác nhau trên đĩa. Số lượng khuẩn lạc trung bình trên 1 cm2 được tính và nhân với diện tích của đĩa.

Khi đếm khuẩn lạc, có thể sử dụng thiết bị đếm vi khuẩn đặc biệt, PSB.

Kết quả đếm khuẩn lạc trên mỗi đĩa là số lượng vi khuẩn trên 1 ml (cm3) hoặc 1 g vật liệu thử, có tính đến độ pha loãng. Số lượng vi khuẩn cuối cùng được lấy làm trung bình số học của kết quả đếm khuẩn lạc trên các đĩa được cấy hai độ pha loãng liền kề.

Ví dụ: pha loãng 10 -1 - 250 khuẩn lạc, pha loãng 10 -2 - 23 khuẩn lạc.

Tổng số vi khuẩn = 250 x 10 + 23 x 100/2 = 2400 cfu/ml = 2,4 x 10 2 cfu/ml (đơn vị hình thành khuẩn lạc trên mỗi ml).

Kết quả nghiên cứu có thể làm tròn đến 2 - 3 chữ số có nghĩa.

Phương pháp chuẩn độ.

Được sử dụng để xác định số lượng SPM.

Giai đoạn 1: sự đồng nhất của vật liệu. Nếu cần, chuẩn bị huyền phù để chuyển vi sinh vật vào pha lỏng.

giai đoạn 2: chuẩn bị một loạt các dung dịch pha loãng.

Giai đoạn 3: gieo các thể tích đã chọn của vật liệu thử (100, 10, 1 ml) và độ pha loãng 1 ml của nó vào môi trường dinh dưỡng lỏng. Để tăng độ chính xác của phương pháp, mỗi thể tích có thể được cấy song song vào nhiều phần môi trường dinh dưỡng (gieo hai, ba, năm hàng). Tối ưu là lặp lại ba lần (đủ độ tin cậy với chi phí tương đối thấp).

giai đoạn 4: có tính đến sự hiện diện của sự sinh trưởng trên môi trường dinh dưỡng lỏng và gieo từ khối lượng dương lên môi trường dinh dưỡng rắn.

giai đoạn 5:định danh vi sinh vật phát triển trên môi trường dinh dưỡng rắn. Trong trường hợp này, các đặc tính văn hóa sẽ được tính đến và nếu cần thiết, các nghiên cứu bổ sung sẽ được thực hiện (nghiên cứu về các đặc tính tin học, hình thái, sinh hóa và huyết thanh học).

Theo quy tắc, nếu sử dụng phương pháp một hàng, kết quả được biểu thị dưới dạng hiệu giá của vi sinh vật mong muốn, được coi là thể tích nhỏ nhất (độ pha loãng cao nhất) mà nó vẫn được phát hiện.

Nếu sử dụng phương pháp nhiều hàng, kết quả sẽ được ghi lại bằng các bảng đặc biệt giúp xác định hiệu giá hoặc chỉ số (TNI) dựa trên sự kết hợp của khối lượng dương đã tạo ra sự tăng trưởng.

Giới thiệu về thực hành thuốc nhuộm anilin

Sử dụng hệ thống nhúng và tụ quang trong kính hiển vi

Phát triển phương pháp nuôi cấy trên dịch sinh học và môi trường dinh dưỡng rắn

Phát triển phương pháp gieo hạt phân đoạn

Phát hiện tác nhân gây bệnh than, bệnh tả, bệnh lao và lao tố

Cũng trong những năm đó, trường phái vi sinh vật học ở Đức, do ROBERT KOCH (1843 - 1910) đứng đầu, được thành lập và hoạt động thành công. Koch bắt đầu nghiên cứu của mình vào thời điểm mà vai trò của vi sinh vật trong nguyên nhân của các bệnh truyền nhiễm đang bị nghi ngờ nghiêm trọng. Để chứng minh điều đó cần phải có những tiêu chí rõ ràng do Koch đưa ra và đi vào lịch sử với tên gọi “Bộ ba Henle-Koch”. Bản chất của bộ ba như sau:

1) mầm bệnh vi khuẩn nghi ngờ chỉ được phát hiện trong một bệnh nhất định và không được phân lập với các bệnh khác hoặc từ người khỏe mạnh;

2) vi khuẩn gây bệnh phải được phân lập trong môi trường nuôi cấy thuần khiết;

3) nuôi cấy thuần chủng loại vi khuẩn này sẽ gây bệnh ở động vật bị nhiễm bệnh trong thí nghiệm có biểu hiện lâm sàng và bệnh lý tương tự như bệnh ở người.

Thực tiễn đã chỉ ra rằng cả ba điểm đều có tầm quan trọng tương đối, vì không phải lúc nào cũng có thể phân lập được tác nhân gây bệnh trong môi trường nuôi cấy thuần chủng và gây ra bệnh đặc trưng cho người ở động vật thí nghiệm. Ngoài ra, mầm bệnh đã được tìm thấy ở những người khỏe mạnh, đặc biệt là sau khi bị bệnh. Tuy nhiên, trong giai đoạn đầu phát triển và hình thành của vi sinh y học, khi nhiều vi sinh vật không liên quan đến bệnh được phân lập khỏi cơ thể bệnh nhân, bộ ba đóng vai trò quan trọng trong việc xác định tác nhân gây bệnh thực sự. Dựa trên quan niệm của mình, Koch cuối cùng đã chứng minh rằng vi sinh vật được phát hiện trước đây ở động vật mắc bệnh than đáp ứng các yêu cầu của bộ ba và là tác nhân gây bệnh thực sự của căn bệnh này. Trên đường đi, Koch đã xác định được khả năng hình thành bào tử của vi khuẩn bệnh than.

Koch đóng một vai trò lớn trong việc phát triển các phương pháp cơ bản để nghiên cứu vi sinh vật. Vì vậy, ông đã đưa vào thực hành vi sinh phương pháp phân lập vi khuẩn thuần chủng trên môi trường dinh dưỡng rắn, là người đầu tiên sử dụng thuốc nhuộm anilin để nhuộm tế bào vi sinh vật và sử dụng thấu kính ngâm và chụp ảnh vi mô để nghiên cứu dưới kính hiển vi.

Năm 1882, Koch đã chứng minh được vi sinh vật mà ông phân lập được là tác nhân gây bệnh lao, sau này được đặt tên là trực khuẩn Koch. Năm 1883, Koch và cộng sự đã phân lập được tác nhân gây bệnh tả - Vibrio cholerae (Koch's Vibrio).

Từ năm 1886, Koch đã dành toàn bộ nghiên cứu của mình để tìm kiếm các loại thuốc có hiệu quả trong việc điều trị hoặc ngăn ngừa bệnh lao. Trong quá trình nghiên cứu này, ông đã thu được loại thuốc chống bệnh lao đầu tiên - tuberculin, một chất chiết xuất từ việc nuôi cấy vi khuẩn lao. Mặc dù tuberculin không có tác dụng điều trị nhưng nó được sử dụng thành công để chẩn đoán bệnh lao.

Công trình khoa học của Koch đã được thế giới công nhận và năm 1905 ông được trao giải Nobel Y học.

Sử dụng phương pháp do Koch phát triển, các nhà vi khuẩn học người Pháp và Đức đã phát hiện ra nhiều loại vi khuẩn, xoắn khuẩn, động vật nguyên sinh - tác nhân gây bệnh truyền nhiễm ở người và động vật. Trong số đó có các mầm bệnh gây nhiễm trùng mủ và vết thương: tụ cầu, liên cầu, clostridia nhiễm trùng kỵ khí, E. coli và các mầm bệnh nhiễm trùng đường ruột (vi khuẩn thương hàn và phó thương hàn, vi khuẩn lỵ Shiga), tác nhân gây nhiễm trùng máu - xoắn khuẩn tái phát sốt, mầm bệnh đường hô hấp và nhiều bệnh nhiễm trùng khác, bao gồm cả những bệnh do động vật nguyên sinh (sốt rét plasmodia, bệnh lỵ amip, bệnh leishmania). Thời kỳ này được gọi là “thời kỳ hoàng kim” của vi sinh vật học.

Vai trò của các nhà khoa học trong nước đối với sự phát triển của khoa học vi sinh (I.I. Mechnikov, D.I. Ivanovsky, G.N. Gabrichevsky, S.N. Vinogradsky, V.D. Timkov, N.F. Gamaleya, L.A. Zilber, P.F. Zdrodovsky, Z.V. Ermolyeva).

Một trong những người sáng lập miễn dịch học là I.I. MECHNIKOV (1845-1916), người tạo ra lý thuyết miễn dịch thực bào, hay tế bào, về miễn dịch. Năm 1888, Mechnikov chấp nhận lời mời của Pasteur và đứng đầu phòng thí nghiệm tại viện của ông. Tuy nhiên, Mechniov không cắt đứt quan hệ chặt chẽ với quê hương. Ông đã đến thăm Nga nhiều lần và có nhiều bác sĩ Nga làm việc trong phòng thí nghiệm ở Paris của ông. Trong số đó có Y.Yu.Bardakh, V.A.Barykin, A.M.Bezredka, M.V.Weinberg, G.N.Gabrichevsky, V.I.Isaev, N.N.Klodnitsky, I.G.Savchenko, L.A. Tarasevich, V.A. Khavkin, Ts.V. Tsiklinskaya, F.Ya. Chistovich và những người khác, người đã có đóng góp đáng kể cho sự phát triển của vi sinh học, miễn dịch học và bệnh lý học trong nước và thế giới.

Bất chấp những tiến bộ đáng kể trong lĩnh vực tạo ra khả năng miễn dịch chống nhiễm trùng, thực tế vẫn chưa biết gì về cơ chế phát triển của nó. Bước ngoặt là việc phát hiện ra I.I. Mechnikov (1845-1916), được ông thực hiện ở Messina vào năm 1882 trong khi nghiên cứu phản ứng của ấu trùng sao biển trước việc đưa một chiếc gai hoa hồng vào trong nó. Đó là một dịp vui vẻ khi một sự quan sát tình cờ rơi vào tâm trí đã chuẩn bị sẵn và khiến I.I. Mechnikov đến việc tạo ra học thuyết về quá trình thực bào, viêm và miễn dịch tế bào.

Năm 1892, Mechnikov xuất bản tác phẩm “Bài giảng về bệnh lý so sánh của chứng viêm”, trong đó, với tư cách là một nhà tư tưởng xuất sắc, ông đã xem xét các quá trình bệnh lý từ quan điểm của lý thuyết tiến hóa. Năm 1901, cuốn sách mới của ông “Miễn dịch đối với các bệnh truyền nhiễm” xuất hiện, trong đó tóm tắt kết quả của nhiều năm nghiên cứu trong lĩnh vực miễn dịch.

Cuộc thảo luận diễn ra giữa Mechnikov và những người ủng hộ ông với những người theo thuyết thể dịch, những người coi hoạt động của kháng thể là cơ sở của khả năng miễn dịch, đã mang lại ý nghĩa sáng tạo to lớn. Nghiên cứu về kháng thể bắt đầu từ công trình của P. Ehrlich, và sau đó là J. Bordet, được thực hiện vào thập kỷ cuối của thế kỷ 19.

Đóng góp của PAUL EHRLICH (1854-1915) cho sự phát triển của miễn dịch học, cũng như sự hình thành và phát triển của hóa trị liệu là vô giá. Nhà khoa học này là người đầu tiên hình thành các khái niệm về miễn dịch chủ động và thụ động, đồng thời là tác giả của lý thuyết toàn diện về miễn dịch dịch thể, giải thích cả nguồn gốc của kháng thể và sự tương tác của chúng với kháng nguyên. Dự đoán của Ehrlich về sự tồn tại của các thụ thể tế bào tương tác cụ thể với một số nhóm kháng nguyên nhất định đã bị chỉ trích nặng nề trong nhiều năm. Tuy nhiên, nó đã được hồi sinh vào nửa sau thế kỷ 20 trong lý thuyết của Burnet và ở cấp độ phân tử đã nhận được sự công nhận rộng rãi.

I.I. Mechnikov là một trong những người đầu tiên hiểu rằng các lý thuyết miễn dịch thể dịch và thực bào về khả năng miễn dịch không loại trừ lẫn nhau mà chỉ bổ sung cho nhau. Năm 1908, Mechnikov và Ehrlich cùng được trao giải Nobel cho công trình nghiên cứu của họ trong lĩnh vực miễn dịch học.

Những khám phá của Ehrlich:

1. Sử dụng xanh methylene trong điều trị bệnh sốt rét

2. Dùng trypan red điều trị bệnh trypanosoma

3. phát hiện Salvarsan (1907)

4. phát triển phương pháp xác định hoạt tính của huyết thanh chống độc và nghiên cứu sự tương tác giữa kháng nguyên-kháng thể

5. lý thuyết miễn dịch dịch thể.

Cuối thế kỷ 19 được đánh dấu bằng sự khám phá mang tính lịch sử về vương quốc Vira. Đại diện đầu tiên của vương quốc này là virus khảm thuốc lá lây nhiễm vào lá thuốc lá, được phát hiện vào ngày 12/2/1892 bởi D.I. IVANOVSKY, nhân viên Khoa Thực vật học của Đại học St. Petersburg, thứ hai là bệnh lở mồm long móng. vi rút gây bệnh cùng tên ở vật nuôi, được phát hiện vào năm 1898 bởi F. Leffler và P. Frosch. Tuy nhiên, những khám phá này không thể được đánh giá cao vào thời điểm đó và hầu như không được chú ý trong bối cảnh thành công rực rỡ của vi khuẩn học.

Người đứng đầu trường vi khuẩn học Moscow và là một trong những nhà lãnh đạo của các nhà vi khuẩn học Nga là G.N. GABRICHEVSKY (1860-1907), người đứng đầu Viện Vi khuẩn học tại Đại học Moscow vào năm 1895, được mở bằng quỹ tư nhân. Ông làm việc trong lĩnh vực điều trị đặc hiệu và phòng ngừa bệnh ban đỏ và sốt tái phát. Lý thuyết liên cầu khuẩn của ông về nguồn gốc bệnh ban đỏ cuối cùng đã được chấp nhận rộng rãi. Gabrichevsky là tác giả của “Hướng dẫn về Vi khuẩn học lâm sàng cho bác sĩ và sinh viên” (1893) và cuốn sách “Vi khuẩn học y tế”, đã trải qua bốn lần xuất bản. G.N. Gabrichevsky (1860-1907) đã giới thiệu liệu pháp huyết thanh ở Nga và nghiên cứu cơ chế miễn dịch đối với bệnh sốt tái phát, bệnh bạch hầu và bệnh ban đỏ.

Trung tâm chính của trường vi khuẩn học Pererburg là Viện Y học Thực nghiệm. S.N.VINOGRADSKY, người nổi tiếng thế giới nhờ công trình nghiên cứu trong lĩnh vực vi sinh học nói chung, được bổ nhiệm làm trưởng khoa vi khuẩn học. Sử dụng phương pháp trồng trọt tự chọn do ông phát triển. Winogradsky đã phát hiện ra vi khuẩn lưu huỳnh và sắt, vi khuẩn nitrat hóa - tác nhân gây ra quá trình nitrat hóa trong đất. Ông đã sáng lập ra vai trò của vi sinh vật trong nông nghiệp.

V. D. TIMAKOV (1905-1977) là một trong những người sáng lập học thuyết về mycoplasmas và dạng L của vi khuẩn, nghiên cứu di truyền của vi sinh vật, thực bào vi khuẩn và phòng ngừa các bệnh truyền nhiễm.

Năm 1934 V.D. Timkov được mời đến Viện Vi sinh và Dịch tễ học Turmen, nơi ông đứng đầu bộ phận sản xuất vắc xin và huyết thanh. Tỷ lệ mắc bệnh nhiễm trùng đường ruột vẫn còn cao ở nước cộng hòa vào thời điểm đó. V. D. Timkov đang bảo vệ luận án tiến sĩ về thuốc phòng ngừa nhiễm trùng đường ruột. Nhà khoa học trẻ này cũng đang thực hiện những nghiên cứu đầu tiên về thực khuẩn và vi rút có thể lọc được ở Turkmenistan.

Dưới sự lãnh đạo của V.D. Timkov bắt đầu tạo ra một phần mới của vi sinh y học - nghiên cứu về dạng L của vi khuẩn và mycoplasmas. Hướng đi này là sự tiếp nối hợp lý của việc nghiên cứu các hình thức lọc, từ đó V.D. Timkov bắt đầu hoạt động khoa học của mình. Đối với một loạt nghiên cứu làm sáng tỏ vai trò của dạng L của vi khuẩn và họ mycoplasma trong các bệnh truyền nhiễm, V.D. Timkov cùng với Giáo sư G.Ya. Kagan được trao giải thưởng Lênin năm 1974.
Một trong những hướng hoạt động khoa học chính của V.D. Timkova chuyên tâm nghiên cứu di truyền học vi sinh vật. V. D. Timkov cho rằng cần phải sử dụng phân tích di truyền để giải quyết các vấn đề dịch tễ học và vi sinh có ý nghĩa về mặt y tế. Và hiện nay, hướng nghiên cứu về di truyền vi khuẩn là hướng nghiên cứu chính tại Viện Dịch tễ học và Vi sinh vật mang tên. Gamaleya. Hoạt động của VD Những nỗ lực tái tạo di truyền của Timkova không chỉ giới hạn ở việc tiến hành nghiên cứu của riêng cô. Ông ấy đã làm rất nhiều việc để tái tạo di truyền trên khắp đất nước chúng tôi.
Ngoài niềm đam mê với công việc, Vladimir Dmitrievich còn có đặc điểm là đầu óc minh mẫn, hiểu biết về cuộc sống và lòng dũng cảm. Phẩm chất thứ hai đã được thể hiện đầy đủ trong cuộc chiến của ông chống lại những khám phá “vĩ đại” phản khoa học, chẳng hạn như những khám phá cho rằng vi rút có thể biến thành vi khuẩn.

Nhà vi trùng học xuất sắc người Nga N.F.GAMALEYA (1859-1949), người đã làm việc với Pasteur vào năm 1886 về bệnh dại, cùng với Mechnikov và Bardakh đã thành lập trạm vi khuẩn học đầu tiên ở Nga, nơi sản xuất vắc-xin chống bệnh dại và người dân được tiêm vắc-xin phòng bệnh dại. N.F. Gamaleya là tác giả của nhiều công trình khoa học về bệnh dại, bệnh tả và các vấn đề khác về vi sinh và miễn dịch học.

L.A. ZILBER (1894-1966) là người đặt ra thuyết virus về nguồn gốc của khối u, ông đã phân lập được tác nhân gây bệnh viêm não do ve truyền ở vùng Viễn Đông.

Những tiến bộ trong nghiên cứu về kháng nguyên khối u đã truyền cảm hứng cho L.A. Zilber thử tiêm vắc-xin chống ung thư, việc mà ông bắt đầu vào khoảng năm 1950. cùng với Z.L. Baidakova và R.M. Radzikhovskaya trên hai mô hình: khối u Brown-Pierce ở thỏ và ung thư vú tự phát ở chuột.

P.F. ZDRODOVSKY (1890-1976) giải quyết vấn đề bệnh rickettsial, sốt rét, bệnh brucellosis và điều hòa miễn dịch.

Zinaida Vissarionovna ERMOLYEVA là người tạo ra loại kháng sinh nội địa đầu tiên. Trong tất cả những thành tựu của tiến bộ khoa học và công nghệ, việc phát hiện ra thuốc kháng sinh, đặc biệt là penicillin, chắc chắn có tầm quan trọng lớn nhất trong việc bảo vệ sức khỏe con người và tăng tuổi thọ của họ. Trong số các nhà khoa học lỗi lạc của nước ta đã có đóng góp to lớn cho sự phát triển của lĩnh vực y học này, một trong những vị trí dẫn đầu thuộc về người tạo ra loại thuốc kháng sinh nội địa đầu tiên, một nhà vi trùng học xuất sắc, một nhà tổ chức chăm sóc sức khỏe tài năng, một nhà công chúng nổi tiếng. nhân vật, một giáo viên tuyệt vời, viện sĩ của Viện Hàn lâm Khoa học Y tế Liên Xô, Nhà khoa học danh dự của RSFSR, người đoạt Giải thưởng Nhà nước Liên Xô Zinaida Vissarionovna Ermolyeva. Cùng với các nhà khoa học khác, bà đứng đầu về nguồn gốc của hóa học y tế và nghiên cứu kháng sinh ở nước ta, là một người có tài năng tổ chức tuyệt vời và nghị lực không ngừng nghỉ, người có công việc không mệt mỏi và những phẩm chất cá nhân đặc biệt đã khiến bà được mọi người tôn trọng và công nhận.

Một trong những lĩnh vực hoạt động khoa học quan trọng của Zinaida Vissarionovna là nghiên cứu về bệnh tả. Dựa trên các nghiên cứu chuyên sâu, toàn diện về hình thái và sinh học của bệnh tả và vi khuẩn Vibrio giống bệnh tả, Z. V. Ermolyeva đã đề xuất một phương pháp mới để chẩn đoán phân biệt các vi sinh vật này.

Năm 1942, chuyên khảo “Cholera” của Z.V. Ermolyeva được xuất bản, tóm tắt kết quả của gần 20 năm nghiên cứu về Vibrio cholerae. Chuyên khảo này cung cấp các phương pháp mới để chẩn đoán, điều trị và phòng ngừa bệnh tả trong phòng thí nghiệm.
Zinaida Vissarionovna đã dành một phần quan trọng trong công việc khoa học của mình để phân lập và nghiên cứu các chất có tác dụng kháng khuẩn. Chất đầu tiên như vậy, được gọi là “lysozyme”, được Z. V. Ermolyeva cùng với I. S. Buyanovskaya phân lập vào năm 1929. Kết quả nghiên cứu sâu hơn cho thấy, lysozyme được tìm thấy trong nhiều mô, cả nguồn gốc động vật và thực vật.

Năm 1960, một nhóm các nhà khoa học do Z.V. Ermolyeva đứng đầu, lần đầu tiên ở nước ta, đã nhận được thuốc kháng vi-rút interferon. Loại thuốc này lần đầu tiên được sử dụng để điều trị bệnh cúm nặng vào năm 1962 và như một phương pháp dự phòng. Thuốc hiện được sử dụng để phòng ngừa bệnh cúm và các bệnh nhiễm virus đường hô hấp cấp tính khác, cũng như điều trị một số bệnh do virus trong thực hành về mắt và da.

Zinaida Vissarionovna đã cống hiến hơn 30 năm cuộc đời (1942-1974) cho việc nghiên cứu kháng sinh.

Tên của Z.V. Ermolyeva gắn bó chặt chẽ với việc tạo ra penicillin nội địa đầu tiên, sự phát triển của khoa học về kháng sinh và việc sử dụng rộng rãi chúng ở nước ta. Số lượng lớn người bị thương trong thời kỳ đầu của Chiến tranh Vệ quốc vĩ đại đòi hỏi phải phát triển chuyên sâu và đưa ngay vào thực hành y tế các loại thuốc có hiệu quả cao để chống nhiễm trùng vết thương. Vào thời điểm này (1942), Z.V. Ermolyeva và các đồng nghiệp của bà tại Viện Dịch tễ học và Vi sinh vật học Liên minh đã tìm ra nhà sản xuất penicillin tích cực và phân lập được penicillin nội địa đầu tiên - krustosin. Ngay từ năm 1943, phòng thí nghiệm đã bắt đầu chuẩn bị penicillin cho các thử nghiệm lâm sàng.

Sau đó, dưới sự lãnh đạo của Z.V. Ermolyeva, nhiều loại kháng sinh mới và dạng bào chế của chúng đã được tạo ra và đưa vào sản xuất, bao gồm ecmolin, ecmonovocillin, bicillin, streptomycin, tetracycline; chế phẩm kháng sinh kết hợp (dipasfen, ericycline, v.v.). Cần nhấn mạnh rằng Zinaida Vissarionovna luôn tích cực tham gia vào việc tổ chức sản xuất kháng sinh công nghiệp ở nước ta.