ومع ذلك ، تم أيضًا تنفيذ نسخة غازية من TLC. الحبيبات الدقيقة ، Al 2 O 3 ، وغيرها تستخدم كحبيبات دقيقة ، وهي مغطاة بالزجاج ، ورقائق معدنية أو أطباق ؛ لإصلاح الطبقة المستخدمة ، أو غيرها. تنتج Prom-Stu ألواحًا جاهزة بطبقة ثابتة بالفعل. عادة ما تكون eluents عبارة عن خليط من org. محاليل ، حلول مائية ، حتى ، تشكيل معقد ، إلخ. اعتمادا على اختيار الكروماتوغرافي أنظمة (تكوين المراحل المتنقلة والثابتة) في فصل فيرئيسي يمكن أن تلعب العمليات دورًا. في الممارسة العملية ، غالبًا ما يتم تنفيذ العديد في وقت واحد. آليات الفصل.

اعتمادًا على موضع اللوحة واتجاه تدفق eluent ، يتم تمييز TLC التصاعدي والتنازلي والأفقي. وفقًا لتقنية العمل ، يتم تمييز التحليل الأمامي (عندما يعمل الخليط الذي تم تحليله كمرحلة متحركة) ومتغير الشطف الشائع الاستخدام. تُستخدم أيضًا "دائرية" (عندما يتم تغذية المحلول والمذيب المحلل بالتتابع في مركز اللوحة) و TLC "المضاد للدائرية" (عندما يتم تطبيق المحلول الذي تم تحليله حول المحيط وينتقل الوت من المحيط إلى المركز من اللوحة) ، TLC تحت (عندما يتم تمرير مذيب p أسفل من خلال طبقة مغطاة بضغط شديد) ، وكذلك TLC في ظل ظروف التدرج من t-ry ، والتكوين ، وما إلى ذلك في ما يسمى. ثنائي الأبعاد الكروماتوغرافي TLC. تتم العملية بالتتابع في اتجاهين متعامدين بشكل متبادل مع فك. شطف ، مما يزيد من كفاءة الفصل. لنفس الغرض ، يتم استخدام شطف متعدد في اتجاه واحد.

في متغير الشطف ، يتم تطبيق قطرات (1-5 ميكرولتر) من المحلول الذي تم تحليله على الطبقة وتغمر حافة اللوحة في الجزء السفلي من غرفة زجاجية محكمة الإغلاق. يتحرك eluent على طول الطبقة تحت تأثير قوى الجاذبية والشعيرات ؛ يتحرك الخليط الذي تم تحليله في نفس الاتجاه. نتيجة التكرار المتكرر ووفق المعامل. يتم فصل التوزيعات في التوزيع المحدد وترتيبها على اللوحة في مناطق منفصلة.

بعد اكتمال العملية ، تتم إزالة الصفيحة من الغرفة ، ويتم العثور على المناطق المجففة والمنفصلة في حد ذاتها. التلوين أو بعد رشها بالمحاليل التي تشكل بقع ملونة أو فلوريةمع مكونات الخليط المراد فصلها. يتم الكشف عن المواد المشعة بشكل تلقائي (عن طريق التعرض لصفيحة مركبة على لوحة). تطبق أيضا. وطرق الكشف النشطة. الصورة الناتجة لتوزيع الكروماتوغرافي. دعا المناطق كروماتوجرام (انظر الشكل).

تم الحصول على مخطط الكروماتوجرام عن طريق فصل خليط من ثلاثة مكونات باستخدام طريقة الطبقة الرقيقة.

موقع الكروماتوغرافي تتميز المناطق الموجودة على الرسم البياني اللوني بقيمة R f - نسبة المسار l i الذي يجتازه مركز منطقة المكون i من خط البداية إلى المسار l الذي يجتازه eluent: R f = l i / لتر ؛ R f 1. تعتمد قيمة R f على المعامل. التوزيع () وعلى نسبة أحجام المرحلتين المتنقلة والثابتة.

يتأثر الفصل في TLC بعدد من العوامل - تكوين وخصائص eluent ، والطبيعة ، و t-ra ، أبعاد وسمك الطبقة ، وأبعاد الغرفة. لذلك ، للحصول على نتائج قابلة للتكرار ، من الضروري توحيد الشروط التجريبية بعناية. يسمح لك الامتثال لهذا المطلب بضبط R f مع النسبي. الانحراف المعياري 0.03. في ظل الظروف القياسية ، يكون R f ثابتًا لـ in-va ويتم استخدامه للأخير.

عدد المكون في الكروماتوغرافي. يتم تحديد المنطقة مباشرة على الطبقة من خلال مساحة المنطقة (عادة ما يتراوح قطرها من 3 إلى 10 مم) أو شدة لونها (). استخدم أيضًا تلقائي أجهزة المسح التي تقيس امتصاص أو انتقال أو انعكاس الضوء أو الكروماتوغرافي. مناطق. يمكن كشط المناطق المنفصلة من اللوحة جنبًا إلى جنب مع الطبقة ، ويمكن استخلاص المكون في مذيب وتحليله بطريقة مناسبة (التألق ، الامتصاص الذري ، التألق الذري ، التحليل الإشعاعي ، إلخ). عادة ما يكون خطأ التحديد الكمي 5-10٪ ؛ حدود الكشف في الداخل في المناطق -10 -3 -10 -2 ميكروغرام (للمشتقات الملونة) و10-10-10-9 ميكروغرام (باستخدام).

مزايا TLC: البساطة ، الفعالية من حيث التكلفة ، توافر المعدات ، السرعة (وقت الفصل 10-100 دقيقة) ، الإنتاجية العالية وكفاءة الفصل ، وضوح نتائج الفصل ، سهولة الكشف عن الكروماتوغرافي. مناطق.

يستخدم TLC لفصل وتحليل كل من المؤسسة و inorg. في الداخل: تقريبا كل inorg.

اللوني في الكيمياء الحديثة

من المهام المهمة للكيمياء الحديثة التحليل الدقيق والموثوق المواد العضوية، غالبًا ما تكون متشابهة في الهيكل والخصائص. بدون هذا ، من المستحيل إجراء البحوث الكيميائية والبيوكيميائية والطبية ، وهذا يعتمد إلى حد كبير الطرق البيئيةالتحليلات بيئةوالفحص الجنائي ، وكذلك الصناعات الكيميائية والنفطية والغاز والأغذية والصناعات الطبية والعديد من قطاعات الاقتصاد الوطني الأخرى.

واحدة من أكثر الطرق حساسية هي التحليل الكروماتوغرافي ، الذي اقترحه لأول مرة العالم الروسي إم إس تسفيت في بداية القرن العشرين. وبحلول نهاية القرن تحولت إلى أداة قوية ، والتي بدونها لم يعد بإمكان كل من المواد التركيبية والكيميائيين العاملين في مجالات أخرى القيام بذلك.

تم إجراء فصل الألوان في العمود الموضح في الشكل. 1. خليط من المواد A و B و C - أصباغ طبيعية ، موجودة أصلاً في المنطقة ه ،- يتم فصله عن طريق إضافة المذيب المناسب D (eluent) إلى مناطق منفصلة.

كما هو الحال دائمًا ، بدأ كل شيء ، على ما يبدو ، من أبسط شيء يمكن أن يفعله أي تلميذ. في السنوات السابقة ، كتب تلاميذ المدارس ، بمن فيهم كاتب هذا المقال ، بالحبر. وإذا سقطت النشاف على بقعة الحبر ، فيمكن للمرء أن يلاحظ أن محلول الحبر مقسم إلى عدة "جبهات" عليه. يعتمد اللوني على توزيع مادة من عدة مواد بين مرحلتين ، كما يقولون ، (على سبيل المثال ، بين صلبوالغاز ، بين سائلين ، وما إلى ذلك) ، وإحدى المراحل تتحرك باستمرار ، أي أنها متحركة.

هذا يعني أن مثل هذه المرحلة ، على سبيل المثال ، غاز أو سائل ، تتقدم باستمرار ، وتكسر التوازن. علاوة على ذلك ، كلما تم امتصاص (امتصاص) هذه المادة أو تلك (أو إذابتها) بشكل أفضل في الطور الثابت ، كلما كان معدل حركتها أبطأ ، وعلى العكس ، كلما قل امتصاص المركب ، أي لديه تقارب أقل للمرحلة الثابتة ، كلما زاد سرعة الحركة. نتيجة لذلك ، كما هو موضح في الشكل. 2 ، إذا كان لدينا في البداية خليط من المركبات ، ثم تدريجيًا جميعهم ، مدفوعين بالطور المتحرك ، ينتقلون إلى "النهاية" بسرعات مختلفة ثم ينفصلون في النهاية.

أرز. 2. المبدأ الأساسي للفصل الكروماتوغرافي: NF عبارة عن طبقة من الطور الثابت تغطي السطح الداخلي للأنبوب الشعري T ، والذي يتدفق من خلاله الطور المتحرك (MP). المكون A 1 من الخليط المنفصل له صلة عالية بالطور المتحرك ، والمكون A 2 - للمرحلة الثابتة. A "1 و A" 2 هي مواضع مناطق نفس المكونات بعد فترة من الوقت حدث خلالها الفصل الكروماتوغرافي في الاتجاه المشار إليه بواسطة السهم

في الممارسة العملية ، يتم حقن عينة من خليط من المواد ، على سبيل المثال ، مع حقنة ، في طبقة المرحلة الثابتة ، ثم تتحرك المركبات المختلفة التي يتكون منها الخليط ، جنبًا إلى جنب مع الطور المتحرك (eluent) ، على طول الطبقة ، مدفوعة بهذه المرحلة. تعتمد سرعة الحركة على مقدار التفاعل (التقارب) للمكونات في المرحلتين الثابتة والمتحركة ، ونتيجة لذلك يتحقق فصل المكونات.

بعد الفصل ، يجب تحديد جميع المكونات وقياسها. هذا هو المخطط العام للكروماتوغرافيا.

وتجدر الإشارة إلى أن هذه الطريقة الحديثة تجعل من الممكن تحديد محتوى عشرات ومئات من المركبات المختلفة في خليط في غضون بضع دقائق ، حتى في كميات ضئيلة "ضئيلة" ~ 10-8٪.

دعونا نفكر بمزيد من التفصيل في طريقة التحليل الكروماتوغرافي. يمكن تقسيم الأنظمة الكروماتوجرافية وفقًا للمبادئ التالية:

- حالة تجميع المرحلتين المتنقلة والثابتة ؛
- الخصائص الهندسية للنظام ؛
- آلية التفاعل بين المادة والمراحل المفصولة.

يتم استخدام غاز أو سائل كمرحلة متحركة. تستخدم المواد الصلبة أو السائلة كمراحل ثابتة أو ثابتة.

وفقًا لترتيب المراحل ، يتم تقسيم الأنظمة الكروماتوغرافية إلى مجموعتين: مستو وعمودي.

الأخير ، بدوره ، ينقسم إلى:

- معبأة ومملوءة بمادة صلبة حبيبية (كرات صغيرة) ، إما أن تكون وسط فصل أو تعمل كناقل لمرحلة سائلة ثابتة ؛
- شعري ، جدرانه الداخلية مغطاة بفيلم من سائل ثابت أو طبقة من مادة ماصة صلبة (ماصة).

يمكن إجراء التفاعل بين المادة المراد فصلها ومراحل النظام الكروماتوغرافي إما على سطح الطور أو في الحجم. في الحالة الأولى ، يسمى اللوني الامتزاز، في الثانية توزيع.

غالبًا ما يتم تقليل آليات فصل الجزيئات في الأنظمة الكروماتوجرافية إلى ما يلي:

- المرحلة الثابتة تمتص جسديًا المواد المراد فصلها ؛
- المرحلة الثابتة تتفاعل كيميائيا مع المواد المفصولة ؛
- تعمل المرحلة الثابتة على إذابة المواد المراد فصلها عن المحلول في مذيب غير قابل للامتزاج ؛
- المرحلة الثابتة لها بنية مسامية ، مما يعيق انتشار جزيئات المواد المراد فصلها في هذه المرحلة.

اللوني ، الذي بدأ بأجهزة محلية الصنع مثل شريط من الورق مغموس في مذيب ، يتم تمثيله الآن من خلال أكثر الأنظمة الآلية تعقيدًا استنادًا إلى المبادئ الأكثر دقة أو دقة ومجهزة ببرامج الكمبيوتر. يكفي أن نقول إن واحدة من أفضل شركات الكمبيوتر ، Hewlett-Packard ، تنتج في الوقت نفسه أجهزة كروماتوغرافيا حديثة.

مخطط عملية اللوني ، في جوهره ، بسيط للغاية ويظهر في الشكل. 3. علاوة على ذلك ، في هذا التسلسل تقريبًا ، سيتم النظر في مبدأ تشغيل الكروماتوغراف.

الأنواع الرئيسية للكروماتوغرافيا

تشمل الأنواع الرئيسية للكروماتوغرافيا الامتزاز ، والتبادل الأيوني ، والسائل ، والورق ، والطبقة الرقيقة ، والترشيح الهلامي ، والكروماتوغرافيا المتقاربة.

كروماتوغرافيا الامتزاز. في هذه الحالة ، يتم فصل المواد بسبب الامتصاص الانتقائي (الانتقائي) للمواد في المرحلة الثابتة. يرجع هذا الامتصاص الانتقائي إلى تقارب مركب أو آخر مع الممتزات الصلبة (الطور الثابت) ، وهذا بدوره يتحدد بالتفاعلات القطبية لجزيئاتها. لذلك ، غالبًا ما يتم استخدام اللوني من هذا النوع في تحليل المركبات التي يتم تحديد خصائصها حسب عدد المجموعات القطبية ونوعها. يتضمن كروماتوغرافيا الامتزاز التبادل الأيوني ، والسائل ، والورق ، والطبقة الرقيقة ، وكروماتوغرافيا الامتزاز بالغاز. تم وصف كروماتوغرافيا امتصاص الغاز بمزيد من التفصيل في قسم تحليل Eluent.

كروماتوغرافيا التبادل الأيوني.تستخدم كمرحلة ثابتة. راتنجات التبادل الأيوني(الشكل 4) في كل من الأعمدة وكطبقة رقيقة على طبق أو ورقة. عادة ما يتم الفصل في وسط مائي ، لذلك تُستخدم هذه الطريقة بشكل أساسي في الكيمياء غير العضوية ، على الرغم من استخدام المذيبات المختلطة أيضًا. القوة الدافعة للفصل في هذه الحالة هي التقارب المختلف للأيونات المنفصلة للمحلول لمراكز التبادل الأيوني للقطبية المعاكسة في المرحلة الثابتة.

اللوني السائل. في هذه الحالة ، تكون المرحلة الثابتة عبارة عن سائل. الحالة الأكثر شيوعًا هي نسخة الامتزاز من كروماتوغرافيا العمود السائل. يظهر مثال لفصل الأصباغ الطبيعية في الشكل. 5.

أرز. 5. الفصل الكروماتوغرافي للأصباغ الطبيعية (الفلافون والأيسوفلافون)

اللوني ورقة. يتم استخدام شرائط أو أوراق كمرحلة ثابتة (الشكل 6). يحدث الفصل وفقًا لآلية الامتزاز ، وأحيانًا يتم تنفيذه في اتجاهين متعامدين.

كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة هي أي نظام تكون فيه المرحلة الثابتة عبارة عن طبقة رقيقة ، ولا سيما طبقة من الألومينا (بسمك 2 مم) على شكل عجينة ترسب على لوح زجاجي. مثال على مثل هذا النظام ونتائج الفصل موضحة في الشكل. 7.

الترشيح الهلامي ، أو المنخل الجزيئي ، الكروماتوغرافيا. يختلف مبدأ الفصل في مثل هذه الأنظمة إلى حد ما عما كان عليه في الحالات السابقة. المرحلة الثابتة عبارة عن مواد ، عادة ما تكون مواد هلامية ، ذات مسامية محكومة بدقة ، ونتيجة لذلك يمكن لبعض مكونات الخليط ، وفقًا لحجم وشكل الجزيئات ، اختراق جزيئات الهلام ، بينما لا يستطيع البعض الآخر ذلك. في أغلب الأحيان ، يستخدم هذا النوع من اللوني لفصل المركبات الجزيئية. أحد تطبيقات هذه الطريقة هو تحديد الكتل الجزيئية للمواد المراد فصلها ، والتي غالبًا ما تكون ضرورية للدراسات الكيميائية (الشكل 8).

اللوني تقارب. يعتمد هذا النوع من اللوني على التفاعل بين مادة ، من ناحية ، قادرة على التفاعل مع المركب المعزول ، ومن ناحية أخرى ، مرتبطة بحامل صلب للمرحلة الثابتة. هذه المادة لها ألفة للمركب المعزول وتسمى ترابط الألفة.

في أغلب الأحيان ، يتم استخدام هذه الطريقة في التحليل الكيميائي الحيوي. على سبيل المثال ، عندما يتم تمرير كائنات مستضد بيولوجي تحتوي على بروتينات عبر السليلوز المنشط ببروميد السيانوجين ، يتم الاحتفاظ بها على وجه التحديد ، كما هو موضح في المخطط 1.

وفقًا لطريقة أخرى ، لربط البروتينات بمجموعة الهيدروكسيل من السليلوز ، يتم معالجة الأخير أولاً بـ 2-amino-4،6-dichloro- سيم-تريازين ، ومن ثم يتفاعل ناتج تفاعلهم مع المجموعة الأمينية للبروتين وفقًا للمخطط 2:

بالطبع ، لا يقتصر عدد طرق الفصل اللوني على تلك المذكورة أعلاه. غالبًا ما يتم دمج الكروماتوغرافيا مع طرق فيزيائية كيميائية أخرى ، مثل قياس الطيف الكتلي ، لكن هذه المقالة تهدف إلى تعريف القارئ فقط بالمبادئ العامة للكروماتوغرافيا. لذلك ، سننظر كذلك في معالجة نتائج الفصل اللوني.

طرق تطوير الكروماتوجرام

التطوير هو عملية نقل المواد المفصولة بالمرحلة المتنقلة. يمكن أن يتم التطوير بثلاث طرق رئيسية: التحليل الأمامي ، والإزاحة والشطف. شطف هو الأكثر استخداما.

تحليل أمامي. هذه أبسط حالة ، حيث تعمل العينة هنا كمرحلة متنقلة. يتم إضافته باستمرار إلى النظام ، لذلك هناك حاجة إلى أحجام عينات كبيرة. النتائج موجوده في الشكل. 9.

يرجع تكوين عدة مناطق إلى الصلات المختلفة للمكونات المختلفة للمرحلة الثابتة. تسمى حافة القطع الجبهة ، ومن هنا جاءت تسميتها. تحتوي المنطقة الأولى فقط على أقل مادة أ محتجزة ، والتي تتحرك بشكل أسرع. المنطقة الثانية تحتوي على المادة A و B. المنطقة الثالثة عبارة عن خليط من المواد A و B و C. في التحليل الأمامي ، يتم الحصول على المكون A فقط في شكل سائل.

تحليل الإزاحة. في هذه الحالة ، يكون للطور المتحرك انجذاب أكبر للمرحلة الثابتة من المادة المراد فصلها. يتم إدخال عينة صغيرة في المرحلة الثابتة. ولكن بسبب التقارب العالي ، فإن المرحلة المتنقلة تزيح وتدفع جميع المكونات. إنها تحل محل المكون C الأكثر امتصاصًا بقوة ، والذي بدوره يحل محل المادة B ، والتي تحل محل المكون الأقل امتصاصًا A. على عكس التحليل الأمامي ، يمكن استخدام هذه الطريقة للحصول على جميع المكونات الرئيسية في شكل فردي (سائل) .

تحليل بليغ. يتم تمرير الطور المتحرك لتحريك المذاب من خلال النظام الكروماتوغرافي. يحدث الفصل بسبب التقارب المختلف لمكونات الخليط بالطور الثابت ، وبالتالي بسبب السرعات المختلفة لحركتها. يتم إدخال عينة صغيرة الحجم في النظام الكروماتوغرافي. نتيجة لذلك ، سوف تتشكل المناطق ذات المكونات تدريجياً أقسام منفصلةمفصولة بنقاوة eluent. نظرًا لكفاءة الفصل العالية ، أصبحت الطريقة هي الأكثر استخدامًا واستبدلت إلى حد كبير خيارات الفصل الأخرى. لذلك ، سننظر في النظرية وتصميم الأجهزة لهذه الطريقة.

قليلا من النظرية. غالبًا ما يكون من الملائم اعتبار العمليات الكروماتوغرافية كسلسلة من عمليات الاستخراج ؛ في هذه الحالة ، يمكن فصل المواد ذات الخصائص المتشابهة جدًا ، نظرًا لأن المئات وحتى الآلاف من دورات الاستخراج تحدث بسرعة وفي وقت واحد أثناء العمليات الكروماتوجرافية.

لتقييم كفاءة العمليات الكروماتوجرافية ، بناءً على المفهوم النظري للتقطير (بالقياس مع فصل الزيت في أعمدة التقطير ، حيث تتوافق اللوحة النظرية مع جزء عمود التقطير الذي يكون فيه البخار والسائل في حالة توازن) ، يتم تقديم المفهوم "ارتفاع مكافئ للوحة النظرية"(فيت). وبالتالي يعتبر العمود الكروماتوغرافي مجموعة من الطبقات الافتراضية (الصفائح). عادةً ما يُفهم HETP على أنه سمك الطبقة الضروري للمزيج القادم من الطبقة السابقة للوصول إلى التوازن مع متوسط ​​تركيز المادة في الطور المتحرك لهذه الطبقة. يمكن وصفه بالصيغة التالية:

HETT = إل/ن,

أين إل- طول العمود ، نهو عدد اللوحات النظرية.

HETP هي خاصية موجزة لفصل المواد. ومع ذلك ، فإن فصل مكونات الخليط مهم ، لكنه ليس كافياً. من الضروري تحديد كل مكون وتحديد قيمته في العينة. يتم ذلك عادةً عن طريق معالجة اللوني - اعتماد شدة الإشارة ، بما يتناسب مع تركيز المادة ، على وقت الفصل. يتم عرض بعض الأمثلة على اللوني في الشكل. 10 ، 11.

الوقت من لحظة إدخال العينة في العمود حتى لحظة تسجيل الذروة القصوى وقت الاستبقاء (tR). في ظل الظروف المثلى ، لا يعتمد على كمية العينة المحقونة ، ومع مراعاة المعلمات الهندسية للعمود ، يتم تحديده بواسطة هيكل مركب معين ، أي أنه خاصية نوعية للمكونات. يتميز المحتوى الكمي للمكون بحجم الذروة ، وبصورة أدق من خلال مساحته. عدد منطقة الذروةعادة ما يتم ذلك تلقائيًا باستخدام أداة تكامل تسجل وقت الاحتفاظ ومنطقة الذروة. تسمح لك المعدات الحديثة بالحصول على نسخة مطبوعة من الكمبيوتر على الفور تشير إلى محتوى جميع مكونات الخليط المراد فصله.

عمل الكروماتوجراف. يظهر مخطط تركيب أبسط كروماتوجراف غاز في الشكل. 12. تتكون من أسطوانة غاز تحتوي على مرحلة خاملة متحركة (غاز حامل) ، في أغلب الأحيان هيليوم ، نيتروجين ، أرجون ، إلخ. باستخدام مخفض يقلل ضغط الغاز إلى المستوى المطلوب ، يدخل الغاز الحامل العمود ، وهو أنبوب مملوء بمادة ماصة أو مادة كروماتوغرافية أخرى تلعب دور الطور الثابت.

أرز. 12. مخطط تشغيل كروماتوجراف الغاز:
1 - بالون ضغط مرتفعمع الغاز الناقل 2 - مثبت التدفق ؛ 3 و 3 "- مقاييس ضغط ؛ 4 - عمود كروماتوغرافي ؛ 5 - جهاز حقن العينة ؛ 6 - ترموستات ؛ 7 - كاشف ؛ 8 - مسجل ؛ 9 - مقياس التدفق

العمود الكروماتوغرافي هو "قلب" الكروماتوغراف ، حيث يتم فصل المخاليط فيه. غالبًا ما تكون الأعمدة مصنوعة من الزجاج ؛ هناك أعمدة فولاذية وتفلون وأيضًا أعمدة شعرية. يتم تركيب جهاز حقن العينة بالقرب من مدخل الغاز بالعمود. في أغلب الأحيان ، يتم حقن العينة بحقنة تخترق الغشاء المطاطي. يتم فصل الخليط الذي تم تحليله في العمود ويدخل إلى الكاشف - وهو جهاز يحول نتائج الفصل إلى نموذج مناسب للتسجيل.

أحد أكثر الكاشفات استخدامًا هو مقياس الكاثرومتر ، والذي يعتمد مبدأه على قياس السعة الحرارية للأجسام المختلفة.

على التين. يوضح الشكل 13 مخططًا لمقياس كاثاروميتر. يتم وضع لولب معدني (خيط مقاومة) في تجويف أسطواني ، والذي يسخن نتيجة مرور تيار كهربائي مباشر من خلاله. عندما يتدفق الغاز الحامل خلاله بسرعة ثابتة ، تظل درجة حرارة الملف ثابتة. ومع ذلك ، إذا تغير تكوين الغاز مع ظهور المادة المزالة ، فإن درجة حرارة الملف تتغير ، والتي يتم تسجيلها بواسطة الجهاز.

كاشف شائع آخر هو كاشف تأين اللهب ، والذي يظهر مخططه في الشكل. 14. إنه أكثر حساسية بكثير من مقياس الكاثارومتر ، ولكنه يتطلب إمدادًا ليس فقط بالغاز الحامل ، ولكن أيضًا الهيدروجين. يمتزج الغاز الحامل الذي يغادر العمود ، والذي يحتوي على المادة الشفافة ، مع الهيدروجين ويمر في فوهة موقد الكاشف. يؤين اللهب جزيئات eluent ، ونتيجة لذلك تقل المقاومة الكهربائية بين الأقطاب الكهربائية ويزداد التيار.

في الكروماتوغرافيا السائلة ، يتم استخدام أجهزة الكشف الطيفي (في المناطق المرئية والأشعة فوق البنفسجية والأشعة تحت الحمراء) ، وكذلك أجهزة الكشف عن الانكسار التي تعتمد على قياس مؤشرات الانكسار للحلول.

هؤلاء في بعبارات عامةأساسيات التحليل الكروماتوغرافي. بالطبع تحتوي المقالة فقط مبادئ عامةاللوني ، وغالبًا ما يتم تسميتها ببساطة. في الواقع ، "المطبخ" بهذه الطريقة كبير جدًا ومعقد. الهدف الرئيسيهذا المقال ، حسب المؤلف ، للفت انتباه القراء الشباب إلى هذه الطريقة القوية.

أولئك الذين يرغبون في معرفة المزيد عن هذا المجال يمكنهم استخدام الأدبيات أدناه.

المؤلفات

Zhukhovitsky A.A.، Turkeltaub N.M. كروماتوغرافيا الغاز. م: Gostoptekhizdat، 1962، 240 p .؛
Sakodynsky K.I. ، Kiselev A.V. ، Iogansen A.V.وإلخ. التطبيق الفيزيائي والكيميائيكروماتوغرافيا الغاز. م: الكيمياء ، 1973 ،
254 ص ؛
كروماتوغرافيا العمود السائل. في 3 مجلدات. زد ديلا ، ك.ماسيكا ، ج. جاناكا. موسكو: مير ، 1972 ؛
Berezkin V.G. ، Alishoev V.R. ، Nemirovskaya I.B.. كروماتوغرافيا الغاز في كيمياء البوليمر. م: نوكا ، 1972 ، 287 ص ؛
موروزوف أ.اللوني في التحليل غير العضوي. م: العالي. المدرسة ، 1972 ، 233 صفحة ؛
Berezkin V.G. ، Bochkov A.S.. كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الكمي. م: نوكا ، 1980 ، 183 ص ؛
دليل المختبر للكروماتوغرافيا والأساليب ذات الصلة. في مجلدين. O. ميكيش. موسكو: مير ، 1982 ، المجلد 1–2 ، 783 صفحة ؛
التحليل الكروماتوغرافي للبيئة. إد. R. نعش. م: مير ، 1979 ، 606 ص ؛
كيرشنر يو. طبقة رقيقة اللوني. في 2 vol. M: Mir، 1981، vol. 1، 615 pp.، vol. 2، 523 pp .؛
كروماتوغرافيا الاستخراج. إد. تي براون ، جي جيرسيني. م: مير ، 1978 ، 627 ص.

في. سافونوف ،
أستاذ في موسكو
المنسوجات الحكومية
الأكاديمية. A.N. Kosygina

MZRF

فيسمو

قسم الكيمياء العامة والفيزيائية والغروانية

نبذة مختصرة

طبقة رقيقة اللوني. التطبيق في الصيدلة

أنجزه: طالب المجموعة 201-ف

دانيلوف دي.

فحص بواسطة: Nemov V.A.

خاباروفسك ، 2005

خطة:

مقدمة

القواعد الفيزيائية والكيميائية لـ TLC

كروماتوغرافيا التقسيم على ورق

أساسيات كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

• مواد ماصة
• المذيبات
• تحضير الطبق
• تقنية تطبيق حل الاختبار

اللوني

ألواح التجفيف.

تحديد المواد المفصولة

تطبيق طريقة TLC في الصيدلة

• التحديد الكمي لسابونينات ترايتيربين بواسطة HPTLC باستخدام قياس كثافة المسح
• دراسة التركيب الدهني والفلافونويد لعينات من بعض الأنواع من جنس الذقن (Lathyrus.)

استنتاج

المؤلفات

مقدمة

كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC ، TLC) هي واحدة من أكثر الطرق استخدامًا للتحليل الكروماتوغرافي ، ولكنها الأقل شيوعًا.
على الرغم من أوجه القصور الكبيرة التي كانت موجودة حتى وقت قريب ، إلا أنها تستخدم على نطاق واسع التحليل النوعيالمخاليط ، ويرجع ذلك أساسًا إلى رخص وسرعة الحصول على النتائج. تم تطوير كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) في الأصل لفصل الدهون. على الرغم من أن الكروماتوغرافيا الورقية أسرع من كروماتوغرافيا العمود ، إلا أن لها عيبًا يتمثل في أن الورق لا يمكن صنعه إلا من مواد أساسها السليلوز ، مما يجعلها غير مناسبة لفصل المواد غير القطبية. يحتفظ كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة بجميع مزايا كروماتوغرافيا الورق ، ولكنه يسمح باستخدام أي مادة يمكن طحنها بدقة ومن ثم الحصول على طبقة متجانسة. يمكن أن يكون مواد غير عضوية، مثل هلام السيليكا والألومينا والتراب الدياتومي وسيليكات المغنيسيوم ، وكذلك المواد العضوية ، ولا سيما السليلوز والبولي أميد ومسحوق البولي إيثيلين.

القواعد الفيزيائية والكيميائية لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.

أساس كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة هو طريقة الامتزاز ، على الرغم من وجود كروماتوغرافيا التقسيم أيضًا.
تعتمد طريقة الامتزاز على الاختلاف في درجة امتصاص وامتصاص المكونات المنفصلة في المرحلة الثابتة. يتم الامتزاز بسبب قوى فان دير فال ، التي هي أساس الامتزاز الفيزيائي ، الجزيئي (تكوين عدة طبقات من الممتزات على سطح الممتزات) والامتصاص الكيميائي (التفاعل الكيميائي للممتصات والممتزات).
من أجل عمليات الامتصاص والامتصاص الفعالة ، فمن الضروري ساحة كبيرة، والتي تفرض متطلبات معينة على الممتزات. في سطح كبيرفصل الطور هو إنشاء سريع للتوازن بين أطوار مكونات الخليط والفصل الفعال.
نوع آخر من كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة المستخدمة في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة هو الفصل اللوني السائل.
في الفصل اللوني ، كلا المرحلتين - المتنقلة والثابتة - عبارة عن سوائل لا تختلط مع بعضها البعض. يعتمد فصل المواد على الاختلاف في معاملات توزيعها بين هذه المراحل.
ولأول مرة ، أعلنت طريقة كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة نفسها على أنها "كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة للورق" ، والتي استندت إلى طريقة التوزيع لفصل المكونات.

كروماتوغرافيا التقسيم على ورق.

نظرًا لحقيقة أن الورق الكروماتوغرافي المستخدم في هذه الطريقة (درجات خاصة من ورق الترشيح) يحتوي على ماء (20-22٪) في المسام ، يتم استخدام المذيبات العضوية كمرحلة أخرى.
استخدام الكروماتوغرافيا على الورق له عدد من العيوب المهمة: اعتماد عملية الفصل على تكوين وخصائص الورق ، والتغير في محتوى الماء في مسام الورق مع تغيرات في ظروف التخزين ، وكروماتوغرافيا منخفضة للغاية السرعة (تصل إلى عدة أيام) ، وقابلية استنساخ منخفضة للنتائج. تؤثر أوجه القصور هذه بشكل خطير على انتشار كروماتوغرافيا الورق كطريقة كروماتوغرافية.
لذلك ، يمكن اعتبار ظهور الكروماتوغرافيا في طبقة رقيقة من مادة ماصة ، أي كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، أمرًا طبيعيًا.

أساسيات كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.

في طريقة TLC ، يحدث كروماتوغرافيا المواد في طبقة رقيقة من مادة ماصة تترسب على ركيزة مسطحة صلبة. يحدث الفصل في هذه الطريقة أساسًا على أساس الامتصاص-الامتزاز.
جعل استخدام المواد الماصة المختلفة من الممكن توسيع وتحسين هذه الطريقة بشكل كبير.
في بداية ظهور الطريقة ، كان لابد من صنع اللوحات بشكل مستقل. ولكن اليوم ، يتم استخدام الرقائق الجاهزة بشكل أساسي ، والتي لها نطاق واسع إلى حد ما من حيث الحجم والناقلات ، وفي الركائز.
اللوح الكروماتوغرافي الحديث عبارة عن قاعدة مصنوعة من الزجاج أو الألومنيوم أو البوليمر (على سبيل المثال ، البولي تريفثالات). نظرًا لحقيقة أن القاعدة الزجاجية أصبحت أقل شيوعًا (غالبًا ما تنكسر ، فمن المستحيل تقسيم اللوحة إلى عدة أجزاء دون إتلاف الطبقة الماصة ، ثقيلة الوزن) ، يتم استخدام الألواح القائمة على رقائق الألومنيوم أو البوليمرات على نطاق واسع.
لتثبيت المواد الماصة ، يتم استخدام الجبس والنشا والسيليكاسول ، وما إلى ذلك ، والتي تمسك الحبيبات الماصة على الركيزة. يمكن أن تكون سماكة الطبقة مختلفة (100 ميكرون أو أكثر) ، ولكن المعيار الأكثر أهمية هو أن الطبقة يجب أن تكون متجانسة في السمك في أي مكان على اللوحة الكروماتوغرافية.

المواد الماصة

أكثر المواد الماصة شيوعًا هي هلام السيليكا.
هلام السيليكا هو حمض سيليسيك رطب يتكون من عمل الأحماض المعدنية على سيليكات الصوديوم وتجفيف محلول مائي الناتج. بعد طحن الصولنج ، يتم استخدام جزء من حجم حبة معين (يُشار إليه على اللوحة ، وعادة ما يكون من 5 إلى 20 ميكرون).
هلام السيليكا هو مادة ماصة قطبية ، حيث تعمل مجموعات -OH كمراكز نشطة. يمتص الماء بسهولة على السطح ويشكل روابط هيدروجينية.
الألومينا. الألومينا مادة ماصة أساسية ضعيفة وتستخدم بشكل أساسي لفصل المركبات الأساسية الضعيفة والمركبات المحايدة. عيب الألواح الموجودة على أكسيد الألومنيوم هو التنشيط الإلزامي للسطح قبل الاستخدام في خزانة تجفيف عندما درجة حرارة عالية(100-150 0 درجة مئوية) وقدرة امتصاص منخفضة للطبقة مقارنة بجيل السيليكا.
التراب الدياتومي هو مادة ماصة يتم الحصول عليها من معادن طبيعية: التراب الدياتومي. المادة الماصة لها خصائص محبة للماء ، لكن قدرة امتصاص الطبقة أقل مقارنة بجيل السيليكا.
سيليكات المغنيسيوم أقل قطبية من هلام السيليكا وعادة ما تستخدم عندما لا يعطي المزيد من الممتزات القطبية فصلًا فعالًا.
السليلوز - تعتبر الصفائح المطلية بالسليلوز ذات الطبقة الرقيقة فعالة للغاية في فصل الجزيئات العضوية المعقدة. المادة الماصة عبارة عن كرات سليلوز بقطر يصل إلى 50 ميكرون ، مثبتة على الناقل مع النشا. ولكن كما هو الحال في الكروماتوغرافيا الورقية ، فإن صعود مقدمة المذيب بطيء جدًا.
في الصفائح الكروماتوغرافية للتبادل الأيوني ، يتم استخدام راتنجات التبادل الأيوني المحتوية على الأمونيوم الرباعي أو مجموعات السلفو النشطة المشاركة في التبادل الأيوني كممتاز. يتم إجراء كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة مع هذا النوع من الألواح بمراحل متحركة تحتوي على أحماض أو قلويات قوية. هذه اللوحات فعالة في فصل المركبات الجزيئية والمذبذبة.

المواد الماصة المذكورة أعلاه هي الأكثر شيوعًا ، ولكن بالإضافة إلى ذلك ، هناك العديد من المواد المستخدمة كمواد ماصة. هذه هي التلك وكبريتات الكالسيوم والنشا وما إلى ذلك.
في نفس الوقت ، حتى المواد الماصة التي سبق ذكرها يمكن تعديلها لمنحها خصائص امتصاص جديدة (تشريب المواد الماصة مع الكواشف ، على سبيل المثال ، AgNO 3 ، تكوين ألواح ذات طور معكوس). إن هذه المجموعة المتنوعة من المراحل الممكنة بأقل تكلفة ممكنة هي التي تجعل من الممكن استخدام TLC للكروماتوغرافيا لعدد ضخم من المواد.

المذيبات

في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، يتم استخدام إما المواد النقية (أسيتات الإيثيل ، والبنزين ، وما إلى ذلك) أو خليط من المواد (الأنظمة) بنسب معينة كمرحلة متحركة.
يتم اختيار المرحلة المتنقلة (النظام) وفقًا للقواعد التالية:

· اختر نظامًا تكون فيه المكونات المراد فصلها ذات قابلية منخفضة للذوبان (إذا كانت قابلية ذوبان المادة عالية ، فإن المواد ستتحرك مع المقدمة ، وإذا كانت القابلية للذوبان منخفضة ، فستبقى في البداية). مع الفصل اللوني أو عند استخدام الأطوار المعكوسة ، يجب أن تكون قابلية ذوبان المواد أعلى في الطور المتحرك منها في المرحلة الثابتة.

· يجب أن يكون تكوين النظام ثابتًا وقابلاً للتكرار بسهولة.

· يجب ألا تكون مكونات المذيب أو النظام سامة أو بها عيوب.

· يجب أن يفصل النظام تمامًا المواد ذات البنية المتشابهة ، ويجب ألا تقل الفروق في Rf عن 0.05.

· يجب ألا يتسبب النظام في حدوث تغييرات كيميائية في المكونات المراد فصلها.

في النظام المحدد ، يجب أن تحتوي التحليلات معاني مختلفةالتردد الراديوي وتوزع على كامل طول الكروماتوجرام. من المرغوب فيه أن تقع قيم التردد الراديوي في نطاق 0.05-0.85.

· عند اختيار نظام ما ، يجب أيضًا مراعاة طبيعة المواد المراد فصلها. لذلك ، عند استخدام الكروماتوغرافيا للمواد ذات الخصائص الأساسية ، يجب ألا يكون للنظام خواص حمضية والعكس صحيح.

تحضير الطبق

عند استخدام اللوحات المشتراة ، يجب أولاً تحضيرها للكروماتوغرافيا. ويرجع ذلك إلى حقيقة أنه أثناء التخزين ، لا تمتص المواد الماصة للألواح الرطوبة فحسب ، بل تمتص أيضًا المواد الأخرى الموجودة في الهواء. عند استخدام صفائح غير مُجهزة أثناء الفصل اللوني ، تظهر واجهة "قذرة" ، والتي يمكن أن تتداخل مع تحديد المواد ذات قيم التردد الراديوي الكبيرة ، ويمكن لبعض المواد ، مثل الماء ، تغيير تكوين الطور المتحرك ، وبالتالي تغيير قيم التردد الراديوي الناتجة .
يتكون التحضير الأولي للألواح من تشتيت الألواح بمذيب نقي على ارتفاع اللوحة بالكامل (ميثانول ، بنزين ، ثنائي إيثيل إيثر) ، متبوعًا بتجفيف الصفيحة في فرن عند درجة حرارة 110-120 درجة مئوية لمدة 0.5-1 ساعة. بهذه الطريقة ، يمكن تحضير عدة أطباق في وقت واحد ، وعند تخزينها في مكان جاف ومحكم ، فإنها تحتفظ بخصائصها لعدة أشهر.

تقنية تطبيق حلول الاختبار.

كما اتضح ، فإن تطبيق مادة الاختبار ليست عملية معقدة ، ولكنها في نفس الوقت تؤثر بشكل كبير على نتائج الكروماتوغرافيا.
في كثير من الأحيان ، يتم اختبار المواد التحليلية السائلة أو محاليل المواد الصلبة ، دون أي تحضير مسبق للعينة.
لذلك ، من الضروري دائمًا تذكر عدد من النقاط التي تؤثر بشكل خطير على نتائج الانفصال.
الأهم هو تركيز المواد المطبقة. في TLC ، من المعتاد تطبيق تركيزات محاليل تبلغ حوالي 1٪. ولكن من ناحية أخرى ، تسمح لك حساسية الطريقة بتحديد المواد ذات التركيزات الأقل بكثير.
إذا كان التركيز الكلي للمكونات في مادة الاختبار غير معروف ، أو كان التركيز معروفًا ولكن هذا النوع من المادة لم يتم تحديده بالكروماتوجراف بعد ، فمن الضروري تحديد كمية محلول الاختبار الكافي للكروماتوجرافيا عالية الجودة. هناك عدة طرق لتحديد هذا.
تحتاج أولاً إلى تطبيق عدة نقاط من المحاليل الكروماتوغرافية ، متساوية في الحجم ، ولكن بكميات مختلفة (على سبيل المثال ، 1 ، 2 ، 5 ميكرولتر) وبعد اللوني ، دراسة شكل وحجم البقع المنفصلة.
لذلك ، مع التركيز المحدد بشكل صحيح ، يكون شكل المواد المفصولة هو نفسه الشكل المطبق على خط البداية. إذا كانت البقع المنفصلة أكبر من البقعة في البداية ، فإن التركيز المطبق يكون مرتفعًا جدًا. ظهور "ذيول" ، الشكل غير المنتظم للبقع المنفصلة على اللوحة ، يمكن أن يشير أيضًا إلى تركيز عالٍ ، ولكن يمكن أن يكون ناتجًا عن نظام كروماتوغرافي تم اختياره بشكل غير صحيح ، أو عن طريق التفاعل الكيميائي للمكونات المنفصلة.
من خلال اختيار كمية المادة المودعة ونظام المذيبات ، يمكن تحقيق الفصل الكامل على لوحة واحدة لما يصل إلى عشرة مكونات في المواد قيد الدراسة. من الملائم تطبيق العينات على طاولة خاصة مع الإستنسل والتدفئة. يتم الإكتشاف على "خط البداية" 1-2 سم من الحافة السفلية للوحة. يعد ذلك ضروريًا حتى لا تذوب العينات في النظام عند إنزال الصفيحة ، وتخضع كل المواد المودعة للكروماتوغرافيا.
يتم تطبيق الحلول إما باستخدام ميكروسيرينج أو شعيرات دموية متدرجة. يجب ألا يتجاوز حجم البقعة المطبقة 4 مم. هذا يرجع إلى حقيقة أنه مع وجود حجم موضعي أكبر ، يحدث تغيير في الشكل تحت تأثير القوى الفيزيائية ، وقد تتداخل حدود المكونات المنفصلة.
لا ينبغي أن يقترن تطبيق مواد الاختبار على الألواح بتدمير المادة الماصة (التي لها تأثير قوي إلى حد ما على جودة الفصل) ، لذلك يجب تطبيق القطرة عن طريق لمس الإبرة أو الشعيرات الدموية ضد الطبقة الماصة ، وليس بالضغط. لا يتأثر حجم البقعة الناتجة بكمية المحلول المطبق فحسب ، بل يتأثر أيضًا بقطبية المذيب ونقطة غليانه. لذلك ، عند تطبيق نفس المادة في مذيبات مختلفة ، فإن البقعة الناتجة التي استخدم فيها الميثانول كمذيب ستكون أكبر من البقعة من محلول الكلوروفورم. من ناحية أخرى ، عندما يتم تسخين الركيزة ، سيكون تبخر المذيبات أكثر كثافة وسيقل حجم البقعة أيضًا.
بالطبع ، من الأسهل استخدام مجفف الشعر عند وضعه على البقع الجافة ، ولكن فقط إذا كانت هناك ثقة تامة بأن المواد المطبقة لن تتأكسد تحت تأثير الهواء الساخن.
يجب أن تكون المسافة بين البقع المطبقة حوالي 2 سم.
في بعض الأحيان ، أثناء الفصل الكروماتوغرافي على اللوحات ، يتم ملاحظة تأثير الحافة ، ونتيجة لذلك لا توجد البقع على نفس الخط ، ولكنها تبدو مثل حدوة الحصان ، أو بشكل مائل. للقضاء على هذا التأثير ، يمكن "تزويد" كل بقعة بمسارها الخاص ، مع فصل العينة المطبقة عن العينات الأخرى عن طريق إزالة خط المواد الماصة. من الأفضل القيام بذلك تحت المسطرة باستخدام أداة حادة (مثل المبضع) ولكن احرص على عدم إزالة الكثير من المواد الماصة.
بعد تطبيق مواد الاختبار على اللوحة ، من الضروري تحقيق الإزالة الكاملة للمذيبات ، لأن حتى كمية صغيرة من المذيب في مادة الاختبار يمكن أن تؤثر على الفصل بل وتغير تكوين النظام الكروماتوغرافي.
تتم إزالة المذيبات عادة عن طريق التجفيف الطبيعي للألواح لمدة 5-10 دقائق ، إما عن طريق التسخين بمجفف الشعر أو في الفرن.

اللوني

يحتوي الفصل اللوني للطبقة الرقيقة على عدة طرق تتعلق بشكل أساسي بنوع حركة المذيبات.

تصاعد كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

نزولاً كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الأفقية

· كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الشعاعية.

المنبع كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

هذا النوع من الكروماتوغرافيا هو الأكثر شيوعًا ويستند إلى حقيقة أن الجزء الأمامي من النظام الكروماتوغرافي يرتفع على طول الصفيحة تحت تأثير القوى الشعرية ، أي. يتحرك الجزء الأمامي من النظام الكروماتوغرافي من أسفل إلى أعلى. لهذه الطريقة ، يتم استخدام أبسط المعدات ، حيث يمكن استخدام أي حاوية ذات قاع مسطح وغطاء محكم ، حيث يمكن وضع لوحة كروماتوغرافية بحرية ، كغرفة كروماتوغرافية.
إن طريقة تصاعد كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لها عدد من العيوب. على سبيل المثال ، تحدث سرعة ارتفاع المقدمة على طول اللوحة بشكل غير متساوٍ ، أي في الجزء السفلي هو الأعلى ، ومع ارتفاع المقدمة يتناقص. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن التشبع بأبخرة المذيبات في الجزء العلوي من الحجرة أقل ، وبالتالي يتبخر المذيب بشكل مكثف من لوحة الكروماتوغرافيا ، وبالتالي ينخفض ​​تركيزه وتتباطأ سرعة الحركة. للتخلص من هذا القصور ، يتم تثبيت شرائح من ورق الترشيح على طول جدران غرفة الكروماتوغرافيا ، والتي على طولها يشبع النظام الكروماتوغرافي الصاعد الغرفة بالبخار في جميع أنحاء المجلد.
تحتوي بعض الغرف الكروماتوغرافية على قسمين إلى صينيتين في الأسفل. يسمح هذا التحسين ليس فقط بتقليل استهلاك النظام الكروماتوغرافي (مطلوب حجم أقل للحصول على الارتفاع المطلوب للنظام الكروماتوغرافي) ، ولكن أيضًا لاستخدام كفيت إضافي للمذيب ، مما يزيد من ضغط بخار التشبع في الحجرة.
يمكن أيضًا اعتبار الحاجة إلى مراقبة واجهة المذيب عيبًا ، نظرًا لأن الخط الأمامي للمذيب يمكن أن "يهرب" إلى الحافة العلوية. في هذه الحالة ، لم يعد من الممكن تحديد القيمة الفعلية لـ Rf.

نزولاً كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

تعتمد طريقة الكروماتوغرافيا هذه على حقيقة أن الجزء الأمامي من النظام الكروماتوغرافي ينزل فوق الصفيحة بشكل أساسي تحت تأثير الجاذبية ، أي. يتحرك الجزء الأمامي المتحرك من أعلى إلى أسفل.
بالنسبة لهذه الطريقة ، يتم إرفاق كفيت مع نظام كروماتوجرافي بالجزء العلوي من حجرة الكروماتوغرافيا ، والتي من خلالها ، باستخدام الفتيل ، يدخل مذيب إلى الصفيحة الكروماتوغرافية ، التي تتدفق لأسفل ويتم تصوير العينة بالكروماتوغرافيا.
تشمل عيوب هذه الطريقة مدى تعقيد المعدات. تستخدم هذه الطريقة بشكل أساسي في كروماتوغرافيا الورق.

كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الأفقية

هذه الطريقة هي الأكثر تعقيدًا في تصميم الأجهزة ولكنها الأكثر ملاءمة. لذلك ، في الحجرة الكروماتوغرافية ، يتم وضع اللوحة أفقيًا ويتم تغذية النظام على حافة واحدة من اللوحة باستخدام فتيل. تتحرك جبهة المذيب في الاتجاه المعاكس.
هناك حيلة أخرى لتبسيط الكاميرا قدر الإمكان. للقيام بذلك ، تنحني الصفيحة الكروماتوغرافية القائمة على الألومنيوم قليلاً وتوضع في الحجرة. في هذه الحالة ، سيعمل النظام من جانبين في نفس الوقت. فقط الألواح المدعمة بالألمنيوم مناسبة لهذا الغرض ، لأن القواعد البلاستيكية والزجاجية "غير مرنة" ، أي لا يحتفظ بشكله.
تشمل مزايا هذه الطريقة حقيقة أنه في الخلية الأفقية يحدث تشبع البخار للنظام بشكل أسرع ، والسرعة الأمامية ثابتة. وعند اللوني من كلا الجانبين ، فإن الجبهة لا "تهرب"

شعاعي الكروماتوغرافيا طبقة رقيقة.

يتكون كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة الشعاعية من حقيقة أن مادة الاختبار يتم تطبيقها على مركز اللوحة ويتم تغذية النظام هناك ، والذي ينتقل من المركز إلى حافة اللوحة.

ألواح التجفيف.

بعد عملية فصل مواد الاختبار ، تجفف الألواح. هذه أيضًا عملية مهمة ، لأنه إذا كانت هناك آثار مذيب على اللوحة ، فمن الممكن الحصول على نتائج كروماتوغرافية غير صحيحة.
إذا تضمن النظام الكروماتوغرافي مكونات منخفضة الغليان فقط ، فإن التجفيف الطبيعي لمدة 3-5 دقائق يكون كافياً. إذا كان النظام يشتمل على سوائل عالية الغليان (كحول ، ماء ، أحماض عضوية ، إلخ) ، فيجب تجفيف الألواح لمدة 10 دقائق على الأقل أو وضع اللوحة في الفرن.

تحديد المواد المفصولة.

الصفيحة المجففة عبارة عن كروماتوجرام للمواد المدروسة. إذا كانت المواد ملونة ، يبدأ التحديد بتحديد لون المواد المفصولة.
لكن في معظم الحالات ، تكون المواد المنفصلة عديمة اللون ولا يمكن إجراء مقارنة بصرية بسيطة.
بالنسبة لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، توجد عدة أنواع من التحليل النوعي (تحديد) للمواد المفصولة:

· الطرق البصرية وتحديد الترددات اللاسلكية للمواد المنفصلة.

تفاعلات اللون.

· المقارنة مع الشهود.

· طرق التحديد الفيزيائية والكيميائية.

دعونا نفكر بمزيد من التفصيل في كل نوع من أنواع التحليل النوعي في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.

الطرق الفيزيائية

تُستخدم الطرق المرئية بشكل أساسي لتحديد مواقع المواد المنفصلة على لوحة كروماتوغرافية. للقيام بذلك ، يتم عرض اللوحة في كل من الضوء المرئي واستخدام الضوء فوق البنفسجي (الضوء بشكل أساسي بطول موجة 366 و 254 نانومتر)
هذه هي المرحلة الأولى من التحديد ، والتي تحدد جودة الظروف المختارة ونتائج الكروماتوغرافيا.
لذلك ، بعد تحديد جودة اللوني (عدم وجود "ذيول" للمواد المراد فصلها أو تداخل نقاطها ، والشكل والحجم الصحيحين ، وعدم دمج المسارات الكروماتوغرافية ، وما إلى ذلك) وإعلان الفصل مناسبًا إلى عن على مزيد من البحوث، تحديد الترددات اللاسلكية للبقع المحددة.

قيمة الترددات اللاسلكية.

أحد المؤشرات الرئيسية في TLC هو Rf. هذه المعلمة مماثلة لوقت الاستبقاء وتعتمد على خصائص المواد المراد فصلها ، وتكوين الطور المتحرك والمادة الماصة ، وعلى المعلمات الفيزيائية.
يتم تحديد قيمة Rf كنسبة المسافة التي تمر بها المادة إلى المسافة التي تمر بها جبهة المذيب

قيمة Rf هي قيمة بدون أبعاد ولها قيمة من 0 إلى 1. ومع ذلك ، غالبًا ما توجد مؤشرات مثل hRf و Rf × 100 في الأدبيات ، وهي نفس Rf ، ولكنها مضروبة في 100 ، حتى لا تعمل مع القيم العشرية.
لا تتأثر قيمة Rf بالمسافة التي تقطعها مقدمة المذيب ، ومع ذلك ، فإن العديد من الطرق تصف مرور الجزء الأمامي على مسافة 10 سم ، ويستخدم هذا فقط لتسهيل حساب Rf.
في الممارسة العملية ، في البداية ، يتم تحديد المسافة التي تمر بها واجهة المذيب: من خط البداية (وليس من حافة اللوحة) إلى المكان الذي كانت فيه الجبهة في نهاية الكروماتوغرافيا. ثم يتم تحديد المسافة من خط البداية إلى مكان المادة المفصولة. هذا هو المكان الذي يؤثر فيه حجم البقعة! بعد كل شيء ، إذا وصمة عار شكل دائريوصغر حجمها ، فإن قيمة Rf الناتجة واضحة. وإذا كان للبقعة الناتجة حجم كبير أو شكل غير منتظم ، فعند تحديد Rf لهذه البقعة ، يمكن أن يصل الخطأ إلى 0.1!
في حالة الفصل اللوني ، يرتبط معامل توزيع المادة و Rf الخاص بها بالعلاقة:

أين Spو Sn- مناطق المقطع العرضي للمرحلتين المتنقلة والثابتة.
كما نرى معامل التوزيع بنسبة ثابتة Sp / Snهي كمية تعتمد نسبيًا على Rf ، ويمكن تحديدها من خلالها.

تفاعلات اللون.

تستخدم تفاعلات اللون في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة على نطاق واسع للغاية. إنها لا تعمل فقط على تحديد موقع المكونات المنفصلة (المعالجة بحمض الكبريتيك وبخار اليود) ، ولكن أيضًا لتحديد فئة المواد وتحديدها (في وجود تفاعلات فردية).
لن نعتبر هنا هذا التنوع الهائل من الألوان ردود الفعل النوعية، سنقول فقط أنه إذا تطابقت جميع التفاعلات النوعية وقيم Rf التي تم الحصول عليها للمادة في ثلاثة أنظمة مختلفةمع بيانات الأدب ، يتم تحديد المادة. على الرغم من أنه ، في رأيي ، هناك حاجة إلى تأكيد إضافي عن طريق البحث بطريقة فيزيائية كيميائية أخرى.

مقارنة الشهود.

عند إجراء دراسات للمواد ذات التركيبة المتوقعة ، يتم استخدام طريقة اللوني مع الشاهد- مادة معروفة. تُستخدم هذه الطريقة عندما يصعب تحمل الظروف الكروماتوجرافية ، ولا توجد بيانات أدبية عن الترددات اللاسلكية لنظام معين أو مادة ماصة ، أو استخدام طريقة التدرج ، إلخ. وعند إجراء تفاعلات الألوان ، لا يمكنك مقارنة الألوان فحسب ، بل أيضًا بين ظلال المواد قيد الدراسة والشهود ، وهو أمر مهم أيضًا.
من ناحية أخرى ، تتطلب هذه الطريقة تكاليف إضافية للشهود.

طرق التحليل الكمي

للتحليل الكمي في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عدة أنواع ، تميز كل مرحلة من مراحل تطور الطريقة. وعلى الرغم من أن بعض الأساليب لا يمكن تطبيقها إلا على أنها شبه كمية ، إلا أنها لا تزال مستخدمة في الممارسة العملية.

طريقة المقارنة المرئية.كما ذكرنا أعلاه ، تعتمد كثافة لون البقعة وحجمها على كمية المادة الكروماتوغرافية. لذلك ، يعتمد التقدير الكمي البصري على عدة تقنيات.
طريقة التخفيف. تتكون هذه الطريقة من حقيقة أنه بالنسبة لكل مادة يتم تحديد التركيز المحدد حيث لا يمكن تحديد المادة بالطريقة الكروماتوغرافية. عند إجراء التحليل الكروماتوغرافي لمادة الاختبار ، يتم إجراء التخفيف حتى يتوقف الظهور على اللوحة.
تم العثور على محتوى المادة C ، التي تحددها هذه الطريقة ، من خلال الصيغة:

أين ن-تخفيف، أ- تركيز مادة لا تظهر عند اللوني.
طريقة لتحديد منطقة البقعة.إذا تم تطبيق نفس الأحجام من مواد الاختبار والشهود ، فإن مناطق البقع التي تم الحصول عليها بعد اللوني تتناسب مع لوغاريتم تركيز المادة. S = أ lnج + ب

حيث أ و ب معاملات تجريبية محددة تجريبيا.
إذا كانت بقعة المادة المنفصلة لها حدود حادة ، فيمكن تحديد مساحة البقعة بطريقة الجاذبية (قطع البقعة ووزنها) ، مقاسة بمقياس مسطح. تعطي هذه الطريقة خطأ يصل إلى 10-15٪.
ومع ذلك ، لديها عدد من العيوب الهامة. الأول والأهم هو أنه بهذه الطريقة يمكن تحديد تركيز المواد الملونة أو تلك التي لها مضان في منطقة الأشعة فوق البنفسجية (254 ، 366 نانومتر). يمكن القضاء على هذا العيب عن طريق إضافة العديد من الفوسفور إلى المادة الماصة ، مما يزيد من خطأ التحديد.
يمكن أيضًا استخدام معالجة الألواح بالمواد النامية (الكواشف) (على سبيل المثال ، استخدام ورق الترشيح المشبع بكاشف نامي ، متبوعًا بملامسة لوحة كروماتوغرافية وتحديد مساحة المادة المطورة عليها) ، ولكن خطأ التحديد مرتفع أيضًا.
أدت الحاجة إلى نتيجة تقدير كمية أكثر موثوقية إلى استخدام الأساليب الآلية.
طريقة شطف. تتكون هذه الطريقة من حقيقة أن المادة المفصولة يتم غسلها من المادة الماصة بمذيب ويتم تحديد تركيزها بطرق أخرى - قياس ضوئي ، بولاروجرافي ، إلخ. هذه طريقة دقيقة إلى حد ما ، ولكن فقط بشرط العزل الكمي للمادة المفصولة. نظرًا لكثافة العمالة العالية ، نادرًا ما يتم استخدام الطريقة وغير مقبولة لعدد كبير من العينات قيد الدراسة.
طريقة التصوير الفوتوغرافييتألف التعريف من تصوير الألواح بمادة مفصولة وتحديد درجة السواد باستخدام أجهزة قياس درجة السواد.
طريقة التصوير الشعاعيعلى غرار القياس الضوئي ، فقط مع الاختلاف في تحديد سواد اللوحة ، الناجم عن إشعاع المادة المفصولة. تستخدم هذه الطريقة فقط في تحديد المواد ذات الذرات المسمى.
طريقة قياس ضوئييمكن استخدامه دون عزل المادة عن اللوح ويعتمد على تحديد ليس فقط منطقة البقعة ، ولكن أيضًا شدتها.
هذه هي الطريقة الأكثر دقة لتحديد تركيز المواد ، لأنها تسمح ، باستخدام الرسوم البيانية للمعايرة ، بإجراء تحديدات كمية دقيقة إلى حد ما لجميع المواد المنفصلة (حتى 2-10٪) مباشرة على اللوحة في فترة زمنية قصيرة .
ليس من المستغرب أنه مع تطور كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، يزداد استخدام أجهزة القياس ، وزيادة الحساسية ، وبالتالي دقة تحديد تركيز المواد المنفصلة وتقترب من دقة كروماتوغرافيا السائل عالية الأداء.

أرز. 1. حجرة نموذجية لتطوير صفيحة كروماتوغرافية رقيقة

1. جفن العين
2. غرفة زجاجية
3. لوحة TLC
4. ماصة
5. موقع أخذ العينات
6. مذيب

كروماتوجرام TLC النموذجي لاسترات ميثيل الأحماض الدهنية.

على الكروماتوجرام شهرة= الأحماض الدهنية إسترات الميثيل = إسترات الميثيل للأحماض الدهنية. بداية= نقطة تطبيق المخاليط المراد فصلها.

تم عمل الكروماتوجرام على صفيحة سورفيل. النظام هو البنزين. المظهر - التفحم بعد الرش بحمض الكبريتيك.

نقطة 1 - إسترات الميثيل للأحماض الدهنية. نقطة 2 - منتجات مثيلة للدهون الكلية.

سهميظهر اتجاه حركة جبهة المذيب (النظام). تحركت واجهة المذيب أثناء الفصل الكروماتوغرافي لأعلى إلى الحافة العلوية للوحة.

تطبيق طريقة TLC في الصيدلة

ترجع الأهمية الكبيرة للطرق الكروماتوغرافية للصيدلة إلى حقيقة أنه في إنتاج الأدوية ، في كثير من الحالات ، يلزم العزل الأولي للمنتجات الطبيعية أو الاصطناعية في شكل نقي. غالبًا ما يعتمد التحليل أيضًا على فصل المخاليط إلى مكونات. دعونا ننظر في مثالين لتطبيق طريقة TLC ، لإثبات أهميتها في تحليل وإنتاج المواد الطبية.

التحديد الكمي لسابونين ترايتيربين بواسطة HPTLC باستخدام قياس كثافة المسح

Triterpene saponins (glycosides) هي المكونات النشطة للعديد من الأدوية.

تعتمد معظم الطرق المستخدمة حاليًا في التحديد الكمي لسابونين ترايتيربين على التحلل المائي الحمضي للأخير مع مزيد من التحديد للأجليكون ، غالبًا عن طريق القياس بالمعايرة ، وفي كثير من الأحيان عن طريق طرق التحليل الطيفية.

الأساليب المماثلة القائمة على تدمير جزيئات الصابونين لها عدد من العيوب. وهي طويلة ولا تسمح بإجراء تقييم كمي لنسبة الصابونين الفردي في المستحضرات المحتوية على الصابونين.

في معظم الحالات ، يقصر المؤلفون أنفسهم ، كقاعدة عامة ، على التقييم النوعي باستخدام طريقة TLC ، وهي الطريقة الكروماتوغرافية الأسهل والأكثر سهولة في التحليل. يتم تقييد استخدام TLC لتحديد المحتوى الكمي للمكونات بسبب عدم وجود أجهزة قياس كثافة المسح.

يعرض هذا البحث نتائج التقدير الكمي لـ TLC لبعض صابونين ترايتيربين ومشتقات حمض الأولينوليك في المستحضرات الصيدلانية والمستخلصات من المواد النباتية.

تم اختيار Triterpene saponins من Manchurian aralia (aralosides) كأغراض للدراسة. يتم تغطية التحديد النوعي في كائنات مختلفة في الأعمال ، وكذلك ترايتيربين صابونين بنجر السكر - مواد ذات نشاط دوائي محدد مسبقًا. كلاهما مشتق من حمض الأولينوليك بكمية صغيرة (لا تزيد عن أربعة) من مخلفات السكر ، مما يوحي بسلوكهما المماثل في طبقة رقيقة من المادة الماصة.

كمعايير ، استخدمنا مجموع aralosides المعزول من أقراص Saparal ومجموع saponins بنجر السكر المعزول من جذور المحصول حديثًا. للتطبيق على الصفيحة ، تم تحضير المحاليل المائية الكحولية (80٪ إيثانول) من السابونين بمحتوى الأخير 0.4-2.0 مجم / مل. تم إجراء الكروماتوغرافيا باستخدام لوحات TLC "Silufol" (جمهورية التشيك) ​​15 × 15 سم ، و "Armsorb" لـ HPTLC (أرمينيا) 6 × 10 سم و "Sorbfil" (روسيا) 10 × 10 سم. كان ارتفاع الارتفاع الأمامي ، الكافي للفصل الكامل ، 10.6 و 6 سم على التوالي. تم تطبيق العينات باستخدام microsyringe MSH-10 (روسيا) على لوح مسخن إلى 40 درجة مئوية. كان الحجم الأمثل للعينة المطبقة هو 3-5 ميكرولتر. تم تنفيذ التطبيق على عدة مراحل بحيث يكون قطر نقطة البداية لم تتجاوز 2 مم.

تم إجراء الكروماتوغرافيا عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية. في نهاية الشطف ، تم تجفيف الألواح في الهواء ومعالجتها بكاشف كشف باستخدام بخاخ زجاجي معمل. تم مسح المناطق باستخدام مقياس كثافة المسح Shimadzu CS-9000 (اليابان). تمت مقارنة جودة المناطق التي تم الحصول عليها عن طريق اللوني في أنظمة الشطف الثلاثة الأكثر شيوعًا: I. الكلوروفورم - الميثانول - الماء (30: 17: 3) : II. n-butanol - ethanol - amonia (7: 2: 5) III. n-butanol - water - acetic acid (4: 5: 1)، upper layer IV. benzene - ethyl acetate (1: 1) (for بنجر صابونين السكر).

تم استخدام محلول كحول بنسبة 25٪ من حمض الفوسفوتنجستيك ككواشف للكشف (بقع قرمزية من الصابونين على خلفية بيضاء). الأكثر شيوعًا في تحديد TLC الكمي لمثل هذه المركبات ومحلول كحول 10٪ من حمض الفوسفوموليبدك ، موصى به لتطوير مناطق ترايتيربينويد (مناطق الصابونين زرقاء داكنة على خلفية صفراء). تتيح معالجة الألواح ببخار الأمونيا في الحالة الأخيرة تغيير لون الخلفية وزيادة تباين البقع.

نتيجة للدراسات التي أجريت ، تم اختيار الظروف المثلى للعملية الكروماتوجرافية لتحديد قياس الكثافة. تم التعرف على أفضل أنواع اللوحات الثلاثة من قبل "Armsorb" لـ HPTLC. كفاءة عاليةيتم تسهيل العملية من خلال طبقة رقيقة (II0 ميكرومتر) ومتجانسة في التركيب الجزئي (5-10 ميكرومتر) من هلام السيليكا ، والتي توفر فصلًا جيدًا وتقليل ضبابية المناطق حتى عندما ترتفع واجهة المذيب بمقدار 6 سم. تكاد تكون جيدة مثلهم في القدرة على الانفصال ، لكن وقت الشطف عليهم يقارب ضعف المدة. تتيح لك اللوحات "Silufol" بمعدل شطف مرتفع بدرجة كافية فصل المكونات بمسار كروماتوغرافي أكبر ، مما يؤدي إلى بعض الضبابية في المناطق ، ولكن يمكن استخدامها أيضًا.

يمكن إجراء عملية الشطف بجودة كافية في أي من أنظمة الشطف الثلاثة الأولى. أعطي مكسبًا في الوقت المناسب ، يتيح لك IV الحصول على فصل أفضل لسابونين بنجر السكر عن الثلاثة الأولى.

يعطي كلا كواشف الكشف تلطيخًا مستقرًا إلى حد ما للمناطق عند إجراء المسح في غضون ساعة إلى ساعتين من لحظة التطوير. بعد هذه الفترة ، يتغير لون مناطق الصابونين الموجودة على الألواح المعالجة بحمض الفوسفوتونغستيك من التوت إلى البنفسجي ، مما قد يؤدي إلى تشويه نتائج التحليل الكمي أثناء المسح. يفضل العلاج بحمض الفوسفوموليبدك في هذه الحالة. عند تخزينها في مكان محمي من الضوء ، أعطت الألواح ذات المناطق التي طورها هذا الكاشف نتائج قابلة للتكرار تمامًا بعد عدة أشهر من لحظة التطور.

كان حد الكشف عن السابونين 5 ميكروغرام في العينة عند التطور باستخدام حمض الفوسفوتونجستيك و 0.5 ميكروغرام في العينة عند التطور باستخدام حمض الفوسفوموليبدك. جعلت المعالجة ببخار الأمونيا من الممكن تقليل حد الكشف عن الصابونين في الحالة الأخيرة إلى 0.2 ميكروغرام لكل عينة.

تم إجراء التحديد الكمي للصابونين بواسطة TLC باستخدام قياس كثافة المسح على ألواح Armsorb (كانت سرعة الفصل الكروماتوغرافي في هذه الحالة 2 مرات أعلى) أو "Sorbfil" ، في نظام الشطف الثاني والثالث (لاحتوائه على مكونات أقل سمية). تم الكشف عن المناطق بمحلول 10٪ من حمض الفوسفوموليبدك. لا يزيد حجم العينة المطبقة عن 5 ميكرولتر ، ويبلغ ارتفاع الجبهة الشفافة 6 سم ، ووقت الشطف 30-60 دقيقة. مسح الطول الموجي λ = 675 نانومتر. بعد معالجة الأطباق ، تظهر صابونين أراليا وبنجر السكر في شكل ثلاث مناطق ذات كثافة مختلفة.

يظهر الشكل العام لمخططات الكثافة التي تم الحصول عليها أثناء المسح في الشكل. واحد.

مقارنة بين اللوني السابونين المعزولة من أقراص "سابارال" (الشكل 1 ، أ) و "صبغة أراليا" (الشكل. 1,6) يسمح لنا بملاحظة النسبة المختلفة 44

aralosides A و B و C ، والتي تعد جزءًا من أشكال الجرعات هذه. لوحظ تباين مماثل في نسبة الصابونين الفردي في المواد الخام ، اعتمادًا على ظروف نمو النبات ، سابقًا. نسبة الصابونين النهائي أشكال الجرعاتتقييمها بسهولة باستخدام مخططات الكثافة التي تم الحصول عليها. نظرًا لوجود 3 مناطق مقابلة للصابونين على الكروماتوجرام ، وثلاث قمم على مخطط الكثافة ، على التوالي ، تم تلخيص مناطق جميع القمم عند بناء اعتماد المعايرة. كان الخطأ في هذه الحالة أقل مما هو عليه في الحسابات القائمة على معلمات ذروة أحد المكونات ، مع مراعاة تباين نسبتها (الشكل 2).

أرز. I. Densitograms التي تم الحصول عليها عن طريق مسح لوحات TLC: أ- Aralia saponins معزولة من أقراص Saparal ؛ 6 - صابونين صبغة أراليا ؛ في- صابونين بنجر السكر. المحتوى الكلي للصابونين في العينة هو 5 ميكروغرام. أ ، ب ، ج- قمم الصابونين. 0 - خط البداية ؛ F- الخط الأمامي.

أرز. الشكل 2. اعتماد المعايرة لمجموع مناطق صابونين الذروة على مخطط الكروماتوجرام على محتواها في العينة. / - Aralia saponins ؛ 2 - صابونين بنجر السكر. على محور الإحداثيات - محتوى الصابونين في العينة (ميكروغرام) ، على المحور الإحداثي - مجموع مناطق الذروة (سم 2).

تم الحصول على اعتماد المعايرة لمجموع مناطق الذروة على مخطط الكثافة على محتوى المادة في العينة عن طريق كروماتوغرافيا سلسلة من الحلول القياسية ذات المحتوى المعروف من الصابونين. تم تحضير المحلول الأولي بإذابة 80٪ من الإيثانول والوزن الدقيق من الصابونين ، وتجفيفه إلى وزن ثابت. تم تحضير سلسلة من حلول العمل عن طريق التخفيف المتسلسل للإيثانول الأولي بنسبة 80٪. كان محتوى الصابونين فيها 0.04 - 2.0 مجم / مل (0.2 - 10 ميكروجرام في عينة بحجم عينة 5 ميكرولتر). يمكن اعتبار نطاق التركيز هذا هو الأمثل للمسح. الحد الأدنى لمحتوى الصابونين الذي تحدده هذه الطريقة هو 0.2 ميكروغرام / عينة. الانحراف المعياري النسبي في هذه الحالة لا يتجاوز 0.03.

تبعيات المعايرة الناتجة غير خطية ، وهو ما يتوافق تمامًا مع نظرية Kubelka-Munk ، التي تأخذ في الاعتبار امتصاص وتشتت الضوء بواسطة المادة الماصة. في نطاق ضيق من التركيزات المنخفضة ، يمكن اعتبار التبعيات خطية (0.2 - 2.0 ميكروغرام / عينة). يمكن جعل الجزء غير الخطي من المنحنيات خطيًا عن طريق تحويل كمية المادة في العينة ومنطقة الذروة إلى أشكال متبادلة ويأخذ الشكل الموضح في الشكل. 3.

أرز. 3. اعتماد مقلوب مجموع مناطق قمم الصابونين على الكروماتوجرام (1 / S 10-1) على القيمة المتبادلة لمحتوى العينة (1 / م - 10-1). 1 - صابونين أراليا ؛ 2 - صابونين بنجر السكر.

باستخدام اعتماد المعايرة الذي تم الحصول عليه ، تم تحديد محتوى الصابونين في صبغة أراليا. تم تخفيف 5 مل من الصبغة مع 70٪ إيثانول في دورق حجمي 25 مل. تم تطبيق 5 ميكرولتر من المحلول الناتج على خط البداية من أرمسورب بلاستانس. تم وضع 5 ميكرولتر من محلول قياسي من aralosides بتركيز 1 مجم / مل (5 ميكروغرام في العينة) على النقطة المجاورة. تمت معالجتها على النحو الموضح أعلاه.

كان الفرق بين النتائج التي تم الحصول عليها ونتائج التحديد وفقًا لـ PS 42-1647-93 (5.3 مجم / مل) 6-7٪ في اتجاه المبالغة في التقدير ، والذي يمكن تفسيره بفقدان الصابونين أثناء المراحل المتعددة تحضير العينة حسب PS (جدول).

تم استخدام الطريقة الموضحة أعلاه لتحديد الصابونين في أقراص "Saparal" وفي المواد الخام النباتية (جذور نبات أراليا منشوريا وجذور بنجر السكر) مع الاستخراج الأولي الشامل للصابونين من الأقراص من المواد الخام - 80٪ إيثانول ساخن. الانحرافات عن نتائج التحديد وفقًا للمواصفة FS 42-1755 - 81 للأقراص (0.040 جم) هي ضمن نفس حدود الصبغة (الجدول).

وبالتالي ، تم عرض إمكانية التحديد الكمي الصريح لبعض صابونين ترايتيربين ومشتقات حمض الأولينوليك في المستحضرات الصيدلانية والمواد النباتية بواسطة HPTLC مع التقييم الكمي اللاحق للمناطق التي تم الحصول عليها باستخدام قياس كثافة المسح.

ترتبط نتائج التحديد جيدًا بنتائج التحديد بواسطة PS. تتيح هذه التقنية إمكانية الجمع بين تحديد أصالة المستحضرات بواسطة TLC (بواسطة FS) مع المسح اللاحق لمناطق المكونات الموجودة على اللوحات وتقييمها الكمي. تتيح المخططات اللونية التي تم الحصول عليها أثناء المسح أيضًا تحديد نسبة الصابونين الفردي في الكائنات التي تم تحليلها.

نتائج التحديد الكمي للتأرجح فيCTofik-من اراليا (I) وأقراص "Saparal" (2) بطريقة TGC باستخدام مسح dsnsptoietrnn / "= 0.95 ، و - 5 ،/=2,78,/=4

دراسة التركيب الشحمي والفلافونويد لعينات من بعض الأنواع من الصين ( لاثيروس .)

من العديد من ممثلي عائلة البقوليات ، مثل البرسيم ، الترمس ، البرسيم ، البيقية ، الفلافونويد تم عزلهم والتي لها مجموعة واسعة من الإجراءات: مضادات الالتهاب ، التئام الجروح ، تقوية الأوعية الدموية ، إلخ. تم عزل الايسوفلافون من البرسيم الأحمر: بيوشانين أ - 0.8٪ وفورمونونيتين - 0.78٪ ، والتي لها نشاط استروجين.

لقد درسنا تركيبة الفلافونويد في أنواع معينة من رتبة الجنس: الفصل البذر (I) ، schlugovaya (II) ، الفصل.

بهدف الاستخدام المحتمل للمركب الدهني في المضافات الغذائيةوالأدوية ، درسنا أيضًا التركيب الجزئي الكامل للدهون في عشب وبذور الذقن.

المواد والأساليب

تم عزل الجزء الدهني من المواد الخام الجافة وفقًا لطريقة Bligh and Dyer.

تمت إضافة 1.6 مل من الماء المقطر إلى عينة (0.2 جم) من مادة نباتية جافة وحفظها لمدة يوم في البرد. ثم تمت إضافة 6 مل من خليط من الكلوروفورم - ميثانول (1: 2) وتركها لمدة 3 أيام ، وبعد ذلك تم الطرد المركزي عند 8 آلاف دورة في الدقيقة - 15 دقيقة. تمت إضافة 2 مل من الماء و 2 مل من الكلوروفورم إلى المادة الطافية الصافية. تم فصل النظام الناتج ثنائي الطور في قمع فصل. تم غسل طبقة الكلوروفورم مرتين باستخدام ميثانول وتبخيرها حتى تجف على مبخر دوار. تم تجفيف المتبقي في مجفف مفرغ ، ثم تم تخفيفه باستخدام الكلوروفورم إلى تركيز 10 مجم / مل ، وتم تخزين المحلول في كلوروفورم مستقر عند +4 درجة مئوية.

تم إجراء التحليل النوعي للجزء الدهني باستخدام TLC على ألواح Kizelgel 60 (254) في أنظمة المذيبات التالية:

أ- للدهون المحايدة: 1) الهكسان - البنزين (9: 1) ؛ 2) الهكسان - الأثير - حمض الخليك (90: 10: 1).

ب- للدهون القطبية (الفسفوليبيدات): 1) كلوروفورم - أسيتون - ميثانول - حمض أسيتيك - ماء (6: 8: 2: 2: 1) ، حمضي. 2) الكلوروفورم - ميتا

نول - 26 ٪ أمونيا (65: 25: 5) ، قاعدي ؛ 3) كلوروفورم - ميثانول - ماء (65: 25: 4) ، محايد.

عند تحديد التركيب النوعي للفوسفوليبيدات ، تم تحديدها باستخدام مطورين مختلفين (بخار اليود ، نينهيدرين ، كاشف دراجندورف ، حمض الكبريتيك) وباستخدام الترددات اللاسلكيةالمعايير.

جعلت مجموعة الأنظمة والكواشف المذكورة أعلاه من الممكن إجراء تحليل شامل لكسور الدهون المعزولة من عينات الذقن.

لدراسة تركيبة الفلافونويد ، مع مراعاة مراحل الغطاء النباتي ، تم اختيار العينات التالية: I (مرحلة التزهير) ؛ الرابع (مرحلة الإزهار) ؛ المرحلة الثالثة (sochevnik) من مهدها ؛ الثاني (مرحلة الإزهار) ؛ الثاني (مرحلة الاثمار) ؛ الثاني (مرحلة الغطاء النباتي قبل الإزهار).

تم عزل مركبات الفلافونويد عن المواد الخام الجافة بطريقة تضمن استخلاصها الشامل.

لهذا الغرض ، تم وضع 1 جم من العشب المسحوق في دورق ارتجاع ، مملوء بـ 20 مل من الإيثانول بنسبة 70٪ ، وغليه لمدة 20 دقيقة في حمام مائي. يبرد المستخلص ، يرشح من خلال مرشح شوت زجاجي ، ويبخر حتى يجف على مبخر دوار. تمت إذابة المتبقي في كحول إيثيلي إلى تركيز نهائي قدره 10 مجم / مل. تم تحديد المحتوى الكلي لمركبات الفلافونويد باستخدام مادة الروتين كمعيار. نتائج هذه الدراسة موضحة في الجدول. 3.

تم تحديد التركيب النوعي للفلافونيدات بواسطة TLC على ألواح Kieselgel 60 (254) من Merck ، في نظام المذيبات n- بيوتانول - حمض أسيتيك - ماء (6: 1: 2). الكاشف - حامض الكبريتيك عند الأشعة فوق البنفسجية (254 نانومتر) - بقع الفلافونويد لون أرجوانيعلى خلفية خضراء.

الجدول 1

المحتوى الكلي لمركبات الفلافونويد في المواد الخام (العشب) لأنواع مختلفة من الصين (بالنسبة المئوية ، من حيث الوزن الجاف تمامًا)

أرز. التين. 1. TLC لتكوين الفلافونويد لأنواع مختارة من جنس الذقن. ج- كمية شهود الفلافونويد: أونونين - الترددات اللاسلكية 0.28 ؛ نمط - ر.0.48 ؛ لوتولين جلوكوزيد - الترددات اللاسلكية 0.58 ؛ فورمونونيتين - الترددات اللاسلكية 0.64 ؛ كيرسيتين - الترددات اللاسلكية0,79: لوتولين - الترددات اللاسلكية 0.82 ؛ بيوشانين أ - الترددات اللاسلكية 0.85 ؛ ابيجينين - الترددات اللاسلكية 0,92.

أرز. التين. 2. TLC من مركبات الفلافونويد من عشب المروج في مراحل مختلفة من الغطاء النباتي. IIa - مرحلة الإزهار ؛ IIb - مرحلة الإثمار: IIc - مرحلة الغطاء النباتي قبل الإزهار. ج- كمية شهود الفلافونويد: أونونين - الترددات اللاسلكيةو 0.28 ؛ نمط - الترددات اللاسلكية 0.48 لوتولين جلوكوزيد - الترددات اللاسلكية 0.58 ؛ فورمونونيتين - الترددات اللاسلكية 0.64 ؛ كيرسيتين - الترددات اللاسلكية 0.79 ؛ لوتولين - ر ( 0.82 ؛ بيوشانين أ - الترددات اللاسلكية 0.85 ؛ ابيجينين - الترددات اللاسلكية 0,92.

عند دراسة تركيبة الفلافونويد II في مراحل مختلفة من الغطاء النباتي ، لوحظ أنه بالإضافة إلى الروتين والكيرسيتين ، يوجد أونين وفورمونونيتين بكمية ملحوظة في المستخلص. تم العثور على مركبات الفلافونويد الأخرى بكميات ضئيلة.

وهكذا ، فقد تبين أنه في أنواع مختلفة من الذقن ، في مراحل مختلفة من الغطاء النباتي ، يتم احتواء كل من الجليكوسيدات والجليكون - أونونين ، وروتين ، ولوتولين جلوكوزيد و aglycones الخاصة بهم: فورمونونيتين ، كيرسيتين ولوتولين ، وتختلف تركيبتها باختلاف نوع النبات وفي نبات واحد (رتبة مرج) حسب مرحلة الغطاء النباتي.

الجدول 2

المحتوى الكمي لمركبات الفلافونويد الرئيسية في الممثلين الفرديين للجنس الصيني (في %, من حيث الوزن الجاف تمامًا)

في الثاني ، تم العثور على كل من ononin و formononetin في الفترة الخضرية. خلال فترة الإزهار والإثمار ، تنخفض كمية ononin بشكل ملحوظ ، وتزداد كمية Formononetin.

تم تحديد المحتوى الكمي لمركبات الفلافونويد الرئيسية في العينات المدروسة بواسطة TLC الكمي تحت نفس الظروف. نتائج هذه الدراسة موضحة في الجدول. 2.

على النحو التالي من البيانات الواردة في الجدول. 2 ، أنواع مختلفةتعتبر الذقن مصدرًا غنيًا للـ bloflavonoids ، حيث تُظهر هذه النباتات أحد أنواع النشاط البيولوجي.

استنتاج:

تتمثل إحدى المهام المهمة للكيمياء الحديثة في التحليل الموثوق والدقيق للمواد العضوية ، والتي غالبًا ما تكون متشابهة في التركيب والخصائص. بدون هذا ، من المستحيل إجراء المواد الكيميائية والبيوكيميائية و بحث طبىتعتمد الطرق البيئية للتحليل البيئي ، والفحص الجنائي ، وكذلك الصناعات الكيميائية والنفطية والغازية والغذائية والطبية والعديد من القطاعات الأخرى في الاقتصاد الوطني إلى حد كبير على هذا. يتم هنا تقديم جزء صغير فقط من طرق وتقنيات كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة. ولكن كما ترون من هذا الفصل الكروماتوغرافي الصغير ذي الطبقة الرقيقة لديه إمكانيات كبيرة وخطيرة ، مقترنة بالراحة والبساطة.