Ферменти є білковими каталізаторами біохімічних реакцій, більша частинаяких відсутність ферменту протікала б вкрай повільно. На відміну від хімічних каталізаторів, кожен фермент здатний каталізувати лише дуже невелику кількість реакцій, часто лише одну.

Таким чином, ферменти – це реакційно-специфічні каталізатори. Майже всі біохімічні реакції каталізуються ферментами.

Багато ферментів надають каталітичну дію на субстрати тільки в присутності специфічної термостабільної низькомолекулярної органічної сполуки – коферменту.

У таких випадках холофермент (каталітично активний комплекс) складається з апоферменту (білкова частина) та пов'язаного з ним коферменту (Додаток Н). Кофермент може бути пов'язаним з апоферментом ковалентними та нековалентними зв'язками. Термін «простетична група» стосується ковалентно пов'язаного коферменту. До реакцій, що вимагають присутності коферменту, відносяться: окислювально-відновні, перенесення груп, ізомеризації, а також реакції конденсації (за системою IUB це класи 1, 2, 5, 6). Реакції розщеплення протікають без коферментів (за системою IUB це класи 3 і 4).

^ 4.1 Лабораторна робота«Визначення активності амілази
солоду за методом Вольгемута»

Метод Вольгемуту заснований на визначенні мінімальної кількості ферменту, здатного за певних умов повністю гідролізувати 1 мл 0,1% розчину крохмалю. Амілазна активність солоду виражається кількістю мілілітрів 0,1% розчину крохмалю, яке може бути гідролізовано 1 мл витяжки з солоду при температурі 38 °С протягом 30 хв. У нормі амілазна активність дорівнює від 160 до 320 одиниць активності.

Метод Вольгемута широко використовується у клінічній практиці для визначення амілазної активності крові та сечі, у пивоварінні – для визначення амілазної активності солоду. Різке підвищення амілазної активності у крові та сечі (у 10–30 разів) спостерігається при гострих панкреатитах, пухлинах підшлункової залози.

^ Матеріали та реактиви: витяжка із солоду зернових, розбавлена ​​у 10 разів; 0,1% розчин крохмалю; 0,1% розчин йоду в 0,2% розчині йодиду калію.

Обладнання:штатив із пробірками, піпетки, крапельниці, термостат.

^ Хід роботи.У десять пробірок наливають по 1 мл дистильованої води. У першу пробірку додають 1 мл розведеної 10 разів витяжки, перемішують, 1 мл суміші переносять у другу пробірку. Вміст цієї пробірки знову перемішують і 1 мл переносять до третьої пробірки і так до десятої пробірки. З останньої пробірки відбирають 1 мл та виливають. Таким чином, у кожній наступній пробірці вміст ферменту вдвічі менший, ніж у попередній. Розведення витяжки у десяти пробірках становитиме: 1:10; 1:20; 1:40; 1:80; 1:160; 1:320; 1:640; 1:1280; 1:2560; 1:5120; 1:10240.

Далі у всі пробірки додають по 1 мл води та по 2 мл розчину крохмалю, перемішують і поміщають у термостат при температурі 38 ° С на 30 хв. Після інкубації пробірки охолоджують водопровідною водоюдля припинення дії ферменту додають по дві краплі розчину йоду, добре збовтують і спостерігають за зміною забарвлення. При реакції з йодом рідина забарвлюється жовтий, рожевий і фіолетовий колір.

Зазначивши, за якого розведення стався повний гідролізкрохмалю з мінімальним вмістом ферменту (пробірка з жовтуватим забарвленням вмісту), за кількістю нерозведеної витяжки (А) в даній пробірці розраховують амілазну активність витяжки
(А мл витяжки розщеплює Х мл 0,1% розчину крохмалю).

Наприклад, жовтий колірз'явився у четвертій пробірці, де витяжка розведена у 160 разів. Ця кількість витяжки здатна гідролізувати 2 мл 0,1% розчину крохмалю, а 1 мл нерозведеної витяжки в тих же умовах гідролізує 320 мл: Х = 2×160/1. Отже, амілазна активність дорівнює 320.

^ 4.2 Лабораторна робота «Визначення активності каталази

по Баху»

Метод заснований на визначенні кількості пероксиду водню, що залишився після дії каталази, титруванням на нього розчину KMnO 4 . Реакція протікає за рівнянням

1 мл 0,1 моль/л розчину калію перманганату відповідає 85 мг пероксиду водню.

^ Матеріали та реактиви: препарат каталази (1 г проростків ячмінного солоду розтирають у фарфоровій ступці з 6 мл фосфатного буфера і фільтрують); 10% розчин H 2 SO 4 ; 0,1% розчин пероксиду водню на фосфатному буфері, pH=7,0 (35,0 мл 0,2 моль/л NaH 2 PO 4 в 13,6 мл 0,2 моль/л NaH 2 PO 4); 0,1 моль/л розчин KMnO 4 .

Обладнання:колби ємністю 100 мл, піпетки, бюретки, термостат.

^ Хід роботи.У дві колби вносять по 2 мл препарату каталази, в одну з них (проба) додають 1 мл 10%-ного розчину H 2 SO 4 потім наливають по 2 мл розчину пероксиду водню в кожну колбу, ставлять в термостат на 40 хв при температурі 38 °С. Після закінчення часу інкубації в другу колбу (контроль) додають 1 мл 10% розчину H 2 SO 4 і обидва розчину титрують 0,1 моль/л розчином KMnO 4 до появи стійкого рожевого фарбування від надлишку перманганату калію.

Активність каталази визначають за кількістю розкладеного пероксиду водню (мл) та розраховують за формулою:

,

Де
- Різниця результатів титрування контрольного і досліджуваного зразків 0,001 н розчином KMnO 4 мл;

Q – кількість пероксиду водню (85 мг), що відповідає
1 мл 0,1 моль/л розчину KMnO 4 .

^ 4.3 Лабораторна робота «Кропельний метод
(за Климовським та Родзевичом)»

Амілолітична активність, обумовлена ​​в основному наявністю в препараті α-амілази, характеризує здатність ферменту каталізувати гідроліз крохмалю до продуктів, що не забарвлюються йодом. За наявності в препараті α-амілази та глюкоамілази цим методом визначається сумарна дія всіх амілолітичних ферментів.

За одиницю амілолітичної активності в цьому методі прийнято таку кількість ферменту, що каталізує розщеплення 1 г розчинного крохмалю до продуктів, що не забарвлюються йодом, за 1 годину при температурі 30 ºС в певних умовах. Амілолітичну активність АС виражають числом зазначених одиниць в 1 г препарату, культури або 1 см 3 розчину. Величина АС показує, скільки грамів крохмалю може бути гідролізовано до сполук, що не забарвлюються йодом, 1 г препарату, культури або 1 см 3 розчину за 1 год в умовах визначення. Закінчення реакції контролюють візуально по йодній пробі.

Чутливість методу визначають мінімальною кількістючасу, за який можна візуально вловити зміну забарвлення йоду. Припускають, що швидкість ферментативної реакції прямо пропорційна кількості застосовуваного ферменту і залишається постійною протягом 5 хв до 1 год, тобто реакція підпорядковується закону реакції нульового порядку. Крім того, встановлено вплив величини рН та хімічної природибуфера величину АС. З ацетатним буфером (рН=4,7) величина АС у грибних препаратів у середньому в 1,5 рази вища, ніж при визначенні з фосфатним буфером (рН=6,0). Тому, щодо величини АС грибних культур рекомендується брати ацетатний буфер.

Недоліком методу є нечіткість візуального визначеннязакінчення реакції.

^ Матеріали та реактиви: ацетатний буфер із рН=4,7 для ферментів грибного походження; фосфатний буфер із рН=6,0 для ферментів бактеріального походження; 1% розчин крохмалю (розчин крохмалю, що вживається для аналізу грибних препаратів, повинен мати рН=4,7, для аналізу бактеріальних препаратів – 6,0); розчини йоду. Для приготування основного розчину йоду в стаканчик тарированный з притертою кришкою відважують 4,4 г йодиду калію, 1,4 г металевого йоду, додають близько 2 см 3 дистильованої води. Склянку закривають кришкою, вміст перемішують і після розчинення йоду переводять розчин у мірну колбу об'ємом 100 см 3 з притертою пробкою. Доводять об'єм дистильованою водою до мітки. Вміст колби зберігають у темному прохолодному місці. Основним розчином йоду можна використовувати протягом 30 днів з дня його приготування. Робочий розчин йоду готують із основного розчину. Для цього 20 см 3 основного розчину йоду наливають у мірну колбу місткістю 100 см 3 додають 4,4 г йодиду калію і доводять загальний об'єм розчину до 100 см 3 . Робочий розчин йоду можна вживати протягом шести днів після його приготування.

Обладнання:широкі пробірки, скляні палички, піпетки, склянки об'ємом 50мл, чашки Петрі, термостат.

^ Хід роботи.Для визначення значення АС важливо суворо дотримуватись умов реакції. Для цього попередньо всі розчини - субстрат (1% розчин крохмалю), розчин ферменту і дистильована вода повинні бути нагріті до температури 30 °С.

Субстрат у кількості 25 см 3 (12,5 мл) поміщають у широку пробірку, яку вставлена ​​скляна паличка. 30 см 3 (15 мл) витяжки та 30 см 3 (15 мл) води наливають в окремі пробірки, поміщають у термостат і витримують при температурі 30 ºС протягом
10 хвилин.

Потім широку пробірку до розчину крохмалю, не виймаючи пробірок з термостата, за допомогою піпеток додають від 1 до 25 см 3 вихідного ферментного розчину і відповідну кількість води так, щоб загальний обсяг реакційної суміші був 50 см 3 . Якщо ферментна витяжка малоактивна, можна внести тільки її у кількості 25 см 3 , а воду взагалі не додавати.

Вміст пробірки перемішують паличкою і відмічають час за секундоміром, коли було додано витяжку до розчину крохмалю. Через кожні 60 секунд із пробірки, не виймаючи її з термостата, відбирають паличкою краплю проби. Краплю поміщають на білу порцелянову пластину, з'єднують цю краплю з краплею робочого розчину йоду та спостерігають забарвлення. Реакція розщеплення крохмалю вважається закінченою, коли йод перестає давати зміну забарвлення при з'єднанні з краплею випробуваного розчину протягом перших 10 секунд. Зміна забарвлення чітко видно на межі зіткнення двох крапель – йоду та реакційної суміші.

Час, за який відбувається розщеплення крохмалю до продуктів, що не забарвлюються йодом, має бути в межах від 10 до
20 хвилин.

Якщо час гідролізу менше 10 хв, визначення повторюють, беручи на гідроліз менше витяжки та більше води. Якщо гідроліз не закінчується протягом 20 хв, аналіз також повторюють, беручи на визначення більше ферментної витяжки і менше води. Кількість ферментної витяжки, яку необхідно брати на повторний аналіз, обчислюють з урахуванням отриманого часу гідролізу

Якщо ферментна витяжка має малу чи занадто високу активність, і кількість ферментного розчину від 1 до 25 см 3 не забезпечує тривалості гідролізу крохмалю протягом 10...20 хв, то для аналізу беруть не 25 см 3 розчину крохмалю, а більшу або меншу його кількість, наприклад, 10 або 40 см 3 вносячи відповідну поправку в розрахункову формулу(відповідно 0,1 або 0,4 замість звичайних 0,25).

Величину значення амілолітичної активності АС (од./г) розраховують за такою формулою:

Де 0,25 - кількість крохмалю, яке знаходиться в 25 см 3 1% -ного розчину, г;

60 - коефіцієнт перерахунку на 1 год;

N – кількість ферменту, що бере участь у реакції, г або см 3 (ця величина визначається з урахуванням концентрації вихідної витяжки та подальшого розведення);

T - час, за який відбулося розщеплення крохмалю до продуктів, що не фарбуються йодом, хв.

приклад.Для аналізу взято ферментну витяжку повітряної культури гриба. Вихідний розчин виготовлений з розрахунку 5 г культури в 100 см 3 забуференої води. Відомо, що дана культура дуже активна, тому зроблено додаткове розведення вихідного розчину: 20 см 3 доведено в мірній колбі до 50 см 3 дистильованою водою і звідти аналіз взято 2 см 3 , тобто. отримана така послідовність розведення:

5 г → 100 см 3 → 20 см 3 → 50 см 3 → 2 см 3 .

Для гідролізу 0,25 крохмалю (25 см 3 1 %-ного розчину крохмалю) ферментним розчином останнього розведення (2 см 3) знадобилося 12 хв. Тоді АС повітряно-сухої культури (од./г) складе:

При перерахунку ферментативної активностіслід враховувати не абсолютно суха речовинаферментного препарату, а з урахуванням вологості. Розрахунок слід проводити за такою формулою:

,

Де W – вологість культури чи препарату.

^ 4.4 Лабораторна робота «Метод Вільштеттера
та Вальдшмідта-Лейтца визначення протеолітичної
активності ферментів у модифікації»

Метод заснований на визначенні вільних карбоксильних груп у спиртових розчинах амінокислот та поліпептидів.

Активність (ПС) виражається кількістю міліграмів амінного азоту, що утворюється при гідролізі певної кількості 5% розчину желатину з величиною рН від 7,3 до 7,5 1 г препарату або 1 см 3 ферментного розчину за 1 год при температурі 40 ºС.

За одиницю протеолітичної активності приймається кількість ферменту, що утворює 1 мг амінного азоту за 1 годину за прийнятих умов досвіду.

^ Матеріали та реактиви: 96%-ний етиловий спирт; 1%-ний розчин тимолфталеїну; 0,1 н розчин NaOH; субстрат - 5% розчин желатину; витяжка із аналізованої рослини.

Приготування витяжки для визначення протеолітичної активності: навішування 0,25 г рослинного матеріалу міститься у фарфорову ступку і розтирається протягом 2,5 хв з 2,5 мл фосфатного буфера (рН=7,3), далі маса фільтрується.

Приготування 5% розчину желатину (субстрат): 5 г желатину попередньо замочується в скляній склянці в 15...20 см 3 дистильованої води протягом 20...30 хв. Набряклий білок заливається 20 ... 25 см 3 буферного розчину з температурою від 70 до 80 ° С і ретельно перемішується скляною паличкою. Розчинна частина зливається в мірну колбу об'ємом 100 см 3 до нерозчинної частини додається ще 20 ... 25 см 3 буферного розчину, і отриманий розчин знову переноситься в цю ж колбу. Охолоджений до 40 С розчин желатину доводиться до мітки буферним розчином такої ж температури. Готовий розчин желатину зберігається у холодильнику при температурі від 2 до 5 °С і використовується для аналізу протягом двох діб. Перед аналізом розчин желатину нагрівається до температури 40 С на водяній бані.

Обладнання:конічні колби об'ємом від 200 до 250 мл, мірні колби об'ємом 50 мл, скляні палички, піпетки, бюретки, термостат.

^ Хід роботи.До 10 см 3 5 % розчину желатину з величиною рН від 7,3 до 7,5 доливають 2 см 3 випробуваного ферментного розчину і відразу ж відбирають 1 см 3 реакційної суміші в конічну колбу ємністю від 50 до 100 см 3 , куди попередньо наливають 20 см 3 96%-ного етилового спиртуі 0,2 см 3 1%-ного тимолфталеїну. Пробу титрують 0,1 н розчином NaOH до появи блакитного забарвлення.

Суміш желатину, що залишилася, з ферментним розчином поміщають в термостат з температурою 40 ºС для гідролізу. Через 3 год 1 см 3 реакційної суміші відбирають у другу колбу ємністю від 50 до 100 см 3 , куди попередньо наливають 20 см 3 96%-ного етилового спирту і 0,2 см 3 1%-ного тимолфталеїну. Пробу титрують, як у разі контрольного варіанта.

Розрахунок протеолітичної активності ПС проводять за формулою:

,

Де А - кількість амінного азоту, накопиченого за час досвіду з реакційного середовища, мл;

T – тривалість протеолізу, год;

Р - коефіцієнт, що враховує розведення та перерахунок на 1 г препарату або 1 см 3 рідкого ферментного розчину.

Величину А розраховують за такою формулою:

,

Де а - кількість 0,1 н розчину NaOH, що пішло на титрування 1 см 3 дослідної проби, см 3;

А до – те саме для контрольної проби;

1,4 – коефіцієнт перерахунку кількості 0,1 н розчину лугу у міліграми азоту амінокислот та поліпептидів;

К – поправка до титру лугу.

Визначення активності каталази

(за О.М. Бахом та А.І. Опаріном)

Оксидоредуктази – клас ферментів, що каталізують окисно-відновні реакції. Окислення мономерів, що утворюються в процесі катаболізму полімерів, є складним багатоступеневим процесом.

Окислення речовин у клітинах протікає, в основному, шляхом відщеплення водню (дегідруванням) або відщепленням електронів або шляхом приєднання кисню до молекули сполуки, що окислюється.

Акцепторами водню у дегідрогеназу є НАД + , НАДФ, ФАД і ФМН, у деяких флавінових - кисень (їх називають оксидазами), у гемовмісних (пероксидаз і каталази) - Н 2 О 2 (пероксид водню).

Акцепторами та переносниками електронів є цитохроми, що містять гем (гемопротеїни).

Каталаза (КФ 1.11.1.6) відноситься до гемопротеїнів, каталізує процес руйнування отруйного для клітин пероксиду водню на воду і кисень: 2 H 2 O 2 = 2 H 2 O + O 2 .

Для живої клітини пероксид водню є сильною отрутою, тому всі ферменти, що утворюють і знешкоджують Н2О2, знаходяться в пероксисомах – органелах покритих мембраною. Головними споживачами Н 2 Про 2 є пероксидази (КФ 1.11.1.7.), які окислюють феноли, аміни, деякі гетероциклічні сполуки та ін. пероксиду водню, незатребувані пероксидазами, знешкоджуються каталазою.

Метод визначення активності каталази ґрунтується на визначенні кількості пероксиду водню, розщепленого в процесі інкубації з ферментом. Кількість H 2 O 2 в реакційній суміші визначають титруванням кислому середовищірозчином з концентрацією перманганату калію 0,02 моль/л:

5 H 2 O 2 + 2KMnO 4 + 3H 2 SO 4 = 2MnSO 4 + K 2 SO 4 + 5O 2 +8H 2 O

На підставі наведеного рівняння реакції можна розрахувати, що 1 мл розчину з концентрацією калію перманганату 0,02 моль/л відповідає 1,7 мг (50 мкмоль) пероксиду водню.

ХІД РОБОТИ. 2-3 г сирої картоплі (або іншого свіжого рослинного матеріалу) ретельно розтирають у ступці з кварцовим піском або склом. Для зменшення кислої реакції додають на кінчику скальпеля CaCO 3 до припинення виділення бульбашок 2 . У процесі розтирання до ступки додають невеликими порціями 40-50 мл води. Розтерту масу кількісно переносять у мірну колбу місткістю 100 мл, доводять водою до мітки та перемішують. Суміш залишають стояти 10-15 хв після перемішування фільтрують.

Беруть дві конічні колбочки місткістю 150-200 мл і вносять у них 20 мл отриманого фільтрату. Вміст однієї колби кип'ятять протягом 1 хв. і охолоджують до кімнатної температури (контроль). Інша досвідчена колба містить активний фермент. До вмісту дослідної та контрольної колб доливають по 20 мл води та по 3 мл розчину з масовою часткою H 2 O 2 1%. Вміст ретельно перемішують та залишають при кімнатній температурі на 30 хв. Після закінчення інкубації обидві колби додають по 5 мл розчину з масовою часткою сірчаної кислоти 10 %, перемішують і надлишок H 2 O 2 в кожній колбі відтитрують розчином з концентрацією перманганату калію 0,02 моль/л до утворення рожевого фарбування, що не зникає протягом 1 хв.

Активність каталази виражають у мкмоль пероксиду водню, що розщепився під дією ферменту з розрахунку на 1 г досліджуваного матеріалу (або на 1 мг витяжки з нього) за 1 хв. Обчислення ведуть за такою формулою:

де Х– активність каталази, Е/г;

(а-b)- Різниця між об'ємами розчину з концентрацією перманганату калію 0,02 моль/л, що пішов на контрольну титрування (а)та досвідченою (b)проб, мл;

Т– титр застосованого для титрування розчину перманганату калію;

50 - коефіцієнт перерахунку на мкмоль H 2 O 2;

100 - загальний обсяг приготовленого екстракту;

m - маса взятого для аналізу матеріалу, г;

20 - обсяг фільтрату, взятого для аналізу, мл;

30 - час інкубації, хв.

Принцип визначення, порядок аналізу та результат аналізу записують.

Активність каталази можна визначити і за обсягом кисню, що виділився після додавання до об'єкту досліджуваного H 2 O 2 .

Цей принцип використовують для визначення активності каталази в молоці, що виражається каталазним числом, що представляє собою обсяг кисню (мл), що виділився за 2 години при 25 °З доданих до 15 мл молока 5 мг розчину з масовою часткою H 2 O 2 1 %. Молоко, отримане здорових тварин, виділяє 0,7-2,5 мл кисню, тобто. каталазне число натурального молока становить трохи більше 2,5. Молоко, отримане від хворих тварин (мастит та ін), та молозиво мають підвищені каталажні числа, що досягають до 15.

РЕАКТИВИ. Вода дистильована; кальцій вуглекислий (порошок); розчин із концентрацією перманганату калію 0,02 моль/л; розчини з масовими частками: пероксиду водню 1 % (10 мл розчину з масовою часткою H 2 O 2 30 % розбавити водою до 300 мл), сірчаної кислоти 10 %.

КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ.

1. Основні шляхи окислення субстратів у клітині.

2. Характеристика будови та дії НАД+- та НАДФ-залежних дегідрогеназів.

3. Характеристика будови та дії ФАД-залежних дегідрогеназів.

4. Які ферменти називають оксидазами? Їхні кофактори.

5. Характеристика будови та дії пероксидаз та каталаз.

6. Характеристика будови та дії цитохромів.

7. Хімізм, освіта та шляхи знешкодження пероксиду водню в клітинах.

8. Метод визначення активності каталази.

№	Найменування лабораторних тем	Кількість годин
	Культивування мікроорганізмів поверхневим способом на твердих живильних середовищах.
	Екстрагування ферментів, вирощених поверхневим способом
	Культивування мікроорганізмів глибинним способом
	Визначення активності солодових амілаз.
	Підготовка ферментного препарату та обробка мезги
	Визначення сиропридатності молока сичужною пробою
	Визначення бактеріального обсіменіння молока
	Дослідження впливу теплової обробки на властивості молока.
	РАЗОМ:

Ферменти

Ферменти - біологічні каталізатори білкової природи, що утворюються будь-якою живою клітиною і мають здатність активізувати різні хімічні сполуки.

Механізм дії ферментів, як і всіх інших каталізаторів, пов'язаний із зниженням енергії активації, необхідної для проходження хімічної реакції, Спрямовуючи її обхідним шляхом через проміжні реакції, які вимагають значно меншої енергії активації. Так, реакція АВ А + В у присутності ферменту йде в такий спосіб: АВ+Ф→АВФ; АВФ→А+ВФ; ВФ→В+Ф. →

Усі ферменти поділяють на два великі класи: однокомпонентні та двокомпонентні.

До першого класу відносяться ферменти, що складаються тільки з білка, що має каталітичні властивості, а до другого класу - ферменти, які складаються з білка і пов'язаної з ним небілкової частини, так званої активної групою. Для назви активних груп двокомпонентних ферментів часто використовують термін кофермент або простетична група. У однокомпонентних ферментів роль активних груп виконують певні хімічні угруповання, що входять до білка. Ці угруповання отримали назву активних чи каталітичних центрів.

Однією з властивостей ферментів, що відрізняються від властивостей неорганічних каталізаторів, є їх велика лабільність - залежність від низки впливів: концентрації водневих іонів, температури, окислювально-відновних умов, концентрації деяких сполук (продуктів обміну речовин), іонів металів тощо.

Друга дуже суттєва особливістькаталітичної дії ферментів полягає в тому, що вона суворо специфічна, тобто дія ферментів спрямована на певні хімічні зв'язки.

За характером свого каталітичного впливу ферменти поділяються на шість класів:

1) оксидоредуктази або окислювально-відновлювальні ферменти;

2) трансферази, тобто. ферменти, що каталізують перенесення різних групатомів з однієї молекули в іншу;

3) гідролази, що каталізують гідролітичні реакції;

4) ліази – ферменти, які відщеплюють від субстратів ту чи іншу групу (не шляхом гідролізу) з утворенням подвійного зв'язку або навпаки, приєднують до подвійних зв'язків;

5) ізомерази, тобто. ферменти, що каталізують реакції ізомеризації органічні сполуки;

6) лігази чи синтетази – до цього класу належать ферменти, які каталізують синтетичні реакції.

Кожен із цих класів поділяється на підкласи, а ці останні, у свою чергу, на дрібніші групи.

На всіх етапах переробки зерна в борошно, в процесі його зберігання, а також при приготуванні тіста та випікання хліба, більшою чи меншою мірою проявляється активність гідролітичних та окислювальних ферментів, що істотно впливають на якість продукту.

У зерні ферменти містяться в тканинах зародка, алейронового шару та ендосперму. Це характерні для живих рослинних клітинферменти, що зумовлюють специфічні функції у процесах обміну речовин.

З безлічі ферментів, виявлених у зерні злаків, докладно вивчилися лише ті, які чи впливають на якість продуктів переробки зерна. До них відносяться амілази, протеази, ліпази, ліпоксигенази, поліфенолоксидази та ін. Поряд з цим було встановлено, що деякі ферменти зерна можуть бути добрими індикаторами його фізіологічного стану. Так, каталаза, будучи дуже термолабільною, добре відображає зниження схожості при сушінні насіннєвого зерна, і її активність може бути індикатором для контролю процесу сушіння.

Винятково велике біологічне значенняамілаз при дозріванні та проростанні зерна, а також у ряді технологічних процесівхарчових виробництв, що мають у своїй основі гідролітичні перетворення крохмалю під впливом амілазу зерна.

У зерні злакових культур міститься два специфічні ферменти, що обумовлюють гідроліз крохмалю, а саме:

1) -1,4 - глюкангідролаза або αα-амілаза, що гідролізує α-1,4 - глюканові зв'язки крохмалю та споріднених йому полісахаридів, причому ці зв'язки розриваються безладно;

2) -1,4 – глюканмальтогідролаза або αβ – амілаза, що гідролізує α-1,4 – глюканові зв'язки в полісахаридах, послідовно відщеплюючи залишки мальтози від нередукуючих кінців ланцюгів.

Незважаючи на те, що протеази мають не менш важливе значення для технології, вони вивчені значно менше ніж амілази. Причина цього полягає в тому, що класичні методи вивчення протеаз тваринного походження (ферментів, білки, що гідролізують) виявилися малоефективними при вивченні протеолітичних ферментівзерна злаків. Під впливом протеаз відбуваються розрідження клейковини, що, у свою чергу, призводить до погіршення якості хліба, що випікається.

Ліпази спричиняють гідроліз жирів, тобто. розщеплюють складні ефіригліцерину з утворенням вільних жирних кислот, внаслідок чого підвищується кислотність зерна та борошна.

За участю ліпоксигеназ відбувається окислення ненасичених жирних кислот, утворюються низькомолекулярні карбонільні та карбоксильні сполуки, що мають неприємним запахомі гіркуватим смаком. Цей процес називають прогорканням жирів (муки).

Лабораторна робота №1.

Тема:Культивування мікроорганізмів поверхневим способом на твердих живильних середовищах.

Мета роботи:Вирощування продуцентів різних ферментів на твердих сипучих середовищах і проведення аналізу отриманих культур на активність ферментів, що містяться в них.

Метод поверхневих культур. Поверхневе культивування аеробів проводять на щільному або сипучому середовищі, а також у тонкому шарі рідкого середовища в скляному посуді з широким дном: чашках Петрі, Виноградських колбах, матрацах, кюветах. Засіяні судини вирощують при постійній температурі термостатах або термостатних кімнатах (термокамерах). Мікроорганізми розвиваються на поверхні середовища та використовують кисень безпосередньо з повітря. На рідких середовищах облігатні аероби ростуть у вигляді рясних плівок. Факультативні аероби (анаероби) розвиваються як у товщі рідкого середовища, утворюючи суспензії, пластівці, осад, так і на поверхні у вигляді тонкої плівки. На щільних середовищах мікроорганізми ростуть як окремих колонії чи суцільним газоном. Поверхневе культивування в лабораторних умовшироко застосовують для отримання накопичувальних та чистих культур, їх зберігання, вивчення морфологічних, культуральних та біохімічних ознак мікроорганізмів У промисловості метод поверхневих культур на рідких середовищах використовують для одержання лимонної кислоти, на сипких – для виробництва ферментних препаратів.

1.Підготовка посуду та його стерилізація;

2.Приготування живильного середовища та його стерилізація;

3.Розрахунок кількості води, необхідної для зволоження живильного середовища;

4.Зволоження стерильного живильного середовища, його засів та розкладка в кювети для вирощування;

1.Підготовка посуду до стерилізації. Весь посуд перед стерилізацією повинен бути ретельно вимитий і висушений у сушильній шафі.

Для стерилізації слід загорнути в папір і акуратно зав'язати мотузками такі предмети: кювету, кришку до кювети.

Стерилізацію посуду та води слід проводити в автоклаві при температурі 120ºС протягом 0,5 год.

Стерильний посуд після автокловірування має бути підсушений у сушильній шафі при 105 ºС, оскільки папір при стерилізації злегка зволожується.

2. Приготування та стерилізація живильного середовища. Для кожного мікроорганізму готується своє поживне середовище, що забезпечує біосинтез певних ферментів. Середовище для кожної кювети стерилізується окремо. Приготоване середовище міститься або в пакет, або багатошарову серветку з марлі, або в широку скляну склянку. Для ASP. oryzae, наприклад, використовується такі варіанти поживних середовищ: пшеничних висівок-100,70; солодових паростків-30; бурякового жому-50; вичавки винограду-20; солодових паростків-50; рисового лушпиння-50.

3. Для нормального розвиткумікроскопічного гриба та інтенсивного утворення ферментів необхідно, щоб середовище мало вологість 58-63%.

Розрахунок кількості води, що додається проводиться за такими даними:

Acp - маса живильного середовища з вихідною вологістю;

Ср- маса живильного середовища з необхідною вологістю;

Гср- маса живильного середовища після стерилізації;

Д-кількість води, яку необхідно додати для отримання живильного середовища необхідної вологості.

Лабораторна робота №2

Тема:Екстрагування ферментів, вирощених поверхневим способом

Мета роботи:Вміти культивувати мікроорганізмів поверхневим способом на твердих живильних середовищах.

Метод екстрагування поверхневих культур. Поверхневе культивування аеробів проводять на щільному або сипучому середовищі, а також у тонкому шарі рідкого середовища в скляному посуді з широким дном: чашках Петрі, Виноградських колбах, матрацах, кюветах. Засіяні судини вирощують при постійній температурі термостатах або термостатних кімнатах (термокамерах). Мікроорганізми розвиваються на поверхні середовища і використовують кисне безпосередньо з повітря. На рідких середовищах облігатні аероби ростуть у вигляді рясних плівок. Факультативні аероби розвиваються як у товщі рідкого середовища, утворюючи суспензії, пластівці, осад, так і на поверхні у вигляді тонкої плівки. На щільних середовищах мікроорганізми ростуть як окремих колонії чи суцільним газоном. Поверхневе культивування в лабораторних умовах широко застосовують для одержання накопичувальних та чистих культур, їх зберігання, вивчення морфологічних, культуральних та біохімічних ознак мікроорганізмів. У промисловості метод поверхневих культур на рідких середовищах використовують для отримання лимонної кислоти, на сипучих для виробництва ферментних препаратів.

У цій лабораторній роботі найзручніше використовувати мікроскопічні гриби або дріжджоподібні мікроорганізми, наприклад, такі як Asp niger. Rh. Delemar та ін.

Лабораторна робота №3

Тема:Культивування мікроорганізмів у глибинний спосіб.

Мета роботи:Вміти культивувати мікроорганізми глибинним способом.

Глибинне культивування. Глибинне культивування мікроорганізмів може бути періодичним та безперервним. При періодичному процесі весь обсяг живильного середовища засівають посівним матеріалом і вирощування ведуть в оптимальних умовах певний проміжок часу, доки не накопичиться потрібна кількістьбіомаси або цільового продукту. Для забезпечення зростання аеробних культур у глибоких шарах рідини необхідне надходження кисню. Оскільки мікробні клітини здатні використовувати лише розчинений кисень, а розчинність його невелика (4-7 мг/г)

Простим та доступним способомперіодичного глибинного культивування є вирощування аеробних культур у суспендованому стані в рідкому середовищі, розлитому в невеликих обсягах у пробірки та колби.

Безперервне глибинне культивування ведуть у лабораторних ферментаторах. Процес безперервного вирощування ферментаторі здійснюється за типом хемостата або турбідостата.

Метою цієї роботи є вирощування продуцентів різних ферментів на рідких живильних середовищах глибинним способом та аналіз одержуваних культур мікроорганізмів на вміст у них певних ферментів.

Як у першій лабораторній роботі необхідно отримати посівний матеріал, який готують, вирощуючи продуцент в кілька пасажів на агаризованих середовищах в пробірках або матрацах.

У лабораторній роботі студент готує 0,7 дм 3 живильного середовища. Спочатку на технічних терезах зважується склянка, а потім у склянку відважуються всі необхідні компоненти середовища. Рідкі компоненти середовища відмірюються за обсягом.

Солі розчиняються без особливих пересторог. Крохмаль або борошно змішуються у співвідношенні 1:10 с холодною водоюі заварюються на киплячій водяній бані.

Варіанти поживних середовищ для культивування мікроорганізмів-продуцентів ферментів.

Таблиця 1

Компоненти живильного середовища	Варіанти поживних середовищ та вміст компонентів, %
Asp. Oryzae	0,3
Кукурудзяний екстракт	0,3	0,4	2,0
Соєве борошно	0,5	4,0	2,0
Кукурудзяна мука	2,0	-	0,5
Кормові дріжджі	-	-	0,2
Карбонат кальцію	-	0,1	0,2
Ash. bitatаe	1,0
Фільтрат поліспиртової барди	98,3	96,8	-
Кукурудзяний крохмаль	1,5	-	0,2
Технічний магнезит	0,2	0,2	1,5
Житнє борошно	-	2,5	1,0
Кукурудзяний екстракт	0,2	0,5	1,0

Для кожного варіанту беруть по чотири колби, кожну наливають по 120 см 3 приготованого середовища. Колби закривають ватними пробками, пробки прикривають паперовими щільними ковпаками, щоб вони не зволожувалися при стерилізації. Одночасно з качалочними колбами на стерилізацію ставлять колбу з 50 см 3 середовища для подальшого визначення її рН.

Визначення рН середовища

рН середовища визначають електрометричним методом двічі: до і після стерилізації здійснюється щоразу по три повторності цих визначень і аналізуючи потім достовірність цих результатів.

Засів живильного середовища

Після того, як стерилізація закінчена і автоклав відкритий, піпетки поміщають на 10-15 хв. У гарячу сушильну шафу для підсушування паперу, колби та інші посуди залишають в автоклаві на 10-15 хв. Засів живильного середовища проводять у боксі.

Лабораторна робота №4

Визначення активності каталази

Каталаза відноситься до першого класу ферментів (оксидоредуктаз) і каталізує реакцію розкладання перекису водню на воду та кисень за рівнянням:

Каталаза грає важливу рольу життєдіяльності організмів, оскільки вона руйнує отруйний для клітин перекис водню, що утворюється у процесі дихання.

Кількісне визначення каталази засноване на обліку перекису водню шляхом титрування перманганатом калію. Реакція йде за рівнянням:

2KMnO 4 + 5H 2 O 2 + 4H 2 SO 4 2KHSO→ 4 + 2MnSO 4 + 8H 2 O + 5O 2

Про кількість перекису водню, зруйнованої ферментом, судять по різниці кількостей 0,1 моль/дм 3 розчину КМnО 4 витрачених на титрування в контрольному і робочому дослідах.

Випробуваний матеріал:солод (проросле зерно)

Реактиви:розчин перекису водню ω (H 2 O 2) = 1%

розчин сірчаної кислоти ω (H 2 SO 4) = 10 %

розчин перманганату калію (1/5 KMnO 4) = 0,1 моль/дм 3

5 г випробуваного матеріалу наполягають при кімнатній температурі протягом 30 хвилин зі 100 см 3 води періодично перемішуючи вміст колби. Після настоювання рідину відфільтровують через сухий складчастий фільтр і з прозорого розчину відбирають піпеткою дві порції по 20 см 3 (одна дослідна та одна контрольна) і переносять кожну в окрему конічну колбу на 200 см 3 . Контрольну кип'ятять 3 хв для інактивації ферменту.

До дослідної та контрольної проб додають по 20 см 3 дистильованої води, по 4 см 3 перекису водню, і залишають на 20 хв при кімнатній температурі для дії ферменту. Після закінчення 20 хв до проб додають по 5 см 3 сірчаної кислоти, і перекис водню, що залишився (не розклалася) титрують розчином перманганату калію.

Активність каталази виражають у мікромолях перекису водню, що розклалася під дією ферменту за 1 хв у розрахунку на 1 г досліджуваного матеріалу.

Активність каталази визначають за такою формулою:

де Х – активність каталази;

а - кількість 0,1 моль/дм 3 розчину KMnO 4 витраченого на титрування контрольного розчину, см 3 ;

b - кількість 0,1 моль/дм 3 розчину KMnO 4 витраченого на титрування дослідного розчину, см 3 ;

К – поправка до титру;

100 - загальний обсяг екстракту, см 3;

50 - коефіцієнт перерахунку на мікромолі H 2 O 2;

20 - обсяг ферментного розчину, см 3;

20 - час ферментативної реакції, хв;

Р - навішування випробуваного матеріалу, взятого для аналізу, р.

Лабораторна робота №5.

Колориметричний метод визначення активності α- та β-амілази

Під дією амілаз у рослинах відбувається гідроліз високо-полімерного вуглеводу – крохмалю – з утворенням декстринів та мальтози. У рослинах зустрічаються α- та β-амілази.

Роздільна кількісне визначення активності α- і β-амілаз засноване на їхній різній термостабільності: β-амілаза руйнується нагріванням до 70 ° С, α-амілаза при цьому зберігає свою активність.

Методи визначення активності амілази засновані або на обліку кількості цукру, що утворився при дії ферменту на крохмаль, або на обліку кількості нерозщепленого ферментом крохмалю, яке фотометрично визначають після обробки розчином йоду.

Реактиви:ацетатний буфер із рН 5,5;

розчин хлориду натрію ω (NаСl) = 1%;

розчин крохмалю ω = 10 % (2 г крохмалю, розмішаного в 20 см 3 холодної води, виливають в 80 см 3 окропу, після чого нагрівають на киплячій водяній бані до просвітлення розчину);

розчин соляної кислотиС(HCl) =1 моль/дм 3

розчин соляної кислоти (HCl) =0,1 моль/дм 3

розчин йоду ω = 0,3% у 3%-ному розчині йодистого калію.

Наважку 0,5 - 1 г борошна або проростків розтирають у ступці з невеликою кількістю 1% розчину NaСl і переносять у конічну колбу на 50 см 3 . Співвідношення між наважкою та розчином NaСl 1:10 або 1:20. Вміст колби добре перемішують і залишають стояти при кімнатній температурі протягом 30 хв, періодично струшуючи. Потім фільтрують через щільний складчастий фільтр. При важкому фільтруванні можна поєднувати фільтрування та центрифугування при 4000-5000 об/хв. Прозорий розчин використовують як ферментний препарат.

Для визначення активності α- і β-амілази беруть 4 пробірки (2 дослідні та 2 контрольні) і вносять в них по 3 см 3 ацетатного буфера і 3 см 3 2%-ного розчину крохмалю. Суміш нагрівають на водяній бані або термостаті до 40°С. Потім до дослідних пробірок вносять по 0,2-1,0 см 3 ферментного препарату (залежно від активності амілаз в об'єкті вивчення), а в контрольні - таку ж кількість Н 2 О. Вміст пробірок перемішують і ставлять у термостат при 40 °С на 30 чи 60 хв. Після інкубації в кожну пробірку одразу приливають по 2 см 3 1 н. розчину НСl для припинення дії амілазу.

Для виявлення крохмалю, що не прореагував з ферментом, проводять реакцію з йодом. У мірні колби на 50 см 3 доливають близько 30 см 3 води, 1 см 3 0,1 зв. НСl, 5 крапель 0,3% розчину йоду і вносять з кожної пробірки по 0,5 см 3 суміші. Вміст колб добре перемішують, доводять до мітки водою і колориметрують на фотоелектроколориметр при червоному світлофільтрі або на спектрофотометр при 595 нм в кюветі з робочою довжиною 1 см.

Для визначення активності α-амілази в конічну колбу на 100 см 3 доливають 5 см 3 фільтрату (ферментного препарату), додають на кінчику ножа сухого оцтовокислого кальцію і витримують протягом 15 хв в ультратермостат або на водяній бані при 70°С (допускаються коливання температури трохи більше 0,5°С). Потім вміст колби швидко охолоджують у посудині з холодною водою. При такому прогріванні -амілаза повністю інактивується, а -амілаза зберігає свою активність. Далі визначення -амілазної активності зводиться до описаної вище процедури.

Дія обох ферментів виражають у міліграмах гідролізованого крохмалю за умов досвіду (за 30 хв чи 1 год) на 1 р борошна (проростків). Активність β-амілази визначають по різниці між сумарною активністю α- та β-амілаз та активністю α-амілази. Активність амілаз на 1 г борошна за 1 год розраховують за такою формулою:

де D – оптична щільність контрольного розчину;

D 1 – оптична щільність дослідного розчину;

а – кількість внесеного крохмалю (60 мг);

m – маса навішування, г;

V - обсяг вихідної ферментної витяжки, см 3

V 1 - обсяг витяжки, взятої для інкубування, см 3 .

Лабораторна робота №6

©2015-2019 сайт
Усі права належати їх авторам. Цей сайт не претендує на авторства, а надає безкоштовне використання.
Дата створення сторінки: 2016-02-13

Лабораторна робота №1

Тема: Каталітична активність ферментів у живих клітинах

Ціль:виявити каталітичну функцію білків у живих клітинах, сформувати знання про роль ферментів у клітинах, закріпити вміння працювати з мікроскопом, проводити досліди та пояснювати результати роботи. Обладнання:сира і варена картопля, лист елодеї (іншої рослини), свіжий 3%-ний розчин пероксиду водню, пробірки, пінцет, пісок, ступка і маточка, зошит, ручка, простий олівець, лінійка.

Хід роботи:

Приготуйте дві пробірки, і помістіть в першу трохи піску, в другу - шматочок сирої картоплі, в третю - шматочок вареної картоплі Капніть в кожну з пробірок трохи пероксиду водню. Поспостерігайте, що відбуватиметься у кожній із пробірок.

Подрібніть у ступці шматочок сирої картоплі з невеликою кількістю піску.

Перенесіть подрібнену картоплю разом із піском у пробірку і капніть трохи пероксиду водню.

Порівняйте активність подрібненої та цілої рослинної тканини.

Складіть таблицю, що показує активність кожної тканини за різної обробки. Поясніть результати. Дайте відповідь на питання:

Спостереження

Перекис водню та сира картопля

Виділяється кисень, білок розпадається до первинної структуриі перетворюється на піну

Перекис водню та варена картопля

Реакції немає

Дайте відповідь на запитання: У яких пробірках виявилася активність ферменту каталази? Поясніть, чому.

Каталаза фермент, що каталізує реакцію розкладання перекису водню на воду та молекулярний кисень: Н2О2 + Н2О2 = О2 + 2Н2О. Біологічна рольполягає в деградації перекису водню, що утворюється в клітинах в результаті дії ряду флавопротеїнових оксидаз (ксантиноксидази, глюкозооксидази, моноаміноксидази та ін.), та забезпечення ефективного захисту клітинних структурвід руйнування під впливом перекису водню. Генетично обумовлена ​​недостатність К. є однією з причин так званої акаталазії - спадкового захворювання, що клінічно проявляється виразкою слизової оболонки носа і ротової порожнини, іноді різко вираженими атрофічними змінами альвеолярних перегородок та випаданням зубів. Активність виявилася на 1,3 пробірках, т.к. у них були сирі продукти, що містять білки. На інших пробірках були продукти з зруйнованим у процесі варіння білком і реакція не проявилася. Тому організмом краще засвоюються продукти, які містять білок.

Як проявляється активність ферменту в живих та мертвих тканинах?Поясніть явище, що спостерігається. У мертвих тканинах активність ферментів відсутня, т.к. білок у них був зруйнований при варінні. А у живих тканинах при взаємодії з перекисом водню виділявся кисень, а білок розщеплюючись до первинної структури перетворювався на піну.

Як впливає подрібнення тканини на активність ферменту у живих тканинах рослин та тварин?При подрібненні живої тканини реакція відбувається швидше, т.к. площа зіткнення білка та перекису водню збільшується Як би ви запропонували виміряти швидкість розкладання пероксиду водню? v=kc(a)c(b) де v є швидкістю хімічної реакції k – константа швидкості с – зміна концентрації Як ви вважаєте, чи всі живі організми містять фермент каталазу, що забезпечує розкладання пероксиду водню?

Відповідь обґрунтуйте. Так як це фермент класу оксидоредуктаз, він каталізує розкладання токсичного для живих клітин пероксиду водню на воду і кисень. Міститься у лізосомах. Можна зробити висновок, що міститься у всіх клітинах живих організмів. Поясніть свої спостереження. Сформулюйте висновок.

Висновок: білок міститься тільки в живих продуктах, а в варених продуктах зруйнований білок, тому ніякої реакції з ними не відбувається. Якщо ж подрібнити продукти, реакція буде проходити швидше.

Вступ

Цей посібник призначений для ознайомлення студентів як з класичними методами дослідження ферментів, так і з сучасними, високочутливими. аналітичними методами, що використовують ферменти як інструменти досліджень. Посібник складається з п'яти розділів:

1. Методи визначення активності ферментів.

2. Вивчення кінетичних властивостей ферментативних реакцій.

3. Методи виділення та очищення ферментів.

4. Вивчення субклітинної локалізації ферментів.

5. Використання ферментів як аналітичні реагенти.

Усі розділи «Практикума» мають самостійні завданняПроте вимоги, що пред'являються до студентів, залишаються однаковими. Кожна пропонована робота є невеликою експериментальне дослідження. За виконання будь-якої з них студент повинен самостійно підготувати всі необхідні розчини, освоїти необхідні методи дослідження, провести експеримент і оформити результати у вигляді звіту, ілюструючи отримані дані таблицями та графіками.

Рівень використовуваних методичних прийоміввідповідає вимогам сучасної науки. При необхідності в описі роботи наводяться короткі теоретичні відомості. Усі роботи, включені до «Практикуму», неодноразово виконувались студентами.

Робота 1. Титрометричне визначення активності каталази

Обладнання та реактиви: кипляча водяна баня; піпетки на 5, 10, 20 та 25 мл; циліндри вимірювальні з носиком на 10 та 25 мл; колба мірна на 100 мл; колби конічні на 200мл; ступка з маточкою порцелянові; перманганат калію (0,1н); сірчана кислота(10%); карбонат натрію; пероксид водню (0,1 н); свіжий рослинний матеріал (картопля чи морква).

2 г сирої картоплі (або моркви) розтирають у ступці, поступово додаючи 2-3 мл води. Для зменшення кислої реакції додають на кінчику шпателя карбонат натрію до припинення виділення бульбашок Вуглекислий газ. Розтерту масу кількісно переносять у мірну колбу та доводять водою до об'єму 100 мл. Суміш залишають стояти протягом 30 хвилин, після чого її відфільтровують. Далі визначають активність за схемою (2 дослідні проби та 2 контрольні):

Досвід та контроль титрують 0,1 н. розчин перманганату калію (до утворення стійкого протягом приблизно 1 хв блідо-рожевого забарвлення). Відзначають кількість розчину перманганату калію, що пішов на титрування пероксиду водню в дослідній колбі, що залишився (після ферментативного розкладання) і на титрування всього пероксиду водню в контрольній. По різниці між дослідним та контрольним титруванням знаходять кількість перманганату, еквівалентну кількості розкладеного ферментом пероксиду водню.

Розрахунок ведуть відповідно до рівняння реакції:

5H2O2 + 2KMnO4 + 3H2SO4 > 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2 + 8H2O,

згідно з яким 1 мл 0,1 н розчину перманганату калію відповідає 1,7 мг пероксиду водню.

Приклад розрахунку: з 1,25 г моркви приготована витяжка каталази об'ємом 100 мл: на титрування дослідної проби витрачено 15,5 мл, контрольної 30,2 мл 0,1 н розчину калію перманганату. Кількість розкладеного пероксиду водню в пробі еквівалентно (30,2 – 15,5) 14,7 мл 0,1 н. розчину перманганату калію і, отже, дорівнює (14,7 1,7) 24,99 мг. Значить, в 1 г сирої моркви міститься кількість каталази, здатне розкласти = 99, 96 мг пероксиду водню, а за 1 хв – (99,96:30) 3,33 мг. Так як 1 мкмоль пероксиду водню становить 0,034 мг, то в 1 г моркви є (3,33:0,034) 100 Е каталази.

1. Розрахуйте вміст каталази у досліджуваному матеріалі.

2. Напишіть систематичну назву даного ферменту, його код по систематичному каталогу та опишіть його біологічну роль.