Етапи на изолиране на чиста култура от аероби Микробиология. Физиология на микроорганизмите: културни свойства на бактерии, изолиране на чисти култури от микроорганизми

Култивирането на микроорганизми, освен от състава на хранителната среда, зависи от физични и химични фактори (температура, киселинност, аерация, светлина и др.). В същото време количествените показатели на всяка от тях не са еднакви и се определят от особеностите на метаболизма на всяка група бактерии. Съществуват методи за култивиране на микроорганизми върху твърди и течни хранителни среди при аеробни, анаеробни и други условия.

Методи за изолиране на чисти култури от аеробни микроорганизми. За да се получат изолирани колонии, по време на приложение материалът се разпределя така, че бактериалните клетки да се отделят една от друга. За получаване на чиста култура се използват две основни групи методи:

а) методи, базирани на принципа на механичното отделяне на микроорганизми;

б) методи, базирани на биологичните свойства на микроорганизмите.

Методи, базирани на принципа на механичното разделяне на микроорганизмите

Пресяване с шпатула според Дригалски. Вземете 3 петриеви панички с хранителна среда. Капка от тестовия материал се нанася върху 1-вото блюдо с примка или пипета и се втрива с шпатула върху цялата повърхност на хранителния агар. След това шпатулата се прехвърля във 2-ра чаша и културата, останала върху шпатулата, се втрива в повърхността на хранителната среда. След това шпатулата се прехвърля в 3-та чаша и се инокулира по същия начин. На 1-ва чаша расте максималният брой колонии, на 3-та - минималният. В зависимост от съдържанието на микробни клетки в изследвания материал върху една от чашите се развиват отделни колонии, подходящи за изолиране на чиста култура от микроорганизма.

Метод на Пастьор (метод на разреждане).Редица серийни, по-често десетократни серийни разреждания се приготвят от тестовия материал в течна стерилна среда или физиологичен разтвор в епруветки. След това материалът се засява с морава, 0,5 ml от всяка епруветка. Предполага се, че в някои от епруветките ще остане броят на микроорганизмите, които могат да бъдат преброени при посяване върху среда на плоча. Този метод дава възможност да се изчисли микробното число в тествания материал. (Микробното число е броят на колониите в последната плака с растежа на микроорганизмите, умножен по степента на разреждане на материала).

Пресяване с примка (засяване с удари).Вземете едно петриево блюдо с хранителен агар и го разделете на 4 сектора, като начертаете демаркационни линии от външната страна на дъното на блюдото. Изследваният материал се въвежда в първия сектор с примка и с него се изчертават успоредни линии през целия сектор на разстояние около 5 mm една от друга. Със същата примка, без да се променя позицията й спрямо агара, се изчертават същите линии върху други сектори на съда. На мястото, където голям брой микробни клетки паднаха върху агара, растежът на микроорганизмите ще бъде под формата на непрекъснат удар. Отделни колонии растат на сектори с малък брой клетки. Възможно е също да се излеят разредени разтвори на смесената култура върху повърхността на твърдата среда в съдовете.

Метод на филтриране.Основава се на преминаване на тестовия материал през специални филтри с определен диаметър на порите и разделяне на съдържащите се микроорганизми по размер. Този метод се използва главно за пречистване на вируси от бактерии, както и за получаване на фаги и токсини (във филтрата - чист фаг, пречистен токсин).

Методи, базирани на биологичните свойства на микроорганизмите

Създаване на оптимални условия за размножаване

Създаване на оптимален температурен режим за селективно потискане на размножаването на съпътстващата микрофлора при ниски температури и производство на култури от психрофилни или термофилни бактерии. Повечето микроби се развиват добре при 35-37°C, Yersinia се развиват добре при 22°C, лептоспирите се култивират при 30°C. Термофилните бактерии растат при температури, които са извън температурните режими на други свързани бактериални видове (например Campylobacter се култивира при 42°C).
Създаване на условия за аеробиоза или анаеробиоза. Повечето микроорганизми се развиват добре в присъствието на атмосферен кислород. Задължителните анаероби растат в условия, които изключват наличието на атмосферен кислород (причинители на тетанус, ботулизъм, бифидумбактерии, бактероиди и др.). Микроаерофилните микроорганизми растат само при ниско съдържание на кислород и високо съдържание на CO2 (Campylobacter, Helicobacter).
метод на обогатяване. Тестовият материал се посява върху елективни хранителни среди, които насърчават растежа на определен вид микроорганизми.

Методи за изолиране на чисти култури от микроорганизми

Тъй като микробите растат дифузно в течна среда, т.е. лесно се разпространяват в околната среда, трудно е да се изолира една микробна клетка от друга. По този начин методът на Пастьор не винаги осигурява чиста култура. Ето защо в момента този метод се използва главно за предварително намаляване на концентрацията на микроорганизми в материала преди инокулирането му в плътна среда за получаване на изолирани колонии.

Методи за механично разделяне на микроорганизми с помощта на плътни хранителни среди.Тези методи включват метода на Кох и метода на Дригалски.

Метод на Кох (метод на дълбоко засяване).

Тестовият материал се въвежда с бактериологична бримка или пипета на Пастьор в епруветка с разтопена плътна хранителна среда. Разбъркайте равномерно съдържанието на епруветката, като я въртите между дланите. Капка от разредения материал се прехвърля във втората епруветка, от втората в третата и т.н. Съдържанието на всяка епруветка, като се започне от първата, се излива в стерилни петриеви панички. След втвърдяване на средата в чашите те се поставят в термостат за култивиране.

За да се изолират анаеробни микроорганизми по метода на Кох, е необходимо да се ограничи достъпът на кислород до културата.

За тази цел повърхността на дълбокото посяване в петриево блюдо се запълва със стерилна смес от парафин и вазелин (1:1). Можете също така да оставите инокулума, напълно смесен с агарната среда, директно в епруветката.

В същото време памучната тапа се заменя с гумена или повърхността на агара се излива със смес от парафин и вазелиново масло. За да се извлекат порасналите колонии от анаеробни микроорганизми, епруветките се нагряват леко чрез бързо въртене върху пламък на горелка. Агарът, съседен на стените, се разтопява и колоната лесно се плъзга в подготвеното петриево блюдо. След това колоната с агар се нарязва със стерилен скалпел, колониите се отстраняват със стерилна примка или стерилен капилярен разрез и се прехвърлят в течна среда.

Метод на Дригалскисе основава на механичното отделяне на микробни клетки върху повърхността на плътна хранителна среда в петриеви панички.

Всяка микробна клетка, фиксирайки се на определено място, започва да се размножава, образувайки колония.

За сеитба по метода на Дригалски се използват няколко петриеви панички, пълни с плътна хранителна среда.

Капка от тестовия материал се поставя върху повърхността на средата.

След това с помощта на стерилна шпатула тази капка се разпределя върху цялата хранителна среда (засяване с морава).

Засяването може да се извърши и чрез щрих с помощта на бактериологична примка. Със същата шпатула или примка сеитбата се извършва във втората, третата и т.н. чаши. По правило микробният растеж под формата на непрекъснато покритие се появява в първата плоча след култивирането на реколтата, в следващите плочи съдържанието на микроби намалява и се образуват изолирани колонии, от които лесно може да се изолира чиста култура чрез скрининг.

По този начин се получава непрекъснат растеж в първите сектори и изолирани колонии ще растат по протежение на следващите удари, които са потомство на една клетка.

За да спестите среда и прибори, можете да използвате една чиния, като я разделите на сектори и да ги инокулирате последователно с удар (метод на изчерпване на удара).

За да направите това, материалът се взема с примка и с него се начертават поредица от успоредни щрихи, първо върху повърхността на първия сектор, а след това всички останали сектори се засяват, като клетките остават върху примката.

С всеки следващ удар броят на засадените клетки намалява.

Метод за изолиране на чисти култури с помощта на химикалиизползвани при изолирането на култури от микроорганизми, устойчиви на определени химикали.

Например, този метод може да се използва за изолиране на чиста култура от Mycobacterium tuberculosis, която е устойчива на киселини, основи и алкохол. В този случай тестовият материал преди сеитба се излива с 15% разтвор на киселина или антиформин и се държи в термостат за 3-4 часа.

След излагане на киселина или основа, клетките на туберкулозния бацил остават живи и всички други микроорганизми, съдържащи се в тестовия материал, умират. След киселинна или алкална неутрализация обработеният материал се засява върху твърда среда и се получават изолирани колонии от причинителя на туберкулозата.

Биологични методи за изолиране на чисти култури от патогенни микроорганизмисе основават на заразяване с тестовия материал на лабораторни животни, чувствителни към този вид патоген.

Ако в тествания обект се съдържа патогенен микроорганизъм, тогава лабораторното животно се разболява и умира. След аутопсията на падналото животно вътрешните органи се засяват върху специални среди, върху които растат чисти култури от изолирани микроби.

Предишна567891011121314151617181920Следваща

ВИЖ ПОВЕЧЕ:

Изолиране на чиста бактериална култура

Чистата култура е култура, съдържаща микроорганизми от същия вид и получена като потомство на една клетка. Чисти култури могат да бъдат получени от оригиналната микробна клетка, изолирана с помощта на микроманипулатор, или от изолирани колонии чрез субкултивирането им в отделни епруветки с хранителна среда.

За изолиране на чиста култура се използват следните методи.

1. Метод на Дригалски.При този метод разтопената хранителна среда се излива в 3 петриеви панички. Една капка от тестовия материал се добавя към първата чаша и се разнася върху повърхността на хранителната среда със стерилна шпатула. След това шпатулата се прехвърля във втората и след това в третата чаша, като останалият върху нея материал се втрива в повърхността на хранителната среда.

При засяване по този метод изолирани колонии растат на втората и третата плоча. Получените отделни колонии се засяват в епруветки с хранителна среда за получаване на чиста култура на микроорганизма.

2. Метод на успоредни удари.При този метод материалът се разпръсква върху повърхността на агара с помощта на бактериологична примка с успоредни удари в една посока.

След това, завъртайки чашата на 90 °, се начертават щрихи в посока, перпендикулярна на първите щрихи. При този метод на сеитба материалът в бримката се изразходва постепенно и отделни колонии от микроби растат по линиите на ударите, нанесени в края на сеитбата.

3. Метод на Кох (метод на пресяване в дълбочина на средата).При този метод една бактериологична бримка от тестовия материал се въвежда в епруветка с агар, разтопен и охладен до 43-45 ° C и се смесва старателно.

След това един цикъл от материала се прехвърля от тази епруветка във втората епруветка и след това от нея в третата епруветка. Приготвените разреждания на бактериите се изсипват от епруветки в стерилни петриеви панички. След втвърдяване на средата, чашите се поставят в термостат. Броят на колониите в плочките с култури намалява с разреждането на материала.

Контролни въпроси по темата на урока:

1. Естеството на бактериалния растеж в течни, полутечни и плътни хранителни среди.

Характеристика на колонии от микроорганизми.

3. Пигменти на бактериите и тяхната роля за микроорганизмите.

4. Методи за изолиране на чисти бактериални култури.

Литература за подготовка за урока:

Основна литература:

1. Медицинска микробиология, вирусология и имунология. Изд. А.А.

Воробьов. М., 2004.

Допълнителна литература:

1. Л.Б. Борисов. Медицинска микробиология, вирусология, имунология. М., 2002.

2. ОК Поздеев. Медицинска микробиология.

М., ГЕОТАР-МЕДИА, 2005 г.

3. Медицинска микробиология. Справочник. Изд. В И. Покровски и О.К. Поздеева. М., ГЕОТАР-МЕД, 1998.

ДЕЙНОСТ 5

ТЕМА НА УРОКА: Ензими на бактерии. Изследване на ензимната активност на микроорганизмите. Бактериално дишане. Методи за култивиране и изолиране на чиста култура от анаероби.

УЧЕБНА ЦЕЛ: Запознайте се с бактериалните ензими.

Да изучава методите за определяне на ензимната активност на микроорганизмите. Научете за бактериалното дишане. Изучаване на методите за култивиране и изолиране на чиста анаеробна култура.

ЦЕЛИ НА УРОКА:

1. Запознайте се с бактериалните ензими.

Да изучава методите за определяне на ензимната активност на микроорганизмите.

3. Запознайте се с процесите на дишане на бактериите.

4. Да се изследват методите за култивиране и изолиране на чиста култура от анаероби.

бактериални ензими

Всички биохимични процеси в клетката на микроорганизмите, свързани с метаболизма, растежа и размножаването, се извършват с участието на ензими (ензими).

Ензимите се синтезират от самата микробна клетка и имат сложна структура. Те са или само протеин с високо молекулно тегло (трипсин, пепсин и др.), или се състоят от протеин (апоензим), свързан с кофактор (коензим). Коензимът може да бъде нискомолекулно неорганично (метал) или органично вещество.

Класификацията на ензимите се основава на видовете реакции, които те катализират.

Всички ензими са разделени на шест класа:

1). Оксидоредуктаза- Ензими за пренос на електрони. Тези ензими катализират редокс реакциите. Те включват дехидрогенази (NAD, NADP, FAD), каталаза, цитохроми.

Трансферази- ензими за пренос на групи между молекули от едно съединение към друго. Те включват ацетилтрансфераза, фосфотрансфераза, аминотрансфераза.

3). Хидролази- ензими за пренос на функционални групи с участието на вода. Този клас ензими включва пептидни хидролази, глюкозидаза, амилази, естерази, липаза, фосфатаза.

4). Лиаза- ензими, които разцепват или добавят различни съединения с двойна връзка без участието на вода.

Тези ензими включват пируват декарбоксилаза и алдолаза.

5). Изомерази- ензими, които пренасят групи в молекулите с образуването на изомерни форми. Тези ензими включват триизофосфат изомераза, глюкозо фосфат изомераза.

Лигази (синтетази)- ензими, които комбинират две молекули с едновременно разрушаване на фосфатни връзки, използвайки енергията на АТФ. Лигазите включват ензими, които катализират синтеза на сложни органични вещества от прости съединения (аспарагин синтетаза, кокарбоксилази).

Ензимната активност се измерва в международни единици (ME). 1 IU съответства на количеството ензими, което превръща един микромол субстрат за 1 минута при стандартни условия.

Бактериите се делят на ендоензими и екзоензими.

Ендоензимиса вътре в бактериалната клетка, катализират вътреклетъчните метаболитни процеси. Екзоензимисе отделят във външната среда и изпълняват функцията на разделяне на сложни хранителни вещества.

Ензими на агресията.Патогенните бактерии имат специална група екзоензими, т.нар ензими на агресията. Те изпълняват функциите за улесняване на проникването и разпространението на бактерии в тъканите на тялото на гостоприемника и отслабване на неговите защитни свойства.

Агресивните ензими включват: хиалуронидаза, невраминидаза, колагеназа, протеази, фибринолизин, хемолизин, левкоцидин.

Конститутивни и индуцируеми ензими.Ензимите, които се синтезират от клетката с постоянна скорост, независимо от наличието на субстрат в околната среда, се наричат конститутивен. индуцируем(адаптивни) ензими се образуват само в присъствието на съответния субстрат в околната среда.

Например ензим бета-галактозидазазапочва да се синтезира едва когато въглехидратната лактоза се добави към хранителната среда, която този ензим разгражда до глюкоза и галактоза.

Методи за определяне на ензимната активност на микробите

Задължително условие за идентифициране на изолирана чиста култура от бактерии е определянето на ензимната активност по отношение на въглехидрати и протеини (биохимичен "паспорт" на вида).

За идентифициране на ензими, които разграждат въглехидратите (захаролитични ензими)използвайте диференциалната диагностична среда на Giss.

Средата на Hiss съдържа пептонна вода, pH индикатор, поплавък за улавяне на газ и един от въглехидратите (глюкоза, лактоза, малтоза, манитол, захароза, нишесте и др.). Ако бактериите разграждат въглехидрата, се образува киселина и цветът на средата се променя поради наличния в нея pH индикатор. Повечето патогенни бактерии разграждат въглехидратите, за да образуват само киселини; някои видове ферментират въглехидрати, за да произведат киселина и газ (CO2).

В този случай цветът на средата се променя и в поплавъка се появява газов мехур.

Протеолитична активност на бактериите.Индикатори за дълбоко разцепване на протеини са образуване на индол, амоняк, сероводород.За да се идентифицират тези газообразни вещества, чисти култури от бактерии се инокулират върху месно-пептонен бульон или пептонна вода в епруветки със специални хартиени индикатори.

При наличие на продукти на разцепване цветът на съответния индикатор се променя.

Протеолитичната активност на бактериите също се определя чрез инокулация на чиста култура с инжектиране в колона от желатин от наличието и естеството на разреждането на средата, например под формата на обърнато коледно дърво, пирон, фуния и др.

енергиен метаболизъм

Това е набор от биохимични реакции, резултатът от които е образуването (натрупване на енергия) и разделяне (консумация на енергия) на макроергични връзки в молекулите на АТФ.

В бактериите АТФ може да се синтезира в резултат на процеси на ферментация и дишане.

Ферментация.По-стар, неефективен начин за генериране на енергия, при който 2 молекули АТФ се образуват в резултат на разграждането на молекула глюкоза. Крайните продукти на ферментацията са CO2, вода, алкохоли и органични киселини.

Процесът протича без участието на кислород.

дишаненаречен процес на окислително фосфорилиране на въглехидрати с образуването на ATP, CO2 и водни молекули. При разпадането на една молекула глюкоза се освобождават 12 електрона, които преминават през веригата от дихателни ензими, давайки енергия за синтеза на 36 молекули АТФ. Освобождаването на дихателната верига от електрони се осъществява от вещества, наречени акцептори на електрони.

Тези вещества включват кислород, сулфати, нитрати, карбонати. Ако крайният акцептор на електрони е молекулярен кислород, се нарича дишане аеробика. В случай на окончателно приемане на електрони от други съединения се нарича дишане анаеробни.

Според вида на дишането бактериите се класифицират в четири основни групи:

1. Задължителни (строги) аеробирастат със свободен достъп до кислород (причинителят на туберкулозата).

микроаерофилирастат при ниска (до 1%) концентрация на кислород и повишена концентрация на въглероден диоксид (Hemophilus influenzae).

Факултативни анаеробиможе да расте както в присъствието на кислород, така и при анаеробни условия (Е. coli).

4. Задължителни (строги) анаеробимогат да растат само при пълна липса на кислород в околната среда (причинители на тетанус, ботулизъм, газова гангрена).

Прочетете също:

Изолиране на чисти култури от микроорганизми

Чистата култура е култура, която съдържа микроорганизми от един вид. Изолирането на чисти бактериални култури е задължителен етап от бактериологичното изследване при лабораторна диагностика на инфекциозни заболявания, при изследване на микробно замърсяване на различни обекти на околната среда и като цяло при всяка работа с микроорганизми.

Изследваният материал (гной, храчки, изпражнения, кръв и други материали от пациенти; вода, почва, въздух, храна, животински и човешки трупове, вектори) обикновено съдържа асоциации на микроби.

Изолирането на чиста култура позволява да се изследват морфологични, културни, биохимични, антигенни и други характеристики, чиято съвкупност определя вида и вида на патогена, т.е. той се идентифицира.

За изолиране на чисти култури от микроорганизми се използват методи, които могат да бъдат разделени на няколко групи.

Метод на Пастьор- последователно разреждане на тестовия материал в течна хранителна среда до концентрация една клетка на обем (има историческо значение).

2. Метод на Кох ("плоско окабеляване")- последователно разреждане на тестовия материал в разтопен агар (температура 48-500C), последвано от изливане в панички на Петри, където агарът се втвърдява.

Инокулациите се правят, като правило, от последните три или четири разреждания, където има малко бактерии и в бъдеще, с растеж върху петриеви панички, се появяват изолирани колонии, образувани от една оригинална клетка-майка. От изолирани колонии в дълбочината на агара се получава чиста бактериална култура чрез субкултура върху прясна среда.

Метод на Шукевич- използва се за получаване на чиста култура на Proteus и други микроорганизми с "пълзящ" растеж. Инокулацията на тестовия материал се извършва в кондензационна вода в основата на наклонения агар. Подвижните микроби (Proteus) могат да се издигнат нагоре по наклонения агар, неподвижните форми остават да растат на дъното на мястото на инокулация.

Чрез повторно засяване на горните ръбове на културата може да се получи чиста култура.

4. Метод на Дригалски- се използва широко в бактериологичната практика, докато тестовият материал се разрежда в епруветка със стерилен физиологичен разтвор или бульон.

Една капка от материала се добавя към първата чаша и се разнася върху повърхността на средата със стерилна стъклена шпатула. След това със същата шпатула (без да се обгаря в пламъка на горелката) се прави същото засяване във втората и третата чаша. С всяко засяване на бактерии върху шпатулата има все по-малко и при засяване на третата чаша бактериите ще се разпределят по повърхността на хранителната среда отделно една от друга.

След 1-7 дни престой на съдовете в термостат (в зависимост от скоростта на растеж на микроорганизмите), на третото блюдо всяка бактерия дава клонинг от клетки, образувайки изолирана колония, която се субкултивира върху наклонен агар, за да се натрупа чиста култура.

5. Метод на Вайнберг.Особени трудности възникват при изолирането на чисти култури от облигатни анаероби.

Ако контактът с молекулярен кислород не причини незабавно клетъчна смърт, тогава засяването се извършва по метода на Дригалски, но след това чашите незабавно се поставят в анаеростат. По-често се използва обаче методът на размножаване. Същността му се състои в това, че разреждането на тестовия материал се извършва в разтопена и охладена до 45-500C агар хранителна среда. Правят се 6-10 последователни разреждания, след което средата в епруветките бързо се охлажда и повърхността се покрива със слой от смес от парафин и вазелиново масло, за да се предотврати проникването на въздух в дебелината на хранителната среда.

Понякога хранителната среда, след инокулация и смесване, се прехвърля в стерилни епруветки на Burri или капилярни пипети на Pasteur, чиито краища са запечатани. При успешно разреждане в епруветки, епруветки на Бури, пипети на Пастьор растат изолирани колонии от анаероби.

За да могат изолираните колонии да бъдат ясно видими, се използват избистрени хранителни среди. За да се извлекат изолирани анаеробни колонии, епруветката се нагрява леко чрез въртене над пламъка, докато агарът, който е в съседство със стените, се разтопява и съдържанието на епруветката под формата на колона от агар се плъзга в стерилна петриева паничка.

Агарната колона се срязва със стерилна пинсета и колониите се отстраняват с примка. Екстрахираните колонии се поставят в течна среда, благоприятна за развитието на изолирани микроорганизми (например среда на Kitt-Tarozzi). Агарната среда се изчиства от епруветката на Burri чрез преминаване на газа през памучен тампон.

6. Метод Hungate- когато искат да получат изолирани колонии от бактерии с особено висока чувствителност към кислород (стриктни аероби), използват метода на въртящата се епруветка Hungate.

За да направите това, разтопената агарна среда се инокулира с бактерии при постоянен ток през епруветка с инертен газ, освободен от кислородни примеси. След това епруветката се затваря с гумена запушалка и се поставя хоризонтално в скоба, която върти епруветката, докато средата се разпределя равномерно по стените на епруветката и се втвърдява в тънък слой. Използването на тънък слой в епруветка, пълна с газова смес, позволява получаването на изолирани колонии, които са ясно видими с просто око.

Изолиране на отделни клетки с микроманипулатор. Микроманипулаторът е устройство, което позволява една клетка да бъде отстранена от суспензия с помощта на специална микропипета или микропримка. Тази операция се контролира под микроскоп. На стола на микроскопа се монтира мокра камера, в която се поставя препаратът "висяща капка".

В държачите на операционни стойки са фиксирани микропипети (microloops), чието движение в зрителното поле на микроскопа се извършва с микронна точност благодарение на система от винтове и лостове.

Изследователят, гледайки през микроскоп, извлича отделни клетки с микропипети и ги прехвърля в епруветки със стерилна течна среда, за да получи клетъчен клонинг.

Предишен17181920212223242526272829303132Следващ

ВИЖ ПОВЕЧЕ:

Методи за изолиране на чисти култури от аеробни бактерии

а) Метод на Пастьор– има историческо значение, осигурява последователно разреждане на изпитвания материал в течна хранителна среда чрез метода на валцуване

б) Метод на Кох- метод на оформление на плочи - базира се на последователно разреждане на тестовия материал с месо-пептонен агар, последвано от изливане на епруветки с разреден материал в петриеви панички

в) Метод на Дригалски- при сеитба на обилно осеян с микрофлора, използвайте 2-3 чаши за последователна сеитба с шпатула.

G) Примкова сеитба с успоредни удари.

биологични методивъз основа на биологичните свойства на патогените.

а) Биологичен- инфекция на силно чувствителни животни, при които микробите се размножават бързо и се натрупват.

В някои случаи този метод е единственият, който позволява изолиране на културата на патогена от болен човек (например с туларемия), в други случаи е по-чувствителен (например изолиране на пневмокок при бели мишки или причинителя на туберкулоза при морски свинчета).

б) химически– въз основа на киселинната устойчивост на микобактериите. За да освободите материала от съпътстващата флора, то
обработени с киселинен разтвор.

Ще растат само туберкулозни бацили, тъй като устойчивите на киселина микроби се убиват от киселината.

в) физичен методвъз основа на устойчивостта на спорите към топлина. За изолиране на култури от спорообразуващи бактерии от
смеси, материалът се нагрява при 80°C и се инокулира върху хранителна среда. Само споровите бактерии ще растат, защото техните спори са останали живи и са дали растеж.

G) Методът на Шчукевич- въз основа на високата мобилност на вулгарния протей, способен на пълзящ растеж.

Методът за прехвърляне от колонии към наклонен агар и BCH:

а) Прехвърляне от колонии към наклонен агар

Капакът на чашата се отваря леко, с калцинирана охладена примка се отстранява част от отделна колония, отваря се епруветка със стерилен наклонен агар, като се държи в лявата ръка в наклонено положение, така че повърхността на среда може да се наблюдава.

Примката с културата се прехвърля в епруветката, без да докосва стените, разтрива се върху хранителната среда, плъзгайки се по повърхността от единия край на епруветката до другия, повдигайки ударите до върха на средата - засяване с удар. Епруветката се затваря и, без да се пуска, се подписва името на посевения микроб и датата на засяване.

б) Прехвърляне от колонията в месно-пептонен бульон

Техниката на повторно засяване върху MPB е основно същата като при сеитба върху плътна среда.

При сеитба върху BCH примката с материала върху нея се потапя в средата. Ако материалът е вискозен и не се отстранява от примката, той се втрива в стената на съда и след това се измива с течна среда. Течен материал, събран със стерилна пастьорска или градуирана пипета, се излива в хранителна среда.

В резултат на самостоятелна работа студентът трябва да знае:

Методи за изолиране на чиста култура от микроорганизми

2. Методи за култивиране на микроорганизми

Умейте да:

1. Умения за спазване на правилата за противоепидемичен режим и предпазни мерки

Дезинфекцирайте материала, дезинфекцирайте ръцете

3. Пригответе препарати от бактериални колонии

4. Микроскопирайте колониите

5. Микроорганизми, оцветени по Грам

ДЕЙНОСТ 8

ТЕМА.

Методи за изолиране на чисти култури (продължение). Ензимна активност на бактериите и методи за нейното изследване.

Метод на Пастьор (метод на ограничаване на разрежданията).Състои се в това, че се правят редица последователни разреждания на изследвания материал в течна хранителна среда. За целта капка инокулум се поставя в епруветка със стерилна течна среда, от която една капка се прехвърля в следващата епруветка и така се инокулират до 8-10 епруветки. С всяко разреждане броят на микробните клетки, влизащи в средата, ще намалява и е възможно да се получи такова разреждане, при което в цялата епруветка със средата ще има само една микробна клетка, от която ще се получи чиста култура на микроорганизма. ще се развие. Тъй като микробите растат дифузно в течна среда, т.е. лесно се разпространяват в околната среда, трудно е да се изолира една микробна клетка от друга. По този начин методът на Пастьор не винаги осигурява чиста култура. Ето защо в момента този метод се използва главно за предварително намаляване на концентрацията на микроорганизми в материала преди инокулирането му в плътна среда за получаване на изолирани колонии.

Метод на Кох (метод на дълбоко засяване).Тестовият материал се въвежда с бактериологична бримка или пипета на Пастьор в епруветка с разтопена плътна хранителна среда. Разбъркайте равномерно съдържанието на епруветката, като я въртите между дланите. Капка от разредения материал се прехвърля във втората епруветка, от втората в третата и т.н. Съдържанието на всяка епруветка, като се започне от първата, се излива в стерилни петриеви панички. След втвърдяване на средата в чашите те се поставят в термостат за култивиране.

За да се изолират анаеробни микроорганизми по метода на Кох, е необходимо да се ограничи достъпът на кислород до културата. За тази цел повърхността на дълбокото посяване в петриево блюдо се запълва със стерилна смес от парафин и вазелин (1:1). Можете също така да оставите инокулума, напълно смесен с агарната среда, директно в епруветката. В същото време памучната тапа се заменя с гумена или повърхността на агара се излива със смес от парафин и вазелиново масло. За да се извлекат порасналите колонии от анаеробни микроорганизми, епруветките се нагряват леко чрез бързо въртене върху пламък на горелка. Агарът, съседен на стените, се разтопява и колоната лесно се плъзга в подготвеното петриево блюдо. След това колоната с агар се нарязва със стерилен скалпел, колониите се отстраняват със стерилна примка или стерилен капилярен разрез и се прехвърлят в течна среда.

Метод на Дригалскисе основава на механичното отделяне на микробни клетки върху повърхността на плътна хранителна среда в петриеви панички. Всяка микробна клетка, фиксирайки се на определено място, започва да се размножава, образувайки колония.

За сеитба по метода на Дригалски се използват няколко петриеви панички, пълни с плътна хранителна среда. Капка от тестовия материал се поставя върху повърхността на средата. След това с помощта на стерилна шпатула тази капка се разпределя върху цялата хранителна среда (засяване с морава).

За да спестите среда и прибори, можете да използвате една чиния, като я разделите на сектори и да ги инокулирате последователно с удар (метод на изчерпване на удара). За да направите това, материалът се взема с примка и с него се начертават поредица от успоредни щрихи, първо върху повърхността на първия сектор, а след това всички останали сектори се засяват, като клетките остават върху примката. С всеки следващ удар броят на засадените клетки намалява.

Метод за изолиране на чисти култури с помощта на химикалиизползвани при изолирането на култури от микроорганизми, устойчиви на определени химикали. Например, този метод може да се използва за изолиране на чиста култура от Mycobacterium tuberculosis, която е устойчива на киселини, основи и алкохол. В този случай тестовият материал преди сеитба се излива с 15% разтвор на киселина или антиформин и се държи в термостат за 3-4 часа. След излагане на киселина или основа, клетките на туберкулозния бацил остават живи и всички други микроорганизми, съдържащи се в тестовия материал, умират. След киселинна или алкална неутрализация обработеният материал се засява върху твърда среда и се получават изолирани колонии от причинителя на туберкулозата.

широко използвани за определяне на броя на жизнеспособните микроорганизми в почвата и други естествени субстрати. Приложението му позволява не само да се вземе предвид броят на микроорганизмите, но и да се оцени тяхното разнообразие по морфология на колониите.

Почвените проби се вземат със стерилна лъжица, изследването се извършва в деня на вземане на пробите. Същността на метода се състои в засяването на изследваната почвена проба върху плътна среда в петриеви панички и последващото преброяване на порасналите колонии. Смята се, че всяка колония е резултат от размножаването на една клетка. Работата се извършва на три етапа: подготовка на разреждания, засяване в чаши, преброяване на порасналите колонии.

Инокулацията се извършва от разреждания на суспензията в зависимост от очаквания брой микроорганизми в тестовия субстрат. Разрежданията се правят в стерилна чешмяна вода или изотоничен разтвор на натриев хлорид. По време на експеримента е използван постоянен фактор на разреждане. Най-често се правят десетични разреждания.

Проба от анализираната почва (1-10 g) се поставя в колба със 100 ml стерилна вода и се разклаща. След това прехвърлете със стерилна пипета 1 ml от изследвания материал в епруветка с 9 ml стерилна вода. Ако тестовият материал вече е бил разреден 100 пъти, се получава разреждане 1:1000. Суспензията от това разреждане се смесва старателно, като се поема в пипетата и се освобождава получената суспензия от нея. След това със същата пипета вземете 1 ml от полученото разреждане и го прехвърлете във втората епруветка - получава се разреждане 1: 10 000. Следващите разреждания се приготвят по същия начин. Степента на разреждане се определя от очаквания брой микроорганизми в пробата: броят на разрежданията е толкова по-голям, колкото повече микроорганизми има в оригиналния субстрат.

Посяването се извършва върху агарова среда в петриеви панички. Месо-пептонен или рибно-пептонен агар (MPA, RPA) се използва за определяне на общия брой микроорганизми, пивна агар (SA) се използва за определяне на съдържанието на гъбички в почвата, подходящи хранителни среди се използват за определяне на броя на микроорганизмите. различни физиологични групи и санитарно показателни микроорганизми. Разтопената на водна баня агаризирана среда се налива в стерилни петриеви панички по 20-30 ml всяка. Плаките се оставят на хоризонтална повърхност, докато агарът се втвърди. Със стерилна пипета определен обем (обикновено 0,1-0,5 ml) от подходящото разреждане, предварително добре разбъркано, се нанася върху повърхността на агаровата плака в петриево блюдо. Този обем се разпределя върху повърхността на средата със стерилна шпатула. След това тази шпатула се извършва по цялата повърхност на средата във втората и третата чаша, където не е въведен инокулумът (метод на изчерпване на инокулацията).

От всяко разреждане се правят 4-6 успоредни сеитби. При паралелни посеви с едно и също разреждане могат да се използват една стерилна пипета и една шпатула. Чаши с инокулирана среда се поставят в термостат, настроен на температура, благоприятна за развитието на организмите, които се откриват. Бактериите се преброяват по време на култивиране при температура 30 ° C след три дни, при стайна температура - след седем дни. Преброяване на дрожди и гъбички - при стайна температура след 310 дни (при температура 25 ° C периодът на наблюдение на гъбичките може да бъде намален до 2-3 дни).

Броят на колониите, пораснали в петриево блюдо, се преброява и преизчислява за 1 г. Резултатите от паралелните посеви се обобщават и се изчислява средният брой на колониите, пораснали при посяване от това разреждане. Колониите се преброяват без отваряне на петриеви панички.

Точността на метода зависи от броя на преброените колонии, а не от броя на повторенията. Най-доброто размножаване се счита, когато се засява върху гъста хранителна среда, от 50 до 100 колонии. Ако броят на израсналите колонии е по-малък от 10, тогава тези резултати се отхвърлят и не се използват за изчисляване на броя на клетките в оригиналния субстрат. Желателно е общият брой на преброените колонии, когато се засяват от това разреждане, да бъде поне 300.

Броят на микроорганизмите в 1 g (1 ml) от изходния субстрат се изчислява по формулата:

T = a x b x c / d,

където T е броят на микроорганизмите в 1 g, a е броят на преброените колонии, b е разреждането, от което е направена инокулацията, c - 10 (ако 0,1 ml суспензия е инокулирана върху блюдата), d е масата на взетия за анализ субстрат (почва).

Статистическата обработка на резултатите е възможна само с минимална техническа грешка, така че методът на пластините изисква голяма чистота и точност при всички операции. Необходимо е внимателно да се предпазят пипетите и средата от замърсяване с чужди микроорганизми, тъй като случайно въведена клетка може да надцени броя на микроорганизмите в тестовата суспензия. Приготвянето на разрежданията и засяването трябва да се извършва в кутия.

Описаният метод е приложим за отчитане на аероби и факултативни анаероби. За да се отчетат стриктните анаероби, петриевите панички се поставят при анаеробни условия след инокулацията.

Екологични методи за изследване на почвените микроорганизми

Методът на Кох се използва за определяне на общия брой бактерии. В празно стерилно петриево блюдо изсипете 1 ml от тестовия материал от подходящото разреждане и изсипете 10 - 15 ml разтопен и охладен до 45 0 C MPA, смесете с течността, като въртите чашата върху повърхността на масата.

След култивирането на културите се преброяват колониите, израснали на повърхността и в дълбочина на агара. За да направите това, чашата се поставя с главата надолу върху черен фон, всяка преброена колония се маркира с маркер върху стъклото. Оценявайте само тези ястия, които са нараснали от 30 до 300 колонии. Ако върху съда са израснали повече от 300 колонии и анализът не може да бъде повторен, тогава колониите могат да бъдат преброени при силно странично осветление с помощта на лупа и специална плоча с решетка.

Броят на колониите се преброява в най-малко 20 квадрата от 1 cm 2 на различни места в съда. Изчислява се средният брой колонии в 1 cm 2, който се умножава по площта на съда.

При преброяване на колонии може да се използва специално устройство за броене на бактерии PSB.

Резултатът от преброяването на колониите във всяка чиния е броят на бактериите на 1 ml (cm 3) или 1 g от тестовия материал, като се вземе предвид разреждането. За крайния брой бактерии се взема средноаритметичното от резултатите от преброяването на колониите върху петрита с инокулация на две съседни разреждания.

Пример:отглеждане 10 -1 - 250 колонии, отглеждане 10 -2 - 23 колонии.

Общ брой бактерии = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu / ml = 2,4 x 10 2 cfu / ml (единици, образуващи колонии на 1 ml).

Резултатът от изследването може да се закръгли до 2 - 3 значещи цифри.

Метод на титруване.

Използва се за определяне на броя на PSD.

1-ви етап:хомогенизиране на материала. При необходимост приготвяне на суспензия за преминаване на микроорганизмите в течна фаза.

2-ри етап:подготовка на серия от разреждания.

3-ти етап:инокулация на избрани обеми от тестовия материал (100, 10, 1 ml) и неговите разреждания от 1 ml в течна хранителна среда. За да се подобри точността на метода, всеки обем може да се засява паралелно в няколко порции от хранителната среда (дву-, три-, петредова сеитба). Оптимално е трикратно повторение (достатъчна надеждност при относително ниска цена).

4-ти етап:като се вземе предвид наличието на растеж върху течна хранителна среда и засяване от положителни обеми върху твърда хранителна среда.

5-ти етап:идентификация на микроорганизми, отглеждани върху твърда хранителна среда. В същото време се вземат предвид културните свойства и, ако е необходимо, се извършват допълнителни изследвания (изследване на тинкториални, морфологични, биохимични и серологични свойства).

Ако се използва метод с един ред, резултатът обикновено се изразява като титър на целевия микроорганизъм, който се приема като най-малкия обем (най-високото разреждане), в който все още е открит.

Ако е използван многоредов метод, резултатите се записват с помощта на специални таблици, които позволяват, въз основа на комбинацията от положителни обеми, които са породили, да се определи титърът, индексът (MP).

Въведение в практиката на анилинови багрила

Използването на имерсионна система и кондензатор в микроскопията

Разработване на метод за култивиране върху биологични течности и плътни хранителни среди

Развитие на метода на фракционната подсевка

Откриване на причинителя на антракс, холера, туберкулоза и туберкулин

Приблизително през същите години се формира и успешно работи немската школа на микробиолозите, ръководена от РОБЕРТ КОХ (1843 - 1910). Кох започва своите изследвания във време, когато ролята на микроорганизмите в етиологията на инфекциозните заболявания е под сериозно съмнение. За доказването му бяха необходими ясни критерии, които бяха формулирани от Кох и влязоха в историята под името „триади на Хенле-Кох“. Същността на триадата беше следната:

1) предполагаемият микробен причинител винаги трябва да се открива само при това заболяване, а не изолиран от други заболявания и от здрави индивиди;

2) патогенът трябва да бъде изолиран в чиста култура;

3) чиста култура от този микроб трябва да причини заболяване при опитни заразени животни с клинична и патологична картина, подобна на заболяването при човека.

Практиката показва, че и трите точки са от относително значение, тъй като далеч не винаги е възможно да се изолира причинителя на болестта в чиста култура и да се причини човешка болест при опитни животни. Освен това са открити патогени при здрави хора, особено след боледуване. Въпреки това, в ранните етапи на развитие и формиране на медицинската микробиология, когато много микроорганизми, които не са свързани с това заболяване, са изолирани от тялото на пациентите, триадата играе важна роля при установяването на истинския причинител на заболяването. Въз основа на концепцията си Кох най-накрая доказа, че микроорганизмът, открит преди това в животни с антракс, отговаря на изискванията на триадата и е истинският причинител на това заболяване. По пътя Кох установява способността на антраксните бактерии да образуват спори.

Ролята на Кох в разработването на основни методи за изследване на микроорганизмите е голяма. Така той въвежда в микробиологичната практика метода за изолиране на чисти бактериални култури върху твърди хранителни среди, първи използва анилинови багрила за оцветяване на микробни клетки и използва потапящи лещи и микрофотография за тяхното микроскопско изследване.

През 1882 г. Кох доказва, че изолираният от него микроорганизъм е причинителят на туберкулозата, която по-късно е наречена бацил на Кох. През 1883 г. Кох и неговите сътрудници изолират причинителя на холерата, vibrio cholerae (vibrio на Koch).

От 1886 г. Кох посвещава цялото си изследване на търсенето на лекарства, ефективни за лечение или профилактика на туберкулоза. В хода на тези изследвания той получава първото противотуберкулозно лекарство - туберкулин, който е екстракт от култура на туберкулозни бактерии. Въпреки че туберкулинът няма лечебен ефект, той успешно се използва за диагностициране на туберкулоза.

Научната работа на Кох получава световно признание и през 1905 г. той получава Нобелова награда за медицина.

Използвайки методите, разработени от Кох, френски и немски бактериолози откриха много бактерии, спирохети и протозои - причинителите на инфекциозни заболявания при хората и животните. Сред тях са причинители на гнойни и раневи инфекции: стафилококи, стрептококи, клостридии на анаеробна инфекция, Escherichia coli и причинители на чревни инфекции (бактерии от коремен тиф и паратиф, бактерии на дизентерия Shiga), причинителят на инфекция на кръвта - спирохета на рецидивираща треска, причинители на респираторни и много други инфекции, включително редица причинени от протозои (плазмодия малария, дизентерийна амеба, лайшмания). Този период се нарича "златен век" на микробиологията.

Ролята на местните учени в развитието на микробиологичната наука (I.I. Мечников, D.I. Ивановски, G.N. Gabrichevsky, S.N. Vinogradsky, V.D. Тимаков, N.F. Gamaleya, L.A. P.F. Zdrodovsky, Z.V. Ermolyeva).

Един от основателите на имунологията е И. И. МЕЧНИКОВ (1845-1916) - създател на фагоцитната или клетъчна теория за имунитета. През 1888 г. Мечников приема поканата на Пастьор и оглавява лабораторията в неговия институт. Но Мечньов не прекъсва тесните връзки с родината си. Той многократно идваше в Русия и много руски лекари работеха в неговата парижка лаборатория. Сред тях са Я. Ю. Бардах, В. А. Барыкин, А. М. Безредка, М. В. Вейнберг, Г. Н. Габричевски, В. И. Л. А. Тарасевич, В. А. Хавкин, Ц. В. Циклинская, Ф. Я. Чистович и други, които имат значителен принос в развитието на вътрешна и световна микробиология, имунология и патология.

Въпреки значителния напредък в областта на създаването на антиинфекциозен имунитет, практически нищо не се знае за механизмите на неговото развитие. Повратна точка беше откриването на I.I. Мечников (1845-1916), направено от него в Месина през 1882 г., когато изучава реакцията на ларва на морска звезда към въвеждането на розов трън в нея. Това беше онзи щастлив случай, когато случайно наблюдение падна върху подготвения ум и накара И.И. Мечников до създаването на учението за фагоцитозата, възпалението и клетъчния имунитет.

През 1892 г. Мечников публикува своите Лекции по сравнителната патология на възпалението, в които като изключителен мислител той разглежда патологичните процеси от гледна точка на еволюционната теория. През 1901 г. се появява новата му книга "Имунитет към инфекциозни болести", която обобщава резултатите от дългогодишни изследвания в областта на имунитета.

Дискусията, която се разгърна между Мечников и неговите привърженици с последователите на хуморалната теория, които виждаха действието на антителата като основа на имунитета, придоби голямо творческо значение. Началото на изследването на антителата е положено от произведенията на П. Ерлих, а след това и на Дж. Борде, извършени през последното десетилетие на 19 век.

Приносът на PAUL EHRLICH (1854-1915) за развитието на имунологията, както и за установяването и развитието на химиотерапията, е безценен. Този учен е първият, който формулира концепциите за активен и пасивен имунитет и е автор на цялостна теория за хуморалния имунитет, която обяснява както произхода на антителата, така и тяхното взаимодействие с антигени. Предсказанието на Ерлих за съществуването на клетъчни рецептори, специфично взаимодействащи с определени групи антигени, е критикувано от много години. Той обаче е възроден през втората половина на 20 век в теорията на Бърнет и на молекулярно ниво получава всеобщо признание.

II Мечников беше един от първите, които разбраха, че хуморалната и фагоцитната теория на имунитета не се изключват взаимно, а само се допълват. През 1908 г. Мечников и Ерлих са удостоени съвместно с Нобелова награда за работата си в областта на имунологията.

Откритията на Ерлих:

1. използване на метиленово синьо при лечението на малария

2. Използване на трипаново червено за лечение на трипанозома

3. Откриване на салварсан (1907)

4. Разработване на метод за определяне на активността на антитоксични серуми и изследване на взаимодействието антиген-антитяло

5. теория на хуморалния имунитет.

Краят на 19 век е белязан от епохалното откриване на царството Вира. Първият представител на това царство е вирусът на тютюневата мозайка, който заразява тютюневите листа, открит на 12 февруари 1892 г. от D.I.IVANOVSKIM, служител на катедрата по ботаника на Св. и П. Фрошем. Тези открития обаче не могат да бъдат оценени по достойнство по това време и остават незабелязани на фона на блестящите успехи на бактериологията.

Ръководителят на Московската бактериологична школа и един от лидерите на руските бактериолози Г. Н. ГАБРИЧЕВСКИ (1860-1907), който през 1895 г. ръководи Бактериологичния институт към Московския университет, открит на частни средства. Работил е в областта на специфичното лечение и профилактика на скарлатина, рецидивираща треска. Неговата стрептококова теория за произхода на скарлатината в крайна сметка спечели общо признание. Габричевски е автор на Ръководството по клинична бактериология за лекари и студенти (1893 г.) и учебника Медицинска бактериология, претърпял четири издания. Г.Н. Габричевски (1860-1907) въвежда серотерапия в Русия, изучава механизмите на имунитета към рецидивираща треска, дифтерия и скарлатина.

Институтът по експериментална медицина става основен център на Перербургската бактериологична школа. За ръководител на бактериологичния отдел е одобрен S.N.VINOGRADSKY, който придоби световна известност с работата си в областта на общата микробиология. С помощта на разработения от него метод на избираемите култури. Виноградски открива серни и железни бактерии, нитрифициращи бактерии - причинители на процеса на нитрификация в почвата. Той основава ролята на микроорганизмите в селското стопанство.

В.Д. Тимаков (1905-1977) е един от основателите на теорията за микоплазмите и L-формите на бактериите, занимава се с генетиката на микроорганизмите, бактериофагията и профилактиката на инфекциозните заболявания.

През 1934 г. V.D. Тимаков е поканен в Туркменския институт по микробиология и епидемиология, където ръководи отдела за производство на ваксини и серуми. Заболеваемостта от чревни инфекции в републиката по това време все още е висока. В.Д. Тимаков защитава докторска дисертация за профилактични средства срещу чревни инфекции. Младият учен провежда и първите си изследвания за изследване на бактериофаги и филтрируеми вируси в Туркменистан.

Под ръководството на V.D. Тимаков, започва създаването на нов раздел от медицинската микробиология, изучаването на L-форми на бактерии и микоплазми. Тази посока беше логично продължение на изследването на филтриращите форми, от които V.D. Тимаков започва своята научна дейност. За серия от изследвания за изясняване на ролята на L-формите на бактериите и семейството на микоплазмата при инфекциозни заболявания, V.D. Тимаков заедно с професор Г.Я. Каган през 1974 г. е удостоен с наградата Ленин.
Една от основните области на научната дейност на V.D. Тимаков е посветен на генетиката на микроорганизмите. В.Д. Тимаков счита за необходимо използването на генетични методи за анализ за решаване на медицински значими микробиологични и епидемиологични проблеми. И в момента посоката на работа по генетиката на бактериите е основната в Института по епидемиология и микробиология. Гамалея. Дейностите на В.Д. Тимакова за реконструкцията на генетиката далеч не се ограничава до провеждането на собствени изследвания. Той направи изключително много за пресъздаване на генетиката в цялата ни страна.
В допълнение към страстта към работата си, Владимир Дмитриевич се отличаваше с бистър ум, разбиране на живота и смелост. Последното качество се проявява напълно в борбата му срещу антинаучните "велики" открития, като тези, които твърдят, че вирусите могат да се превърнат в бактерии.

Изключителният руски микробиолог N.F.GAMALEYA (1859-1949), който още през 1886 г. работи за Пастьор върху бяса, заедно с Мечников и Бардах основават първата бактериологична станция в Русия, където е произведена ваксина срещу бяс и хората са ваксинирани срещу бяс . N.F. Gamaleya е автор на много научни трудове, посветени на бяса, холерата и други проблеми на микробиологията и имунологията.

LA ZILBER (1894-1966) е основател на вирусната теория за произхода на туморите, изолира причинителя на далекоизточния енцефалит, пренасян от кърлежи.

Напредъкът в изследването на туморните антигени вдъхновява Л. А. Зилбър да опита противотуморна ваксинация, която той започва около 1950 г. заедно със З. Л. Байдакова и Р. М. Радзиховская върху два модела: тумор на Браун-Пиърс при зайци и спонтанен рак на гърдата при мишки.

P.F. ЗДРОДОВСКИ (1890-1976) се занимава с проблема с рикетсиозата, маларията, бруцелозата и регулирането на имунитета.

Зинаида Висарионовна ЕРМОЛИЕВА - създателят на първия домашен антибиотик. От всички постижения на научно-техническия прогрес откриването на антибиотиците, и на първо място на пеницилина, несъмнено е от най-голямо значение за запазване здравето на хората и увеличаване на продължителността на живота им. Сред изтъкнатите учени на нашата страна, които са направили голям принос за развитието на тази област на медицината, едно от водещите места с право принадлежи на създателя на първия домашен антибиотик, изключителен микробиолог, талантлив организатор на здравеопазването, добър специалист. известен общественик, прекрасен учител, академик на Академията на медицинските науки на СССР, заслужил учен на RSFSR, лауреат на Държавната награда на СССР Зинаида Висарионовна Ермолиева. Заедно с други учени тя стои в основата на медицинската бактериохимия и изучаването на антибиотиците у нас, беше личност с голям организаторски талант и неизчерпаема енергия, чиято неуморна дейност и изключителни лични качества й спечелиха всеобщо уважение и признание.

Една от важните области на научната дейност на Зинаида Висарионовна е изследването на холерата. Въз основа на задълбочени, всеобхватни изследвания на морфологията и биологията на холера и холероподобни вибриони, ZV Ermolyeva предложи нов метод за диференциална диагноза на тези микроорганизми.

През 1942 г. е публикувана монографията на Z. V. Ermolyeva "Холера", в която са обобщени резултатите от почти 20 години изучаване на холерния вибрион. В тази монография са дадени нови методи за лабораторна диагностика, лечение и профилактика на холера.
Зинаида Висарионовна посвети значителна част от научната си работа на изолирането и изследването на вещества, които имат антибактериален ефект. Първото такова вещество, наречено "лизозим", е изолирано от З. В. Ермолиева заедно с И. С. Буяновская през 1929 г. Както показват резултатите от по-нататъшни изследвания, лизозимът се намира в много тъкани, както животински, така и растителен произход.

През 1960 г. група учени, ръководени от Z. V. Ermolyeva, за първи път в нашата страна получиха антивирусното лекарство интерферон. Това лекарство е използвано за първи път за лечение на тежък грип през 1962 г. и като профилактично средство. В момента лекарството се използва за профилактика на грип и други остри респираторни вирусни инфекции, както и за лечение на редица вирусни заболявания в очната и кожната практика.

Повече от 30 години от живота си (1942-1974) Зинаида Висарионовна посвети на изучаването на антибиотиците.

Името на Z. V. Ermolyeva е неразривно свързано със създаването на първия домашен пеницилин, развитието на науката за антибиотиците и широкото им използване в нашата страна. Голям брой ранени в първия период на Великата отечествена война изискват интензивно разработване и незабавно въвеждане в медицинската практика на високоефективни лекарства за борба с инфекцията на рани. По това време (1942 г.) ZV Ermolyeva и нейните сътрудници от Всесъюзния институт по епидемиология и микробиология откриха активен производител на пеницилин и изолираха първия домашен пеницилин - крустозин. Още през 1943 г. лабораторията започва да подготвя пеницилин за клинични изпитвания.

По-късно под ръководството на Z. V. Ermolyeva бяха създадени и въведени в производство много нови антибиотици и техните лекарствени форми, включително ecmolin, ekmonovocillin, bicillin, streptomycin, tetracycline; комбинирани препарати от антибиотици (дипасфен, ерициклин и др.). Трябва да се подчертае, че Зинаида Висарионовна винаги е участвала активно в организирането на промишленото производство на антибиотици у нас.